一种巴曲酶的发酵培养基及发酵方法技术

本发明专利技术公开了一种重组巴曲酶的酵母发酵方法及使用的培养基，包括优化后基础发酵培养基，优化后甘油补料培养基以及优化后诱导培养基，发酵步骤主要包括一级种子培养、二级种子培养以及发酵培养，在发酵培养阶段，通过在培养基中补加多种营养成分，如甘油、casamino acids以及PTM1无机盐等，并调节合适的发酵培养基的pH值，通过甲醇诱导培养，极大的提高了发酵的重组蛋白的活性。本发明专利技术通过casamino acids的加入对发酵产物中蛋白酶的抑制作用，山梨醇与甲醇作为共用碳源提高目的蛋白表达的活性，经过后期的纯制备较高的巴曲酶重组蛋白，其活性基本能够达到与市售的天然巴曲酶类似的活性。似的活性。似的活性。

【技术实现步骤摘要】
一种巴曲酶的发酵培养基及发酵方法


[0001]本专利技术涉及生物工程领域，具体涉及一种巴曲酶的发酵培养基及发酵方法。

技术介绍

[0002]早在1963年Van Klobusitzky等就从巴西矛头蛇的毒液中纯化出一种酶性止血剂Batroxobin，在国内又称“巴曲酶”。它是一种单链糖蛋白，总氨基酸数为231个，分子量39～43kDa。巴曲酶属于丝氨酸蛋白酶类分子，是一种单链糖蛋白，它能专一作用于纤维蛋白原分子Aα链N末端的Arg16
‑
Gly17肽键，释放血纤维蛋白肽A，生成不稳定的可溶性纤维蛋白Ⅰ单体，进而交联聚合成纤维蛋白Ⅰ多聚体，促进出血部位血小板聚集产生止血效应，并激活血管内皮释放组织型纤维蛋白溶酶原激活物(t
‑
PA)，发挥抗血栓的作用。
[0003]随着血栓栓塞性疾病患者的增加，抗血栓药物的研制已成为热点之一。人们一方面采用分子生物学技术对现有药物进行分子结构改造，以期获得更为优良的溶栓药物。另一方面，积极的寻找一些安全性好、疗效好、副作用小的天然来源的溶栓药物。据报道，巴曲酶在临床上已本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于重组巴曲酶发酵的培养基，包括：优化基础发酵培养基、优化甘油补料培养基以及优化甲醇诱导培养基，其特征在于，所述优化基础发酵培养基组分：K2SO4：0.91％；MgSO4：0.36％；CaSO
4.2
H2O：0.059％；85％H3PO4：2.5％(V/V)；KOH：0.206％；甘油：4％；泡敌：0.05％
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0.1％；PTM1：0.4％(V/V)，casamino acids：0.5％；所述优化甘油补料培养基组分：50％甘油+12mL/L PTM1+0.5％casamino acids；所述优化甲醇诱导培养基组分：(100％甲醇+12mL/L PTM1)95％+4.5％山梨醇+0.5％casamino acids。2.一种巴曲酶的发酵方法，其特征在于，包括如下步骤：1)一级种子培养，取保存菌株接种至一级种子培养基中，所述一级种子培养基配方为：酵母粉，1.0％；聚蛋白胨2.0％；葡萄糖，2.0％，采用纯化水配制后灭菌备用；2)二级种子培养，在无菌的条件下，一级种子液接入含有二级培养基的种子罐中，接种比例为5％
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11％，所述二级种子培养基为配方为：酵母粉，1.0％；聚蛋白胨2.0％；葡萄糖，2.0％，采用纯化水配制后灭菌备用；3)发酵培养，待二级种子液OD600在5
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7之间，在无菌的条件下加入优化基础发酵培养基(4ml/L)至发酵罐中，在无菌的条件下将二级种子液移入发酵罐中，培养4小时后，向发酵罐中优化甘油补料培养基，并调...

【专利技术属性】
技术研发人员：李晴，陈维，张燕，唐芳，关录凡，李郑武，
申请(专利权)人：上海腾瑞制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：