一种小鼠肝S9的诱导剂及其诱导方法技术

本发明专利技术公开了一种小鼠肝S9的诱导剂及其诱导方法。所述包括氰双苯丙烯酸辛酯和乙环唑；并通过优化实验得到了最适的诱导剂剂量以及诱导时间，得到了一种有效诱导肝S9的方法；实验结果表明本发明专利技术所述的小鼠肝S9的诱导方法，对表达化学物质典型代谢酶均有较强的诱导作用，尤其对传统诱导方法中无诱导作用的代谢酶2E、2C、4A具有诱导作用。而且本发明专利技术的诱导剂方法经济、易得，适用于工业化学品、药物和环境化学物安全性评价。化学物安全性评价。

【技术实现步骤摘要】
一种小鼠肝S9的诱导剂及其诱导方法


[0001]本专利技术属于蛋白酶学领域，尤其是涉及一种小鼠肝S9的诱导剂及其诱导方法。

技术介绍

[0002]在化学物质致突变、致癌等安全性评价试验中，相当部分化学物质需经代谢活化才能引起致突变、致癌作用，因此在新药或新化学物质的非临床安全性评价中，体外短期试验应采用适当的活化系统。小鼠肝S9是小鼠肝组织匀浆液的去线粒体上清液，包含了大量化学物质代谢酶，常作为体外试验的生物转化活化系统。传统使用的体外代谢活化系统是大鼠诱导肝S9，其诱导剂有两种：一是多氯联苯混合物，因其致癌性强，严重污染环境，许多国家已禁止生产，作为科研试剂价格昂贵；另一种是苯巴比妥和β
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萘黄酮联用，苯巴比妥作为麻醉剂购买受到严格管控。另外，经典诱导剂还存在一个主要问题，对化学物质代谢活化起主要作用的细胞色素P450(cytochrome P450，CYP)亚型2E、2C、4A无诱导作用。

技术实现思路

[0003]本专利技术第一方面的目的，在于提供一种诱导剂。
[0004]本专利技术第二方面的目的，在于提供上述诱导剂的应用。
[0005]本专利技术第三方面的目的，在于提供一种小鼠肝S9的诱导方法。
[0006]本专利技术第四方面的目的，在于提供上述诱导方法在制备小鼠肝S9中的应用。
[0007]本专利技术所采取的技术方案是：
[0008]本专利技术的第一方面，提供一种鼠肝S9诱导剂，所述鼠肝S9诱导剂包含氰双苯丙烯酸辛酯和乙环唑。
>[0009]在本专利技术的一些实施方式中，所述鼠肝S9诱导剂中的氰双苯丙烯酸辛酯和乙环唑为相互独立的。在使用时，先使用氰双苯丙烯酸辛酯进行诱导，然后使用乙环唑进行诱导。
[0010]本专利技术的第二方面，提供本专利技术第一方面所述诱导剂在诱导小鼠肝S9中或制备诱导小鼠肝S9中的应用。
[0011]在本专利技术的一些实施方式中，所述鼠肝S9诱导剂中的氰双苯丙烯酸辛酯和乙环唑为相互独立的。在使用时，先使用氰双苯丙烯酸辛酯进行诱导，然后使用乙环唑进行诱导。
[0012]本专利技术的第三方面，提供一种小鼠肝S9的诱导方法，包括以下步骤：先使用本专利技术第一方面所述的诱导剂中的氰双苯丙烯酸辛酯给予小鼠进行诱导，然后再使用乙环唑进行诱导，即可。
[0013]在本专利技术的一些实施方式中，所述氰双苯丙烯酸辛酯的给药剂量为50
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100mg/kg，连续给药诱导2～4天。
[0014]在本专利技术的一些实施方式中，所述氰双苯丙烯酸辛酯给药方式为经口给药。
[0015]在本专利技术的一些实施方式中，所述经口给药包括口服给药和灌胃给药。
[0016]在本专利技术的一些实施方式中，所述经口给药为灌胃给药。
[0017]当然，本领域技术人员也可以根据实际使用需求，根据实验动物的选择，合理选择
其他经口给药方式进行给药。
[0018]在本专利技术的一些实施方式中，所述乙环唑的给药剂量为3～5mg/kg，给药诱导2～4天。
[0019]在本专利技术的一些实施方式中，所述乙环唑的给药方式为注射给药。
[0020]在本专利技术的一些实施方式中，所述注射给药包括静脉注射、肌肉注射、皮下注射、腹腔注射、关节内注射、结膜下腔注射和硬膜外注射。
[0021]在本专利技术的一些实施方式中，所述注射给药为腹腔注射。
[0022]当然，本领域技术人员也可以根据实际使用需求，根据实验动物的选择，合理选择其他注射给药方式进行给药。
[0023]在本专利技术的一些实施方式中，小鼠为6
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8周雄性小鼠。
[0024]本专利技术的第四方面，提供本专利技术第三个方面所述的诱导方法在制备小鼠肝S9中的应用。
[0025]在本专利技术的一些实施方式中，所述小鼠肝S9的制备方法包括：
[0026]取按照本专利技术第三个方面所述的诱导方法诱导处理后的小鼠肝脏，剪碎后加入缓冲液制成肝匀浆，离心后，上清液即为小鼠肝S9
[0027]在本专利技术的一些实施方式中，具体于末次给药20～28h后处死小鼠。
[0028]在本专利技术的一些实施方式中，取出肝脏之前需除去肝中残血。
[0029]在本专利技术的一些实施方式中，所述除去肝中残血的方法包括使用缓冲液灌洗肝脏。
[0030]在本专利技术的一些实施方式中，所述缓冲液为0.1～0.2mol/L KCl缓冲液(pH 7～8)。
[0031]在本专利技术的一些实施方式中，步骤(b)中缓冲液的添加量为肝脏湿重比2～4倍。
[0032]在本专利技术的一些实施方式中，所述缓冲液需预冷。
[0033]在本专利技术的一些实施方式中，所述离心的条件包括：2～6℃，8000～10000g，15～25min。
[0034]本专利技术的有益效果是：
[0035]本专利技术提供了一种可用于诱导肝S9的诱导剂，包括氰双苯丙烯酸辛酯和乙环唑；并通过优化实验得到了最适的诱导剂剂量以及诱导时间，得到了一种有效诱导肝S9的方法；实验结果表明本专利技术所述的小鼠肝S9的诱导方法，对表达化学物质典型代谢酶均有较强的诱导作用，尤其对传统诱导方法中无诱导作用的代谢酶2E、2C、4A具有诱导作用。而且本专利技术的诱导剂方法经济、易得，适用于工业化学品、药物和环境化学物安全性评价。
附图说明
[0036]图1为应用本专利技术实施例中诱导方法和传统诱导方法获得鼠肝S9在细菌回复突变试验中的应用结果，其中，TA97、TA98、TA100、TA102、TA1535表示测试菌种，2AF表示2
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氨基芴，...表示NMDA。
[0037]图2为应用本专利技术诱导方法和传统诱导方法获得的鼠肝S9的代谢酶CYP1A、CYP2B、CYP2C基因表达诱导倍数。
[0038]图3为应用本专利技术诱导方法和传统诱导方法获得的鼠肝S9的代谢酶CYP1A、CYP2B、
CYP2C、CYP2E、CYP3A、CYP4A基因表达诱导倍数。
具体实施方式
[0039]以下将结合实施例对本专利技术的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本专利技术的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本专利技术的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本专利技术的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本专利技术保护的范围。
[0040]试验材料
[0041]在本专利技术实施例中，所用的氰双苯丙烯酸辛酯、乙环唑、β
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萘黄酮、2
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氨基芴、N
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亚硝基二甲胺均购自SIGMA公司。
[0042]本专利技术下述实施例中建立的一种小鼠肝S9的诱导方法，对表达化学物质典型代谢酶均有较强的诱导作用。
[0043]实施例1：诱导剂剂量的选择
[0044]随机选择6
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8周龄雄性小鼠21只，使用时已在动物室适应并检疫观察1周；将21只小鼠按体重分层随机分配到7组中，每组3只。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鼠肝S9诱导剂，所述鼠肝S9诱导剂包含氰双苯丙烯酸辛酯和乙环唑。2.权利要求1所述的诱导剂在诱导小鼠肝S9或制备诱导小鼠肝S9的产品中的应用。3.一种小鼠肝S9的诱导方法，其特征在于，包括以下步骤：先使用权利要求1所述的诱导剂中的氰双苯丙烯酸辛酯给予小鼠进行诱导，然后再使用乙环唑进行诱导，即可。4.根据权利要求3所述的诱导方法，其特征在于，所述氰双苯丙烯酸辛酯的给药剂量为50
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100mg/kg，连续给药诱导2～4天。5.根据权利要求4所述的诱导方法，其特征在于，所述氰双苯丙烯酸辛酯给药方式为经口给药。6.根据权利要求3所述的诱导...

【专利技术属性】
技术研发人员：李海山，陈会明，周丽丽，
申请(专利权)人：中国检验检疫科学研究院粤港澳大湾区研究院，
类型：发明
国别省市：