【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，更具体地，涉及黑果枸杞源性成分检测的引物组及其应用。
技术介绍
1、黑果枸杞(lycium ruthenicum murr.)蒙名为“乔诺英—哈尔马格”、藏药名“旁玛”，属于茄科枸杞属。黑果枸杞为多棘刺灌木，多分枝，枝条坚硬，常呈之字形弯曲，白色，分布于中国陕西省、甘肃省、青海省、宁夏回族自治区、新疆维吾尔自治区及西藏自治区和欧洲中亚。
2、黑果枸杞味甘、性平，富含蛋白质、枸杞多糖、氨基酸、维生素、矿物质、微量元素等多种营养成分。黑果枸杞原浆是通过浸泡黑果枸杞原始果实，提取果实汁液和果肉，然后经过生物发酵加工制成的。与黑果枸杞相比，黑果枸杞原浆作为一种液体饮品，味道更加浓郁，口感更加清爽。并且，黑果枸杞原浆内富含多种多酚类化合物，其中包括红枣苷、类胡萝卜素、花青素和黄酮等，具有抗氧化、改善免疫力、减轻疲劳等功能。黑果枸杞中富含红果枸杞没有的黑果色素，黑果色素是一种天然原花青素(opc)，黑果枸杞是迄今为止发现的opc含量最高的天然野生植物，每100克黑果枸杞含有3690毫克opc，而每100克蓝莓中仅含有330～3380毫克opc。opc是一种非常有效的天然水溶性自由基清除剂，其功效相当于vc的20倍和ve的50倍。
3、因此，含有黑果枸杞果汁或黑果枸杞原浆的饮品已成为现代主要的营养品，由于黑果枸杞产品需求远远超过供应，导致其价格昂贵，使得市场上频繁出现黑果枸杞产品造假事件，例如使用白刺果、蓝莓果或其他类似的果实染色来冒充黑果枸杞产品。黑果枸杞产品掺假成为食品监管的重要问题，然而，目前
技术实现思路
1、本专利技术的目的是为了克服现有技术的不足，提供黑果枸杞源性成分检测的引物组、试剂盒及检测方法。
2、本专利技术的第一个目的是提供一组检测黑果枸杞源性成分的实时荧光定量pcr引物组。
3、本专利技术的第二个目的是提供一种黑果枸杞源性成分的检测试剂盒。
4、本专利技术的第三个目的是提供一种黑果枸杞源性成分的定性检测方法。
5、为了实现上述目的，本专利技术是通过以下技术方案予以实现的：
6、一组检测黑果枸杞源性成分的实时荧光定量pcr引物组，包括正向引物核苷酸序列如seq id no：1所示的正向引物和核苷酸序列如seq id no：2所示的反向引物。
7、优选地，所述实时荧光定量pcr引物组还含有核苷酸序列如seq id no：3所示的探针序列。
8、更优选地，所述探针序列的3’端连接有淬灭基团，5’端连接有一个荧光基团。
9、最优选地，所述淬灭基团为tamra；所述荧光基团为fam。
10、所述实时荧光定量pcr引物组在制备检测黑果枸杞源性成分的检测试剂盒中的应用也应在本专利技术的保护范围之内。
11、一种黑果枸杞源性成分的检测试剂盒，所述检测试剂盒中包括所述实时荧光定量pcr引物组。
12、优选地，所述实时荧光定量pcr引物组的正向引物核苷酸序列如seq id no：1所示，反向引物核苷酸序列如seq id no：2所示，探针序列的核苷酸序列如seq id no：3所示。
13、更优选地，所述探针序列的3’端连接有一个荧光淬灭基团tamra，5’端连接有一个荧光报告基团fam。
14、优选地，所述检测试剂盒的反应体系包含阳性对照品、阴性对照品、实时荧光pcr反应混合液和无菌水。
15、更优选地，所述阳性对照品中含黑果枸杞dna，所述阴性对照品中含枸杞子dna、蓝莓dna、白刺果dna、沙棘dna、黑加仑dna、夏黑葡萄dna或黑树莓dna中的一种或多种。
16、最优选地，所述阴性对照品中含蓝莓dna。
17、最优选地，所述检测试剂盒的反应体系包含实时荧光pcr反应混合液、10μmol/l核苷酸序列如seq id no：1所示的正向引物、10μmol/l核苷酸序列如seq id no：2所示的反向引物和10μmol/l核苷酸序列如seq id no：3所示的探针序列。
18、作为具体实施的参考方案，所述检测试剂盒的单次反应中包含：待测样品dna5μl、实时荧光pcr反应混合液12.5μl、10μmol/l核苷酸序列如seq id no：1所示的正向引物0.5μl、10μmol/l核苷酸序列如seq id no：2所示的反向引物0.5μl、10μmol/l核苷酸序列如seqid no：3所示的探针序列0.5μl和无菌水6μl。
19、一种黑果枸杞源性成分的定性检测方法，所述定性检测方法包括以下步骤：
20、s1.提取待测样品dna；
21、s2.以步骤s1得到的待测样品dna为模板，使用所述的实时荧光定量pcr引物组进行荧光定量pcr反应；
22、s3.若待测样品无s形扩增曲线出现，待测样品中不含黑果枸杞源性成分；若待测样品有s形扩增曲线出现，待测样品中含有黑果枸杞源性成分。
23、优选地，步骤s2所述实时荧光定量pcr的反应体系中还包含实时荧光pcr反应混合液和无菌水。
24、具体地，步骤s2所述实时荧光定量pcr反应体系中包含正向引物核苷酸序列如seqid no：1所示，反向引物核苷酸序列如seq id no：2所示，探针序列的核苷酸序列如seq idno：3所示、实时荧光pcr反应混合液和/或无菌水中的一种或几种。
25、更优选地，步骤s2所述实时荧光定量pcr反应体系中包含实时荧光pcr反应混合液、10μmol/l核苷酸序列如seq id no：1所示的正向引物、10μmol/l核苷酸序列如seq idno：2所示的反向引物和10μmol/l核苷酸序列如seq id no：3所示的探针序列。
26、作为具体实施的参考方案，步骤s2所述实时荧光定量pcr反应体系的单次反应中包含：待测样品dna 5μl、实时荧光pcr反应混合液12.5μl、10μmol/l核苷酸序列如seq idno：1所示的正向引物0.5μl、10μmol/l核苷酸序列如seq id no：2所示的反向引物0.5μl、10μmol/l核苷酸序列如seq id no：3所示的探针序列0.5μl和无菌水6μl。
27、优选地，步骤s2所述实时荧光定量pcr反应的条件为：50℃2min；95℃预变性5～10min；95℃15s，55～60℃1min，40～50个循环。
28、更优选地，步骤s2所述实时荧光定量pcr反应的条件为：50℃2min；95℃10min；95℃15s，60℃1min，共40个循环。
29、优选地，步骤s2中，以黑果枸杞dna为阳性模板，配制阳性实时荧光定量pcr反应体系，以无菌水为空白模板，配制空白实时荧光定量pcr反应体系，以蓝莓dna为阴性模板，配制阴性实时荧光定量本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一组检测黑果枸杞源性成分的实时荧光定量PCR引物组，其特征在于，包括正向引物核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示的反向引物。
2.根据权利要求1所述的实时荧光定量PCR引物组，其特征在于，还含有核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示的探针序列。
3.根据权利要求2所述的实时荧光定量PCR引物组，其特征在于，所述探针序列的3’端连接有淬灭基团，5’端连接有荧光基团。
4.权利要求1～3任一所述的实时荧光定量PCR引物组在制备黑果枸杞源性成分的检测试剂盒中的应用。
5.一种黑果枸杞源性成分的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒中包括权利要求1～3任一所述的实时荧光定量PCR引物组。
6.根据权利要求5所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒的反应体系包含阳性对照品、阴性对照品、实时荧光PCR反应混合液和/或无菌水中的一种或几种。
7.根据权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于，所述阳性对照品中含黑果枸杞DNA，所述阴性对照品中含枸杞子DNA、蓝莓DNA
8.一种黑果枸杞源性成分的定性检测方法，其特征在于，所述定性检测方法包括以下步骤：
9.根据权利要求8所述的定性检测方法，其特征在于，步骤S2所述实时荧光定量PCR的反应体系中还包含实时荧光PCR反应混合液和无菌水。
10.根据权利要求8所述的定性检测方法，其特征在于，步骤S3所述实时荧光定量PCR反应的条件为：50℃2min；95℃5～10min；95℃15s，55～60℃1min，40～50个循环。
...【技术特征摘要】
1.一组检测黑果枸杞源性成分的实时荧光定量pcr引物组，其特征在于，包括正向引物核苷酸序列如seq id no：1所示的正向引物和核苷酸序列如seq id no：2所示的反向引物。
2.根据权利要求1所述的实时荧光定量pcr引物组，其特征在于，还含有核苷酸序列如seq id no：3所示的探针序列。
3.根据权利要求2所述的实时荧光定量pcr引物组，其特征在于，所述探针序列的3’端连接有淬灭基团，5’端连接有荧光基团。
4.权利要求1～3任一所述的实时荧光定量pcr引物组在制备黑果枸杞源性成分的检测试剂盒中的应用。
5.一种黑果枸杞源性成分的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒中包括权利要求1～3任一所述的实时荧光定量pcr引物组。
6.根据权利要求5所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试...
【专利技术属性】
技术研发人员：王云帆，蔡亚杰，刘鸣畅，杨艳歌，孔令梁，袁坤，胡凤杨，周敏，
申请(专利权)人：中国检验检疫科学研究院粤港澳大湾区研究院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。