一种高密度长期培养动物细胞表达重组蛋白的方法技术

本发明专利技术公开了一种高密度长期培养动物细胞表达重组蛋白的方法，使用微载体培养动物细胞，并使之处于悬浮、不间断的流动状态，使用连续灌注的培养方式，避免了细胞代谢废物的积累，达到细胞高密度、长时间生长的目的，并且重组蛋白的产量也得到了较高的提升；并在细胞截留换液操作中每隔一段时间对中空纤维柱进行一次反向冲洗操作，然后继续进行悬浮细胞的截留浓缩，截留浓缩的过程结束后，补充新鲜培养基的同时对中空纤维柱再一次进行由膜外向膜内的反向冲洗操作，使中空纤维柱内部的培养液体始终处于流动状态，有效防止细胞碎片对膜的堵塞。堵塞。

【技术实现步骤摘要】
一种高密度长期培养动物细胞表达重组蛋白的方法


[0001]本专利技术涉及高密度长期培养动物细胞
，尤其涉及一种高密度长期培养动物细胞表达重组蛋白的方法。

技术介绍

[0002]目前用于制备基因工程药物的表达系统包括原核表达系统和真核表达系统。原核表达系统主要指大肠杆菌表达系统，它具有表达水平高、操作简单、周期短、易于大规模高密度培养、成本低等优点。但对于抗体和糖蛋白类生物药物来说，表达产物多肽链的折叠、二硫键的形成、糖基化的有无、以及糖基化的类型常常影响表达产物的合成，以及免疫原性等特性；而原核细胞缺少内质网和高尔基体等可用于进行糖基化的结构和机制，所表达的产物是非糖基化的，因此大肠杆菌表达系统不适于表达全抗体和糖蛋白类药物。真核表达系统包括酵母表达系统、昆虫及植物、哺乳动物细胞等真核细胞表达系统。目的基因在哺乳动物细胞中表达的蛋白与天然蛋白的结构、糖基化类型和方式几乎相同且能正确组装成多亚基蛋白，并且哺乳动物细胞能以悬浮培养或在无血清的培养基中达到高密度且培养体积能达到2000L以上，因此在表达这一类蛋白药物时人们往往首选哺乳动物细胞表本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高密度长期培养动物细胞表达重组蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一，将表达重组蛋白的CHO细胞进行复苏培养，然后接种进行扩增培养；步骤二，在细胞增殖阶段的细胞截留换液操作：起始置换体积为30％
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40％培养体积/天，缓慢增加，待细胞达到所需密度或增殖停止时换液速率稳定，稳定后的培养液置换体积为75％培养体积/天；步骤三，重组蛋白表达阶段，控培养参数：温度为36.5
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36.7℃、pH为7.2
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7.4、DO为60
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70％空气饱和度；控制细胞密度的稳定；在所述重组蛋白表达阶段的细胞截留换液操作中，换液速率控制稳定，并在培养液中添加促进表达的物质，所述促进表达的物质为0.2％糖基化位点添加剂、4
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8mmol/L谷氨酰胺；其中，在所述细胞截留换液操作中，每隔10
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20分钟对中空纤维柱进行一次反向冲洗操作，操作过程为3
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10分钟，然后继续进行悬浮细胞的截留浓缩，所述截留浓缩的过程结束后，补充新鲜培养基的同时对中空纤维柱再一...

【专利技术属性】
技术研发人员：关录凡，王书生，颜丹燕，
申请(专利权)人：上海腾瑞制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：