一种大鼠克罗恩病模型的构建方法技术

本发明专利技术提供了一种大鼠克罗恩病模型的构建方法，包括分两次向大鼠结肠内注入2,4,6

【技术实现步骤摘要】
一种大鼠克罗恩病模型的构建方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种大鼠克罗恩病模型的构建方法。

技术介绍

[0002]炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)是一类由遗传、感染、免疫或环境因素等多种病因引起的、异常免疫介导的肠道慢性炎症性疾病，有终生复发倾向。溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)和克罗恩病(Crohn disease，CD)是其主要的类型。
[0003]克罗恩病多见于15～30岁，首次发作可出现在任何年龄组，男女发病率无明显差别。近年来，我国克罗恩病患病率有增加趋势，其属一种病因不明确的胃肠道慢性非特异性、溃疡、坏死性验证，常伴有炎性肉芽肿性疾病，临床以腹痛、腹泻、腹块、瘘管形成和肠梗阻为特点，可伴有发热、贫血、营养障碍以及关节、皮肤、眼、口腔黏膜、肝脏等肠外损害。因此，克罗恩病严重威胁着人们的健康，但是目前尚无根治CD的有效方法，因其病因尚不明晰，诱因复杂，又具有反复发作的特点，给治疗带来了更多的难度。
[0004]动物模型的构建为疾病的机理研究和治疗药物筛选提供了很好的手段。目前研究克罗恩病发病机制和评价治疗效果的比较理想的模型制备方法是参照Morris于1984年首创的2,4,6
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三硝基苯磺酸(TNBS)动物模型，基于此，研究人员在Morris的方法基础上对使用TNBS进行大鼠克罗恩病模型构建进行了诸多研究，目前最常用的手段是对大鼠灌肠给予TNBS乙醇溶液，利用乙醇清除粘液层从而削弱结肠粘膜屏障，便于药物进入肠道粘膜，而作为半抗原物质TNBS进入结肠粘膜后与组织蛋白共同形成抗原物质致使细胞活化，从而激活获得性免疫反应，最终引发肠道炎症。TNBS作为一种化学性半抗原，能够与组织蛋白结合形成完全抗原，从而介导细胞免疫反应，诱导形成CD。
[0005]然而，目前报道的以TNBS对大鼠灌肠构建克罗恩病模型的方法，仍存在TNBS给药剂量大、动物死亡率高等缺点。例如，张弛等人对诱导大鼠克罗恩病模型的TNBS和乙醇的浓度进行了筛选，在多种不同的浓度下，连续4周每周按照100～150mg/kg的TNBS剂量灌肠一次，建模的过程中，大鼠死亡率高达30％以上(张驰,肖玲,刘涛,王园园,张国山,刘密.克罗恩病大鼠模型制备最佳TNBS与乙醇浓度的筛选实验[J].中国中医药现代远程教育,2018,16(18):72
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75.)。此外，现有的让大鼠自由饮用TNBS溶液单次诱导克罗恩病的建模方式对病症程度、模型一致性的控制、以及动物模型与人类实际CD疾病的相似性也有待进一步提高。
[0006]因此，进一步探索大鼠死亡率低、模型一致性高、与人类实际克罗恩病疾病更接近的大鼠克罗恩病疾病模型，具有非常重要的临床研究意义。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种大鼠死亡率低、模型一致性高、与人类实际克罗恩病疾病更接近的大鼠克罗恩病模型。
[0008]本专利技术提供了一种大鼠克罗恩病模型的构建方法，包括如下步骤：
[0009](1)第一次给药：按照70～80mg/kg的TNBS的剂量，用TNBS与无水乙醇的混合液对大鼠灌肠，TNBS与无水乙醇的体积比为(1～3):1；
[0010](2)第二次给药：第一次给药后的第6天，再次按照120～130mg/kg的TNBS的剂量，用TNBS与无水乙醇的混合液对大鼠灌肠，TNBS与无水乙醇的体积比为(1～3):1。
[0011]进一步地，步骤(1)所述给予TNBS的剂量为70mg/kg。
[0012]进一步地，步骤(1)所述TNBS与无水乙醇的体积比为1:1。
[0013]进一步地，步骤(2)所述给予TNBS的剂量为125mg/kg。
[0014]进一步地，步骤(2)所述TNBS与无水乙醇的体积比为1:1。
[0015]更进一步地，上述大鼠在第一次给药前禁食不禁水24h。
[0016]更进一步地，上述大鼠在第一次给药前进行麻醉，并用PBS灌肠清洗肠道。
[0017]更进一步地，上述大鼠在每次给药后倒立姿势维持30s，每次给药后自由饮水进食。
[0018]本专利技术还提供上述的方法构建得到的大鼠克罗恩病模型在克罗恩病疾病研究中的应用，所述研究是以非疾病的诊断或治疗为目的；
[0019]进一步地，上述研究是筛选防治克罗恩病的药物的研究，或克罗恩病炎症机制的研究。
[0020]本专利技术的有益效果：
[0021]本专利技术分多次、低浓度对大鼠进行TNBS给药诱导，构建得到大鼠克罗恩病模型，大鼠死亡率低，模型可重复性强、一致性好，并且与人类克罗恩病疾病更为接近，在临床上用于克罗恩病机理和药物筛选等研究具有非常好的应用潜能。
[0022]显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0023]以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。
附图说明
[0024]图1为试验周期内各组动物体重变化曲线；数据均采用平均值(Mean)
±
标准差(SD)进行统计分析(空白对照组n＝3，模型组n＝7)。
[0025]图2为试验周期内各组动物DAI评分统计图；数据均采用平均值(Mean)
±
标准差(SD)进行统计分析(空白对照组n＝3，模型组n＝7)。
[0026]图3为试验周期终点各组动物局部中性粒细胞引起炎症的统计图；所有个体数据均采用平均值(Mean)
±
标准差(SD)进行统计分析，(空白对照组n＝3，模型组n＝7)。
[0027]图4为试验周期终点各组动物结肠组织损伤病理图。
具体实施方式
[0028]本专利技术大鼠为SD大鼠，购自北京维通利华实验技术有限公司；生产许可证号：SCXK(浙)2019
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0001。
[0029]除另有说明外，所用原料与设备均为已知产品，通过购买市售产品所得。
[0030]实施例1、本专利技术大鼠克罗恩病模型的构建
[0031]1)模型构建前实验动物禁食不禁水24h；
[0032]2)将大鼠放入充满3.0％异氟烷的麻醉诱导盒进行麻醉诱导，经过麻醉诱导的动物转移至操作台上；
[0033]3)使用小动物气体麻醉机以2.0％～2.5％异氟烷按200mL/min进行麻醉维持，观察大鼠眼睑反射和痛觉反应，在眼睑反射反应及四肢和尾部痛觉反应消失后将大鼠按仰卧姿势固定于操作台上；
[0034]4)橡胶软管均匀涂抹凡士林轻柔缓慢由肛门插入至结肠内约8cm处，注入1mL PBS清洗肠道；
[0035]5)D1将TNBS与无水乙醇等体积混合，按TNBS 75本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种大鼠克罗恩病模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)第一次给药：按照70～80mg/kg的TNBS的剂量，用TNBS与无水乙醇的混合液对大鼠灌肠，TNBS与无水乙醇的体积比为(1～3):1；(2)第二次给药：第一次给药后的第6天，再次按照120～130mg/kg的TNBS的剂量，用TNBS与无水乙醇的混合液对大鼠灌肠，TNBS与无水乙醇的体积比为(1～3):1。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述给予TNBS的剂量为70mg/kg。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述TNBS与无水乙醇的体积比为1:1。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述给予TNBS的剂量为125mg/kg...

【专利技术属性】
技术研发人员：许韬韬，胡佳，张晓利，张诗涵，张利，于源，
申请(专利权)人：成都海枫生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：