【技术实现步骤摘要】
一种同时检测尿液中多种蛋白的分析方法
[0001]本专利技术涉及蛋白提取纯化领域,尤其涉及一种同时检测尿液中多种蛋白的分析方法。
技术介绍
[0002]早期肾脏疾病筛查往往需要检测尿液中的尿白蛋白(HSA)、尿转铁蛋白(TRF)、尿视黄醇结合蛋白(RBP4)、尿α1微球蛋白(A1M)、尿β2微球蛋白(B2M)、NAG等标记物,这些指标是肾小球、肾小管、近曲小管早期损伤和早期糖尿病肾病的敏感指标。在临床诊断过程中,往往各种尿液蛋白都需要检测一遍以进行筛查和诊断。但受限于检测方法,每个标记物都需要单独进行一次检测,不仅费时费力费钱,而且由于操作量大,更容易造成样本污染、操作错误,从而使检测结果不准确,导致不能准确诊断。
[0003]从文献调研的结果来看,分析测定尿液中一种至三种理化性质差别较大的蛋白的难度较低,但是同时分离尿液中多种蛋白需要更复杂的分离技术。目前,常用的主要有电泳技术、高度集成的蛋白生化分析技术、化学发光技术、质谱技术等,其中电泳技术操作繁琐、干扰因素多、结果不稳定、无法定量分析;生化分析技术的伪浊度会造成定量结果的不准确性,且不同种类的蛋白通常需分别检测;化学发光技术复杂,成本高;质谱技术仪器设备昂贵且依靠进口,使用操作难度高。
[0004]因此,现在亟需一种可以简单、快速、经济、准确同时检测分离尿液中多种蛋白的分析方法。
技术实现思路
[0005]为解决上述技术问题,本专利技术提供了一种可以同时检测尿液中多种蛋白的分析方法,该方法对尿液样品处理简便,可以快速、准确地检测 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种同时检测尿液中多种蛋白的分析方法,其特征在于,包括如下步骤:1)过滤:用亲水性MCE滤膜过滤尿液,得到滤液1;2)第一次固相萃取:将所述滤液1经过含葡聚糖的体积排柱凝胶柱处理,得到滤液2;3)第二次固相萃取:将所述滤液2经过以含有
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N
+
(CH3)3官能团的多孔亲水性聚甲基丙烯酸酯为基质的阴离子交换柱处理,得到滤液3;4)高效阴离子液相色谱分析:用含有
‑
N
+
(CH3)3官能团的无孔树脂填料的阴离子交换柱检测滤液3,洗脱方式采用含Cl
‑
的Tris梯度流动相。2.根据权利要求1所述的一种同时检测尿液中多种蛋白的分析方法,其特征在于,所述蛋白为白蛋白、转铁蛋白、视黄醇结合蛋白、β2微球蛋白、α1微球蛋白中的一种或多种。3.根据权利要求1所述的一种同时检测尿液中多种蛋白的分析方法,其特征在于,所述亲水性MCE滤膜的孔径为0.22微米。4.根据权利要求1所述的一种同时检测尿液中多种蛋白的分析方法,其特征在于,所述体积排柱凝胶柱为Hitrap
TM
Desalting,5mL,cytiva。5.根据权利要求4所述的一种同时检测尿液中多种蛋白的分析方法,其特征在于,所述第一次固相萃取的具体方法为:置换:用25mLTris
‑
HCl缓冲液A(20mMTris
‑
HCl,pH=8.0)完全置换所述体积排柱凝胶柱中的乙醇溶液平衡:5.0mLTris
‑
HCl缓冲液C(20mMTris
‑
HCl,25mMNaCl,pH=8.0)上样:以1.5mL计的所述滤液1洗脱:2.0mL所述Tris
‑
HCl缓冲液C,收集洗脱液即为所述滤液2流速:1.0
‑
10.0mL/min柱温:室温。6.根据权利要求1所述的一种同时检测尿液中多种蛋白的分析方法,其特征在于,所述第二次固相萃取的阴离子交换柱为MonomixMab60<...
【专利技术属性】
技术研发人员:贡文秀,黄学英,
申请(专利权)人:苏州赛分科技股份有限公司,
类型:发明
国别省市:
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