一种拉莫三嗪有关物质的检测方法技术

本发明专利技术涉及药物分析领域，具体公开一种拉莫三嗪有关物质的检测方法。所述检测方法，采用高效液相色谱法进行，高效液相色谱法的色谱条件为：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶柱；所述色谱柱的规格为4.6

【技术实现步骤摘要】
一种拉莫三嗪有关物质的检测方法


[0001]本专利技术涉及药物分析领域，尤其涉及一种拉莫三嗪有关物质的检测方法。

技术介绍

[0002]拉莫三嗪（lamotrigine）在药物属性上属苯基三嗪类化合物，由葛兰素
·
史克公司开发，于1994年2月获美国FDA批准，临床上用于治疗癫痫。拉莫三嗪是一种电压门控式钠离子通道阻滞剂，为广谱抗癫癎药，广泛用于控制各种类型的癫癎发作。拉莫三嗪作为新型抗癫痫药，在临床上可单独使用也可联合使用，疗效显著，基本上没有致畸性。
[0003]拉莫三嗪在原料生产、制剂贮存过程中均可能引入杂质，在合成拉莫三嗪原料药中可能引入工艺杂质，比如2，3
‑
二氯苯甲酸（EP杂质E；USP有关物质B）；在拉莫三嗪制剂储存过程中可能产生一些降解杂质，如2，3
‑
二氯苯甲酸（EP杂质 E；USP有关物质 B）、3
‑
氨基
ꢀ‑6‑
（2，3
‑
二氯苯基）
‑
1，2，4
‑
三嗪
ꢀ‑5‑
（4H）
‑
酮（EP杂质A；USP有关物质C）、6
‑
（2，3
‑
二氯苯基）
‑
1，2，4
‑
三嗪
ꢀ‑
3，5
‑
（2H，4H）
‑
二酮（EP杂质 D；USP未收载）等，各国药典与国内标准对杂质的命名各不相同。
[0004]目前，欧洲药典（EP9.0）、英国药典（BP2018）、美国药典（USP41）及国家药品标准 YBH01522013均收载了有关物质测定方法（HPLC 法）。其中，BP2018与EP9.0中拉莫三嗪原料药与片剂的检测方法相同，均采用两种不同的液相色谱方法分别测定拉莫三嗪的有关物质，方法一测定已知EP杂质A、F、G和其他未知杂质，方法二测定已知EP杂质E；USP41和国家药品标准YBH01522013方法一致，对拉莫三嗪原料药与片剂的有关物质也采用两种不同的液相色谱方法，方法一测定USP有关物质C、D和其他未知杂质，方法二测定USP有关物质B。以上方法均不能有效对拉莫三嗪有关物质进行同时检测。
[0005]此外，采用USP43液相色谱方法检测拉莫三嗪原料药有关物质时，拉莫三嗪、拉莫三嗪N
‑
氧化物、拉莫三嗪二聚体和拉莫三嗪有关物质E（本专利技术中有关物质E；EP杂质G；USP未收载）峰重叠，杂质B（EP杂质B；USP未收载）和拉莫三嗪有关物质C（EP杂质A；USP有关物质C）峰重叠；采用USP液相色谱方法检测拉莫三嗪缓释片有关物质时，拉莫三嗪和拉莫三嗪N
‑
氧化物峰重叠，且拉莫三嗪、拉莫三嗪有关物质E和羟胺拉莫拉莫三嗪不能完全分开，即美国药典中的液相色谱检测方法专属性较差。
[0006]因此，进一步地开发一种能同时检测拉莫三嗪可能的工艺杂质和降解杂质的高效液相色谱方法意义重大。

技术实现思路

[0007]针对现有拉莫三嗪有关物质的高效液相色谱检测方法存在的上述技术问题，本专利技术提供一种拉莫三嗪有关物质的检测方法。
[0008]为达到上述专利技术目的，本专利技术采用了如下的技术方案：一种拉莫三嗪有关物质的检测方法，采用高效液相色谱法进行检测，高效液相色谱法的色谱条件为：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶柱；所述色谱柱的规格为4.6
×
150mm，填料直径为3μm；检测波长为230nm；流动相A为磷酸盐缓冲液，流动相B为乙腈，流动相C为甲醇，梯度洗脱，所述梯度洗脱的洗脱程序如下：0
‑
25min，79％流动相A，5％流动相B，16％流动相C；25
‑
35min，79％
→
50％流动相A，5％
→
36％流动相B，16％
→
14％流动相C；35
‑
40min， 50％流动相A， 36％流动相B，14％流动相C；40
‑
40.1min，50％
→
79％流动相A，36％
→
5％流动相B，14％
→
16％流动相C；40.1
‑
45min，79％流动相A，5％流动相B，16％流动相C，所述拉莫三嗪有关物质包括拉莫三嗪有关物质B、拉莫三嗪有关物质C、拉莫三嗪有关物质D、拉莫三嗪N
‑
氧化物、拉莫三嗪二聚体、羟胺拉莫三嗪、杂质B、杂质C、杂质D或拉莫三嗪有关物质E中的一种或多种。
[0009]拉莫三嗪原料和缓释片中已知杂质化学名称、结构式和对应关系如表1
‑
1和1
‑
2所示。
[0010]相对于现有技术，本专利技术提供的检测方法，以十八烷基硅烷键合硅胶柱作为检测色谱柱，以磷酸盐缓冲液
‑
乙腈
‑
甲醇作为流动相，并采用特定的梯度洗脱程序，有效克服了拉莫三嗪有关物质种类繁多且相互干扰而不能全面、清晰地进行同时检测的缺陷。本专利技术通过对高效液相色谱条件的控制，实现了拉莫三嗪有关物质的同时定量检测，极大地提高了检测效率。在检测拉莫三嗪原料时，所有己知杂质（含可能的降解杂质拉莫三嗪N
‑
氧化物和羟胺拉莫三嗪）与其相邻峰的分离度均大于1.5；在检测拉莫三嗪片剂时，拉莫三嗪、拉莫三嗪有关物质B、拉莫三嗪有关物质C、拉莫三嗪有关物质D、拉莫三嗪N
‑
氧化物、拉莫三嗪二聚体、羟胺拉莫三嗪、杂质B、杂质C、杂质D和拉莫三嗪有关物质E与其相邻峰的分离度均大于1.5。本专利技术提供的检测方法专属性、灵敏度、准确度、精密度较好，可以实现更加全面有效地对拉莫三嗪的质量进行控制。
[0011]进一步地，拉莫三嗪及其有关物质出峰顺序依次为羟胺拉莫三嗪、拉莫三嗪、拉莫三嗪有关物质E、拉莫三嗪N
‑
氧化物、拉莫三嗪有关物质C、杂质B、拉莫三嗪二聚体、杂质C、杂质D、拉莫三嗪有关物质B、拉莫三嗪有关物质D，两相邻峰的分离度≥1.5。
[0012]进一步地，所述磷酸盐缓冲液pH值为1.9~2.1。
[0013]进一步地，所述磷酸盐缓冲液的配制为称取2.7g无水磷酸二氢钾，加1000mL水溶解，用磷酸调节pH至1.9~2.1。
[0014]进一步地，所述磷酸盐缓冲液pH值为2.0，与乙腈和甲醇采用梯度洗脱顺序，可以改善峰形，提高各组分峰之间的分离度和检测的灵敏度，使检测结果定量准确。
[0015]进一步地，柱温为36~40℃，流速0.9
‑
1.1mL/min。
[0016]进一步地，柱温为38℃，流速1.0mL/min。
[0017]进一步地，进样温度为10℃，进样体积为20μL，与柱温和流速一起调控，有利于进一步提高各组分之间的分离度，使检测结果的准确度及精密度更高。
[0018]进一步地，所述色本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种拉莫三嗪有关物质的检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱法进行检测，高效液相色谱法的色谱条件为：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶柱；所述色谱柱的规格为4.6
×
150mm，填料直径为3μm；检测波长为230nm；流动相A为磷酸盐缓冲液，流动相B为乙腈，流动相C为甲醇，梯度洗脱，所述梯度洗脱的洗脱程序如下：0
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25min，79％流动相A，5％流动相B，16％流动相C；25
‑
35min，79％
→
50％流动相A，5％
→
36％流动相B，16％
→
14％流动相C；35
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40min， 50％流动相A， 36％流动相B，14％流动相C；40
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40.1min，50％
→
79％流动相A，36％
→
5％流动相B，14％
→
16％流动相C；40.1
‑
45min，79％流动相A，5％流动相B，16％流动相C，所述拉莫三嗪有关物质包括拉莫三嗪有关物质B、拉莫三嗪有关物质C、拉莫三嗪有关物质D、拉莫三嗪N
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氧化物、拉莫三嗪二聚体、羟胺拉莫三嗪、杂质B、杂质C、杂质D或拉莫三嗪有关物质E中的一种或多种。2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，拉莫三嗪及其有关物质出峰顺序依次为羟胺拉莫三嗪、拉莫三嗪、拉莫三嗪有关物质E、拉莫三嗪N
‑
氧化物、拉莫三嗪有关物质C、杂质B、拉莫三嗪二聚体、杂质C、杂质D、拉莫三嗪有关物质B、拉莫三嗪有关物质D，两相邻峰的分离度≥1.5。3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液pH值为1.9~2.1。4.如权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的配制为称取2.7g无水磷酸二氢钾，加1000mL水溶解，用磷酸调节pH至1.9~2.1。5.如权利要求1所述的检测方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：王翠玲，任晓慧，王小英，郁春乐，
申请(专利权)人：河北以岭医药研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：