对有毒蘑菇种类进行常规/实时荧光/数字PCR鉴定的试剂盒和方法技术

本发明专利技术公开了一种对有毒蘑菇种类进行常规/实时荧光/数字PCR鉴定的试剂盒和方法，试剂盒包括用于对有毒蘑菇进行PCR鉴定的引物组，有毒蘑菇包括选自假褐云斑鹅膏、锥鳞白鹅膏、新苦粉孢牛肝菌中的一种或多种，试剂盒用于对不同种类的有毒蘑菇进行种类鉴定。本发明专利技术选取常见的有毒蘑菇及其近缘种和形态近似种，通过序列比对，找到有毒蘑菇与其近似物种的差异位点，设计特异性引物，能准确地将有毒蘑菇与其它近似种和易混淆种区分开来；通过灵敏度检测，保证所建立的检测方法可满足中毒事件中早期、准确诊断，从而尽快对症使用解毒剂。从而尽快对症使用解毒剂。从而尽快对症使用解毒剂。

【技术实现步骤摘要】
对有毒蘑菇种类进行常规/实时荧光/数字PCR鉴定的试剂盒和方法


[0001]本专利技术涉及蘑菇种质鉴定
，具体涉及对有毒蘑菇种类进行常规/实时荧光/数字PCR鉴定的试剂盒和方法。

技术介绍

[0002]一些有毒菌类与可食菌类外形相似、且生长季节和生长环境相同，混杂生长在一起，容易被人当成可食菌类采用。而误食野生毒蘑菇可能会造成急性肝损害、急性肾衰竭、肠胃炎等严重后果。
[0003]常见野生毒蘑菇中，鹅膏科(Amanitaceae)鹅膏属(Amanita)部分真菌因含有鹅膏肽类毒素而具有致毒性，如致命鹅膏(Amanita exitialis)，俗名“白毒伞”，该种被科学界认为是“剧毒杀手”，可以造成急性肝损害。
[0004]在误食有毒蘑菇急救中存在事发突然、形态学鉴定难等棘手难题，且目前我国对有毒生物危害整体关注与研究较少，没有形成成熟的检测鉴定技术方法、试剂和标准，无法及时诊断出中毒原因，给人民生命安全和健康带来了重大隐患。所以，开展有毒蘑菇快速定性检测技术研究具有重要意义。

技术实现思路
/>[0005]本专本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种对有毒蘑菇进行PCR鉴定的试剂盒，其特征在于：包括用于对有毒蘑菇进行PCR分子鉴定的特异性引物，所述有毒蘑菇包括选自假褐云斑鹅膏、锥鳞白鹅膏、新苦粉孢牛肝菌中的一种或多种；所述有毒蘑菇对应的特异性引物如下表所列：2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：还包括用于实时荧光PCR的特异性TaqMan探针，每种有毒蘑菇对应的TaqMan探针如下表所示：种类探针名称探针序列(5
’→3’
)假褐云斑鹅膏A pse PATTCGATGGACCTGCAAACTCCCAG锥鳞白鹅膏A vir PAGCGCAAGATGCGTTCAAGC新苦粉孢牛肝菌T neo PACCATCCCAACCAACGTATGTC。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：还包括PCR扩增反应所需的试剂；优选所述PCR为常规PCR或者实时荧光PCR或者数字PCR；优选所述PCR扩增反应所需的试剂为DNA聚合酶和DNA聚合酶缓冲液。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：还包括DNA提取试剂、阳性对照和阴性对照。5.一种对有毒蘑菇种类进行常规PCR鉴定的方法，其特征在于，所述有毒蘑菇包括选自假褐云斑鹅膏、锥鳞白鹅膏、新苦粉孢牛肝菌中的一种或多种；包括如下步骤：1)提取待测样品的基因组DNA；2)采用权利要求1所述的试剂盒中的特异性引物对提取的基因组DNA进行PCR扩增；3)检测PCR扩增产物中是否含有目的扩增片段，含有对应目的扩增片段的样品鉴定为相应种类的有毒蘑菇；假褐云斑鹅膏对应的扩增片段大小为380bp，锥鳞白鹅膏对应的扩增片段大小为190bp，新苦粉孢牛肝菌对应的扩增片段大小为240bp。6.根据权利要求5所述的常规PCR鉴定的方法，其特征在于：PCR反应体系为：总体积25μL，含有：2
×
Taq PCR Master mix 12.5μL，浓度均为10μM的上下游引物各1μL，DNA模板1μL，余量为ddH2O；假褐云斑鹅膏PCR扩增程序为：94℃3min；94℃30s，60℃30s，72℃30s，30循环；72℃10min；锥鳞白鹅膏PCR扩增程序为：94℃3min；94℃30s，55℃30s，72℃30s，35循环；72℃
10min；新苦粉孢牛肝菌PCR扩增程序为：94℃3min；94℃30s，60℃30s，72℃30s，30循环；72℃10min；优选所述步骤3...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜帆，张玉，何佳遥，彭萱子，朱水芳，
申请(专利权)人：中国检验检疫科学研究院，
类型：发明
国别省市：