一种乳制品中植物源性成分的检测方法技术

本发明专利技术为一种乳制品中植物源性成分的检测方法。一种乳制品中植物源性成分的检测方法，包括以下步骤：(1)提取乳制品的DNA；(2)进行PCR扩增；(3)进行电泳检测。本发明专利技术所述的一种乳制品中植物源性成分的检测方法，基于PCR

【技术实现步骤摘要】
一种乳制品中植物源性成分的检测方法


[0001]本专利技术属于乳制品
，具体涉及一种乳制品中植物源性成分的检测方法。

技术介绍

[0002]乳及乳制品中一种典型欺诈行为是使用廉价植物蛋白成分掺假，以提高乳中的蛋白质含量。据报道较多的被掺入的植物蛋白成分包括大豆分离蛋白、豌豆分离蛋白、小麦水解蛋白、大米水解蛋白。乳中植物蛋白质成分的微量掺入或者污染，就足以会引发消费者中过敏人群的严重过敏反应，极大地威胁了消费者的健康和食品安全。所以建立乳及乳制品中植物成分高灵敏度、高通量的筛查体系极为必要。
[0003]而目前所报道的检测方法中，检测靶标多为蛋白，能够检测的物种数最高也只是达到3
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4个，如Jablonski等使用UPLC结合紫外指纹技术的曲线谱图技术识别脱脂奶粉(SMP)样品中掺杂3％(w/w)及以上质量分数存在的外源植物蛋白(大豆分离蛋白、豌豆分离蛋白、大米蛋白和小麦水解蛋白)。
[0004]有鉴于此，有鉴于此，本专利技术提出一种新的乳制品中植物源性成分的检测方法，是基于PCR
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CE法和PCR
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AGE法，可有效检测出乳制品中植物源性成分。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种乳制品中植物源性成分的检测方法，基于PCR
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CE法和PCR
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AGE法，可有效检测出乳制品中植物源性成分，并且可应用于鲜乳、巴氏杀菌乳、高温灭菌乳以及乳粉的掺假检测，满足不同商品化乳制品的检测需求。
[0006]为了实现上述目的，所采用的技术方案为：
[0007]一种乳制品中植物源性成分的检测方法，包括以下步骤：
[0008](1)提取乳制品的DNA；
[0009](2)进行PCR扩增；
[0010](3)进行电泳检测。
[0011]进一步的，所述的乳制品为鲜乳、巴氏杀菌乳、高温灭菌乳以及乳粉。
[0012]进一步的，所述的步骤(2)中，植物体系PCR反应体系为：0.5ng/μL的DNA模板2μL，2xTaq MasterMixⅡ10μL，10μM的正向引物0.5μL，10μM的反向引物0.5μL，无DNA酶RNA酶水7μL，总体积20μL。
[0013]进一步的，所述的步骤(2)中，植物体系PCR反应程序为：
[0014][0015]进一步的，所述的步骤(2)中，PCR扩增中植物源通用引物的核苷酸序列为F:5
’‑
CGAAAT CGGTAGACGCTACG
‑3’
、R:5
’‑
CCTGAAGT AAGAACCAGAT G
‑3’
。
[0016]进一步的，所述的步骤(3)中，电泳检测为琼脂糖凝胶电泳或毛细管电泳。
[0017]再进一步的，所述的琼脂糖凝胶电泳中，植物体系的PCR扩增子用3％琼脂糖凝胶电泳还原。
[0018]再进一步的，所述的琼脂糖凝胶电泳中，电泳条件90V，60min，用凝胶成像仪成像，曝光时间0.2s。
[0019]再进一步的，所述的毛细管电泳过程中，对于每个PCR扩增产物用Dilution Buffer作10倍稀释后进行毛细管电泳。
[0020]再进一步的，所述的毛细管电泳过程中，采用高分辨率运行方法，样品注入时间10s，分离电压4kV，分离时间800s。
[0021]与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
[0022]相比于热处理影响大、检出限高的蛋白靶标，DNA对于严苛的食品加工条件如高温，高压和化学处理的耐受性显著要好。在生物体的每个细胞中，DNA序列都是相同的且以高拷贝数存在。这就为分析食品中残留DNA的食品基因组学提供了基础。本专利技术将食品基质中痕量DNA经过PCR扩增，使得具有物种特征性的靶基因指数级放大。通过定制基于PCR的植物成分分析技术，可以设计简单可靠的方案以评估动物乳及乳制品中植物源成分的存在与否。除去常掺入动物乳及乳制品中的大豆、豌豆、小麦和大米等植物蛋白成分，本专利技术还选择了植物乳饮料中常用植物成分花生和核桃作为目标物种。通过实验验证，可有效检测出乳制品中植物源性成分，并且可应用于鲜乳、巴氏杀菌乳、高温灭菌乳以及乳粉的掺假检测，满足不同商品化乳制品的检测需求。
附图说明
[0023]图1为乳中植物成分毛细管电泳分子靶标的建立；
[0024]图2为实验室模拟牛奶中掺豌豆分离蛋白样品检测，A为琼脂糖凝胶电泳检测，B为毛细管电泳检测信号峰图，C为毛细管电泳检测模拟胶图；2
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7泳道样品：鲜乳组，8
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13泳道样品：巴氏灭菌处理组，14
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19泳道样品：高温灭菌处理组；M为100bp DNA Ladder；NC为阴性对照；1为纯豌豆种子样品扩增；2
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6、8
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12、15
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18：牛奶中添加豌豆分离蛋白的比例分别为0.1％、0.4％、0.8％、1.7％、4.8％、0％；
[0025]图3为实验室模拟牛奶中掺大豆分离蛋白样品检测，A为琼脂糖凝胶电泳检测，B为毛细管电泳检测信号峰图，C为毛细管电泳检测模拟胶图；2
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7泳道样品：鲜乳组；8
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13泳道
样品：巴氏灭菌处理组；14
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19泳道样品：高温灭菌处理组；M为100bp DNA Ladder，NC为阴性对照，1：纯大豆种子样品扩增，2
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6、8
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12、15
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18：牛奶中添加大豆分离蛋白的比例分别为0.1％、0.5％、0.9％、1.8％、5.0％、0％；
[0026]图4为实验室模拟牛奶中掺大米水解蛋白样品检测，A为琼脂糖凝胶电泳检测，B为毛细管电泳检测信号峰图，C为毛细管电泳检测模拟胶图；2
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7泳道样品：鲜乳组，8
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13泳道样品：巴氏灭菌处理组，14
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19泳道样品：高温灭菌处理组；M为100bp DNA Ladder，NC为阴性对照，1：纯大米种子样品扩增，2
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6、8
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12、15
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18：牛奶中添加大米水解蛋白的比例分别为0.1％、0.4％、0.8％、1.7％、4.8％、0％；
[0027]图5为实验室模拟牛奶中掺花生蛋白样品检测，A为琼脂糖凝胶电泳检测，B为毛细管电泳检测信号峰图，C为毛细管电泳检测模拟胶图；2
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7泳道样品：鲜乳组，8
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13泳道样品：巴氏灭菌处理组，14
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19泳道样品：高温灭菌处理组；M为100bp DNALadder，NC为阴性对照，1：纯花生种子样品扩增，2
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6、8
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18：牛奶中添加花生蛋白的比例分别为0.1％、0.3％本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种乳制品中植物源性成分的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取乳制品的DNA；(2)进行PCR扩增；(3)进行电泳检测。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的乳制品为鲜乳、巴氏杀菌乳、高温灭菌乳以及乳粉。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的步骤(2)中，植物体系PCR反应体系为：0.5ng/μL的DNA模板2μL，2xTaq MasterMixⅡ10μL，10μM的正向引物0.5μL，10μM的反向引物0.5μL，无DNA酶RNA酶水7μL，总体积20μL。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的步骤(2)中，植物体系PCR反应程序为：5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的步骤(2)中，PCR扩增中植物源通用引物的核苷酸序列为F:5
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CGAAAT CGGTAGACGCTACG
‑3’...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨洁，吕雅馨，赵仲凯，孙国栋，
申请(专利权)人：新疆大学，
类型：发明
国别省市：