一种植物生长促进剂thienodolin的酶法合成方法及其应用技术

本发明专利技术提供一种从6

【技术实现步骤摘要】
一种植物生长促进剂thienodolin的酶法合成方法及其应用


[0001]本专利技术属于thienodolin的合成
，具体涉一种植物生长促进剂thienodolin的酶法合成方法及其应用。

技术介绍

[0002]Thienodolin(简称THN，化学结构见图1)是在20世纪90年代发现的一个含有吲哚骈噻吩骨架的天然产物，是由Streptomyces albogriseolus MJ286
‑
76F7代谢产生。THN具有促进萌发种子的幼芽和根生长的生物活性，并且表现出浓度依赖性。
[0003]国内外学者对THN的合成进行研究，在化学合成方面，已实现了THN及其衍生物的化学合成，但有合成步骤繁琐和产率较低的缺点。在生物合成方面，尚未有THN完整合成途径和合成路线的报道，更无法利用生物酶实现体外高效制备生产。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种植物生长促进剂thienodolin完整的生物合成途，是利用生物酶法实现THN体外合成策略，利用多酶级联反应的方法，催化6
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Cl
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Trp(6
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氯
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色氨酸)生物转化thienodolin(THN)。
[0005]本专利技术提供了一种从6
‑
Cl
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Trp合成thienodolin的方法，是使用ThnJ、ThnF、ThnE、ThnL、ThnM、ThnD、ThnC、ThdO和ThnA蛋白酶体外催化来合成Thienodolin。
[0006]本专利技术的方法，其中从6
‑
Cl
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Trp合成6
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Cl
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TLA，是在ThnJ、ThnF、ThnE、ThnL和ThnM蛋白酶参与下进行的；
[0007]其中从6
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Cl
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Trp到6
‑
Cl
‑
IPA，该过程由氨基转移酶(ThnJ)负责催化，ThnJ功能为将6
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氯
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色氨酸的氨基转化为酮基。
[0008]从6
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Cl
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IPA到6
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Cl
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TPA，该过程由硫转移酶(ThnF)在硫载体蛋白(ThnL)、硫载体蛋白激酶(ThnM)的参与下完成；
[0009]进一步的，从6
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Cl
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TPA到THN，是ThnE、ThdO、ThnD、ThnC和ThnA参与了催化过程；
[0010]其中从6
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Cl
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TPA到6
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Cl
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TLA该过程由短链脱氢酶(ThnE)负责催化。
[0011]从6
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Cl
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TLA到6
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Cl
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THA，该过程由氧化还原酶(ThdO)、细胞色素P450酶(ThnC)和ThnD参与下完成。
[0012]从6
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Cl
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THA到thienodolin，该过程由氨基转移酶ThnA负责催化6
‑
Cl
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THA的酰基化反应。
[0013]其中ThnJ蛋白酶的氨基酸序列为SEQ ID NO:1,ThnF蛋白酶的氨基酸序列为SEQ ID NO:2，ThnM蛋白酶的氨基酸序列为SEQ ID NO:3，ThnL蛋白酶的氨基酸序列为SEQ ID NO:4，ThnE蛋白酶的氨基酸序列为SEQ ID NO:5，ThnD蛋白酶的氨基酸序列为SEQ ID NO:6，ThdO蛋白酶的氨基酸序列为SEQ ID NO:7，ThnC蛋白酶的氨基酸序列为SEQ ID NO:8，ThnA蛋白酶的氨基酸序列为SEQ ID NO:9。
[0014]作为本专利技术一个实施例的记载，ThnJ、ThnF、ThnE、ThnL、ThnM、ThnD、ThnC、ThdO和
ThnA蛋白酶的氨基酸序列如下：
[0015]SEQ ID NO:1：
[0016]MPTNQVPPAPLRTTEISRLPAYRAADPPAKHADGLLDLANNELTLPPLPAVVESLRLSARSVHLYPDPTARTLRQAVARHFATDPEEIVVGPGSGAVLHQLLLALCGPGDEVLYPWPGFDAYPFLITTAGAQGTPVPLTPSGEHDLSAFAAKVDTRTRIVVLCSPHNPTGRRIPRTELAAFLGSLPPHVVTVLDQAYVEFDEHEETHNLDLLRTAPRLVLLRTFSKAYGLAGLRAGYALAAPDLAGLAYKTLLPFSVTRTAEHAAQVSLEQHGQLAARLDTVRRGRSLLSAGLRAEGLDPLPSFGNFLWLPLGAATERFAQVTLAAGVRVRAYPGAGVRITVGGDEAHRRVLDAARLFRTADT；
[0017]SEQ ID NO:2：
[0018]MPESGTAQARTPRTAHPAQPDKKAPAPVSPFSAITAIVADADVFTEFIEDAVAQYRLGLASVAAGGSRLHRPNSFGLLGGTLDGDALTVRRVAFAANVRAVDDVPLEEFRDTIVPRFGKQYDDGERGFWCDSRQLLKVVREFEAADLEMLGSVHMHPDWHRVGPPHERRELLSENPSRMDEYLFRSAGWPLNIICYLESRGSGVTHTFAAWKPPSADGERAARTPIRFFARGHEDAA；
[0019]SEQ ID NO:3：
[0020]VSLPPLVEPADELTVDEVRRYSRHLIIPDVGMDGQKRLKNAKVLCVGAGGLGSPALMYLAAAGVGTLGIVEFDEVDESNLQRQIIHSQADIGRSKAESARDTVKGINPYVNVILHEERLEADNVMDIFSQYDLIVDGTDNFATRYLVNDACVLLNKPYVWGSIYRFDGQASVFWSEHGPCYRCLYPEPPPPGMVPSCAEGGVLGVLCASIGSIQVNEAIKLLAGIGEPLVGRLMIYDALEMQYRTVKVRKDPDCAVCGENPTVTELIDYEAFCGVVSEEAQEAAAGSTITPKQLKEWIDDGENIEIIDVREQNEYEIVSIPGAKLIPKNEFLMGSALEGLPQDKKIVLHCKTGVRSAEVLAVLKSAGFADAVHVGGGVIGWVNQIEPHKPVY；
[0021]SEQ ID NO:4：
[0022]MSVTVRIPTILRTYTGGQAEVAAEGATLAEVIADLEKNHTGISARVLDDQGKLRRFVNVYVNDDDVRFEQGLETATPE本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种从6
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Cl
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Trp合成thienodolin的方法，其特征在于，所述的方法是使用ThnJ、ThnF、ThnE、ThnL、ThnM、ThnD、ThnC、ThdO和ThnA蛋白酶体外催化来合成thienodolin。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的方法中包含有在ThnJ、ThnF、ThnE、ThnL和ThnM酶参与下进行的从6
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Cl
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Trp合成6
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Cl
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TLA的步骤。3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的方法中还包含有ThnJ催化从6
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Cl
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Trp合成6
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Cl
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IPA的步骤。4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的方法中还包含ThnF、ThnL、ThnM酶参与的从6
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Cl
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IPA合成6
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Cl
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TPA的步骤。5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的方法中，ThnE、ThdO、ThnD和than酶参与从6
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Cl
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TPA合成thienodolin的步骤。6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的方法中由短链脱氢酶ThnE催化6
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【专利技术属性】
技术研发人员：张伟，马文程，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：