白细胞介素2结合分子、其衍生物、试剂盒及其生产方法和用途技术

本发明专利技术公开了白细胞介素2结合分子，其能够特异性结合白细胞介素2，且包含至少一个免疫球蛋白单一可变结构域，所述的至少一个免疫球蛋白单一可变结构域包含CDR1、CDR2和CDR3；其中CDR1包含与SEQ ID NO:1

【技术实现步骤摘要】
白细胞介素2结合分子、其衍生物、试剂盒及其生产方法和用途
[0001]本申请是申请日为2021年05月14日、申请号为2021105289658、专利技术名称为“白细胞介素2结合分子、其衍生物、试剂盒及其生产方法和用途”的专利的分案申请。


[0002]本专利技术涉及生物医药
，尤其是一种针对白细胞介素2(IL2)的单域抗体。

技术介绍

[0003]白细胞介素2(interleukin 2，IL2)从被发现迄今已有30余年，但仍然是最受关注和被广泛研究的细胞因子之一。人体内IL2为分子量15.5kDa的糖蛋白，成熟的IL2分子有153个氨基酸肽链N端剪掉20个氨基酸残基的信号肽后剩下的133个氨基酸残基组成，IL2与其他细胞因子在序列上无同源性(T Taniguchi,H Matsui,T Fujita,C Takaoka,N Kashima,R Yoshimoto,J Hamuro.Structure and expression of a cloned cDNA for human interleukin
‑
2.Nature.1983 Mar 24
‑
30；302(5906):305
‑
10.)。在稳定状态下，IL2主要是由二级淋巴器官里的CD4+T辅助细胞产生，少部分是由CD8+T细胞、NK细胞和NKT细胞产生，抗原刺激能强烈诱导CD4+和CD8+T细胞产生，尽管CD8+T细胞合成IL2能力较弱，而且这些细胞的应答往往需要CD4+T细胞的帮助(参考文献：Thomas R Malek.The biology of interleukin
‑
2.Annu Rev Immunol.2008；26:453
‑
79.)。
[0004]IL2作为153个氨基酸的前体蛋白合成，前20个氨基末端氨基酸作为疏水分泌信号序列。该蛋白质包含对生物活性至关重要的单个二硫键(连接位置Cys58/105)。
[0005]IL2的生物活性由膜受体介导，所述膜受体几乎专门在活化的T细胞上表达，而不在静息T细胞上表达。完整的IL2受体由3个I型穿膜蛋白亚基构成：α、β和γ；较低亲和性的功能性受体可以仅由β和γ受体蛋白组成。静息的B细胞和静息的单核白细胞很少表达该受体。IL2受体(尤其是α亚基)的表达由许多因子调节，例如有IL5、IL6和L2R/p55诱导因子。
[0006]小鼠和人IL2都能使同种物种T细胞高效增殖。人IL2对小鼠细胞也有作用，但反之不然。IL2是所有T淋巴细胞亚群的生长因子。它对于T细胞来说，是抗原非特异性的增殖因子，其能诱导静息的细胞中的细胞周期进程并由此使T淋巴细胞克隆扩增。IL2也促进活化的B细胞的增殖和分化。与T细胞的增殖一样，该活性也需要存在其他因子，例如IL4。
[0007]IL2通过作用于细胞膜上的IL2R来发挥其生物活性。IL2R是一个复合体，由CD25(IL2Rα链，55kd)、CD122(IL2Rβ链，75kd)和CD132(IL2Rγ链，64kd)组成，只表达α的细胞以低亲和力与IL2结合，且无法进行细胞内信号转导，当α链与β链与γ链共同构成三聚体型IL2R时，可以将IL2R与IL2结合的亲和力提高10～100倍(Kd≈10
‑
11)，β和γ都属于Ⅰ型细胞因子受体家族，γ亚基不单独与IL2结合，但与β亚基结合可构成低亲和力二聚体型IL2R(Kd≈10
‑
9)，共同成为IL2R信号的组成部分。β和γ亚基在它们胞质内的尾部都携带信号序列，其信号转导通过多种细胞内通路，如酪氨酸蛋白激酶
‑
信号转导和转录因子激活通路(JAK/STAT)、磷脂酰肌醇
‑
3激酶B通路(PI3K/Akt)及丝裂原活化蛋白激酶通路(MAPKs)(参考文
献：J X Lin,W J Leonard.Signaling from the IL
‑
2 receptor to the nucleus.Cytokine Growth Factor Rev.1997 Dec；8(4):313
‑
32.)。
[0008]IL
‑
2作为恶性肿瘤免疫治疗的一部分，在临床上已经被广泛应用30多年，但其作用受到毒性、体内不稳定性以及抑制性Treg细胞而非效应T细胞的优先扩张等因素的限制。在机制上，IL2最初与IL
‑
2Rα结合，导致IL
‑
2的构象改变，从而使其有效地与IL
‑
2Rβ和IL
‑
2Rγ，然后形成高亲和力的受体激活细胞内信号通路。当IL2与中等亲和受体，IL
‑
2Rβ和IL
‑
2Rγ二聚体相互作用时，也可激活细胞内信号通路。IL
‑
2Rα在Treg细胞有广泛的表达，但Treg细胞不具有杀伤作用，导致IL
‑
2被消耗掉，而没有产生很好的细胞杀伤作用。
[0009]单结构域抗体(sdAb)是由单个单体可变抗体域组成的抗体。像整个抗体一样，它能够选择性结合特定的抗原。单结构域抗体比由两条蛋白重链和两条轻链组成的常见抗体小得多。第一个单结构域抗体是由骆驼科动物中发现的重链抗体改造而来的(参考文献：Hamers
‑
Casterman C，Atarhouch T，Muyldermans S，Robinson G，Hamers C，Songa EB，BendahmanN，Hamers R(1993)Naturally occurring antibodies devoid of light chains.Nature 363(6428):446
–
448.)。目前，对单结构域抗体的大多数研究基于重链可变结构域。
[0010]单结构域抗体具有许多优点。例如，它们通常表现出高溶解度和稳定性，并且还可以容易地在酵母、植物和哺乳动物细胞中产生(参考文献：HarmsenMM，DeHaardHJ(2007)Properties，production，and applications of camelid single
‑
domain antibody fragments.Appl Microbiol Biotechnol 77(1):13
–
22.)。此外，它们具有良好的热稳定性和良好的组织渗透性。而且它们还在生产中具有成本效益。虽然已开发出针对IL2的抗体，但作为治疗剂仍有改善抗IL2抗体的需要。此外，值得注意的是，目前针对IL2的单结构域抗体很少。因此，本领域希望开发新的抗IL2抗体，特别是针对IL2的单结构域抗体。

技术实现思路

[0011]本专利技术的目的在于利用噬菌体展示技术，通过筛选得到具有高特异性、高亲和力和高稳定性的白细胞介素2结合分子，以用于治疗、预防和诊断IL2相关疾病，本专利技术的目本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.白细胞介素2结合分子，其特征在于：其能够特异性结合白细胞介素2，且包含至少一个免疫球蛋白单一可变结构域，所述的免疫球蛋白单一可变结构域是VHH；所述的至少一个免疫球蛋白单一可变结构域包含CDR1、CDR2和CDR3；其中CDR1包含与SEQ ID NO:1
‑
15中任一项中至少90％相同的氨基酸序列，CDR2包含与SEQ ID NO:16
‑
54中任一项中至少90％相同的氨基酸序列，CDR3包含与SEQ ID NO:55
‑
84中任一项中至少90％相同的氨基酸序列；所述至少一个免疫球蛋白单一可变结构域包含选自以下的CDR1、CDR2和CDR3：(1)SEQ ID:7所示的CDR1，SEQ ID:21所示的CDR2，SEQ ID:59所示的CDR3；(2)SEQ ID:4所示的CDR1，SEQ ID:18所示的CDR2，SEQ ID:58所示的CDR3；(3)SEQ ID:13所示的CDR1，SEQ ID:30所示的CDR2，SEQ ID:63所示的CDR3；(4)SEQ ID:2所示的CDR1，SEQ ID:18所示的CDR2，SEQ ID:55所示的CDR3；(5)SEQ ID:1所示的CDR1，SEQ ID:18所示的CDR2，SEQ ID:55所示的CDR3；(6)SEQ ID:7所示的CDR1，SEQ ID:20所示的CDR2，SEQ ID:59所示的CDR3；(7)SEQ ID:1所示的CDR1，SEQ ID:25所示的CDR2，SEQ ID:55所示的CDR3；(8)SEQ ID:9所示的CDR1，SEQ ID:33所示的CDR2，SEQ ID:62所示的CDR3；(9)SEQ ID:1所示的CDR1，SEQ ID:18所示的CDR2，SEQ ID:57所示的CDR3；(10)SEQ ID:1所示的CDR1，SEQ ID:45所示的CDR2，SEQ ID:68所示的CDR3；(11)SEQ ID:7所示的CDR1，SEQ ID:20所示的CDR2，SEQ ID:80所示的CDR3；(12)SEQ ID:2所示的CDR1，SEQ ID:16所示的CDR2，SEQ ID:55所示的CDR3；(13)SEQ ID:3所示的CDR1，SEQ ID:51所示的CDR2，SEQ ID:56所示的CDR3；(14)SEQ ID:6所示的CDR1，SEQ ID:23所示的CDR2，SEQ ID:61所示的CDR3；(15)SEQ ID:2所示的CDR1，SEQ ID:18所示的CDR2，SEQ ID:58所示的CDR3；(16)SEQ ID:3所示的CDR1，SEQ ID:50所示的CDR2，SEQ ID:56所示的CDR3；(17)SEQ ID:14所示的CDR1，SEQ ID:41所示的CDR2，SEQ ID:78所示的CDR3；(18)SEQ ID:2所示的CDR1，SEQ ID:39所示的CDR2，SEQ ID:55所示的CDR3；(19)SEQ ID:4所示的CDR1，SEQ ID:40所示的CDR2，SEQ ID:58所示的CDR3；(20)SEQ ID:12所示的CDR1，SEQ ID:34所示的CDR2，SEQ ID:69所示的CDR3；(21)SEQ ID:4所示的CDR1，SEQ ID:18所示的CDR2，SEQ ID:67所示的CDR3；(22)SEQ ID:9所示的CDR1，SEQ ID:32所示的CDR2，SEQ ID:62所示的CDR3；(23)SEQ ID:1所示的CDR1，SEQ ID:35所示的CDR2，SEQ ID:71所示的CDR3；(24)SEQ ID:1所示的CDR1，SEQ ID:43所示的CDR2，SEQ ID:64所示的CDR3；(25)SEQ ID:3所示的CDR1，SEQ ID:54所示的CDR2，SEQ ID:56所示的CDR3；(26)SEQ ID:15所示的CDR1，SEQ ID:37所示的CDR2，SEQ ID:57所示的CDR3；(27)SEQ ID:3所示的CDR1，SEQ ID:53所示的CDR2，SEQ ID:56所示的CDR3；(28)SEQ ID:1所示的CDR1，SEQ ID:31所示的CDR2，SEQ ID:65所示的CDR3；(29)SEQ ID:4所示的CDR1，SEQ ID:27所示的CDR2，SEQ ID:70所示的CDR3；(30)SEQ ID:2所示的CDR1，SEQ ID:29所示的CDR2，SEQ ID:73所示的CDR3；(31)SEQ ID:10所示的CDR1，SEQ ID:28所示的CDR2，SEQ ID:66所示的CDR3；(32)SEQ ID:8所示的CDR1，SEQ ID:42所示的C...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁耀极，刘杰，陈莹，陈滨滨，
申请(专利权)人：厦门柏慈生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：