CCR8抗体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及用于产生特异性结合趋化因子受体(例如CC或CXC趋化因子)的抗体的工具和方法。本发明专利技术提供了分离的硫酸化多肽及其缀合物，其可例如用作抗原或用于脱靶淘选，以促进抗人、抗食蟹猴和/或抗小鼠趋化因子受体抗体的产生，例如用于产生具有完全人CDR和/或其他用于治疗用途的有利性质的抗体。本发明专利技术还涉及可通过应用上述工具和方法获得的抗体及其缀合物。提供了特异性结合人、食蟹猴和/或鼠CCR8的抗体，其具有用于治疗用途的有利性质，例如交叉反应性抗体、完全人抗体、低内化(包括非内化)抗体和在Treg细胞中有效诱导ADCC和/或ADCP的抗体。还提供了本发明专利技术抗体或缀合物的医学用途和/或治疗方法，其包括单独或组合地向患者或受试者施用这些抗体。最终提供了生物标志物、分层方法和诊断方法来预测或评估抗CCR8抗体单一疗法或组合疗法的响应性。本发明专利技术还提供了用于生产上述抗体的工具和方法、药物组合物、抗体的诊断用途以及带有使用说明书的试剂盒。盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】CCR8抗体及其用途


[0001]本专利技术涉及用于产生特异性结合趋化因子受体如CC或CXC趋化因子受体的抗体的工具和方法。提供了分离的硫酸化多肽及其缀合物，其可用作例如抗原或用于脱靶淘选以促进抗人、抗食蟹猴和/或抗小鼠趋化因子受体抗体的产生，例如用于产生具有完全人CDR和/或其他有利特性以用于治疗用途的抗体。
[0002]本专利技术还涉及可通过应用上述工具和方法获得的抗体及其缀合物。提供了特异性结合人、食蟹猴和/或鼠CCR8并具有有利特性用于治疗用途的抗体，例如交叉反应抗体、全人抗体、低内化(包括非内化)抗体、和在Treg细胞中有效诱导ADCC和/或ADCP的抗体。
[0003]还提供了本专利技术抗体或缀合物的医学用途和/或治疗方法，包括将这些抗体单独或组合施用给患者或受试者。最终提供了生物标志物、分层方法和诊断方法来预测或评估对抗CCR8抗体单一疗法或组合疗法的响应。
[0004]本专利技术还提供了用于产生前述抗体的工具和方法、药物组合物、抗体的诊断用途以及带有使用说明书的试剂盒。
[0005]技术问题
[0006]产生CC和CXC趋化因子受体的抗体
[0007]CXC和CC趋化因子受体是特定的七次跨膜G蛋白偶联受体，可介导趋化梯度中的细胞迁移。由于其固有的结构、生物物理和生物学特性，趋化因子受体是抗体生成的具有挑战性的目标类别。难以获得针对趋化因子受体的最佳抗体的原因有多种，这将以示例性方式进行讨论，重点放在人CCR8上。
[0008]趋化因子受体的特点是嵌入细胞膜中的七个结构域，因此在其天然确认中不易纯化。纯化的天然趋化因子受体将从膜环境中移除，因此可能在构象上受到损害。这些损坏的结构通常不适合抗体生成，因为抗体需要识别呈现在细胞表面的完整抗原。虽然一些趋化因子受体，如CXCR4和CCR5，具有一些固有的稳定性，允许在温和的洗涤剂中纯化，但这不适用于大多数趋化因子受体(Hutchings,Catherine J.,et al."Opportunities for therapeutic antibodies directed at G
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protein
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coupled receptors."Nature reviews Drug discovery 16.11(2017):787.)。事实强调了这一点，直到今天，蛋白质数据库PDB(rcsb.org)中还没有可用于CCR8的X射线晶体结构。
[0009]因此，对于趋化因子受体来说，为了获得天然构象中所需数量的蛋白质以及正确的方向和折叠以用作免疫原而进行增溶是很困难的(参见cf.Klarenbeek,Alex,et al."Targeting chemokines and chemokine receptors with antibodies."Drug Discovery Today:Technologies 9.4(2012):e237
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e244.)。
[0010]人CCR8整体结构的示意图如图2b所示。在355个氨基酸中，残基1
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35(N端)、94
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107(ECL1)、172
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202(ECL2)和264
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280(ECL3)被预测为细胞外结构域(uniprot.org)。假设这些细胞外结构域采用三级结构，由二硫键稳定。因此，平均不到30％的趋化因子受体暴露在细胞表面。因此，趋化因子受体尤其是CCR8不易接近抗体结合，如WO200744756中所述。
[0011]此外，针对对应于趋化因子受体细胞外结构域的肽产生的抗体通常无法识别细胞
上的完整受体，这可能是由于二级结构的差异。因此，该领域的研究人员在开发抗体方面的成功率很低(Tschammer,Nuska,ed.Chemokines:chemokines and their receptors in drug discovery.Vol.14.Springer,2015,Chapter by J.E.Pease&R.Horuk,section 6,page 12,2nd para)。
[0012]获得抗鼠CCR8抗体的抗体生成似乎稍微不那么困难，专利技术人可以复制传统方法，例如Kremer和M
á
rquez描述的方法(D
’
Ambrosio,Daniele,and Francesco Sinigaglia.Cell Migration in Inflammation and Immunity.Springer,2004.,Chapter by Kremer and M
á
rquez p.243
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260)。鼠和人CCR8的序列同一性约为70％，对于细胞外结构域而言甚至更低，如实施例2中更详细的描述。然而，Kremer和M
á
rquez讨论，抗小鼠趋化因子受体单克隆抗体的产生是一项艰巨的挑战，尽管自首次报道其氨基酸序列以来已经过去了一段时间，但针对小鼠趋化因子受体的抗体却相对稀少。
[0013]CCR8的治疗性抗体及其医药用途
[0014]尽管它们的产生存在困难，但靶向CC趋化因子受体的抗体已被建议作为各种疾病的有前途的治疗工具，例如基于对涉及免疫细胞的疾病或以趋化因子受体异常表达为特征的各种癌症适应症的机制洞察。
[0015]2004年，Curiel等可以显示对于104名卵巢癌患者的CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞(Treg细胞或Tregs)，人肿瘤Treg细胞抑制肿瘤特异性T细胞免疫并促进体内人类肿瘤的生长(Curiel,Tyler J.,et al."Specific recruitment of regulatory T cells in ovarian carcinoma fosters immune privilege and predicts reduced survival."Nature medicine 10.9(2004):942
‑
949.)。
[0016]肿瘤细胞和微环境巨噬细胞产生趋化因子，例如CCL22，它介导Treg细胞向肿瘤的运输。肿瘤微环境中高水平的Tregs不仅与许多癌症(如卵巢癌、乳腺癌、肾癌和胰腺癌)的预后不良有关，而且会抑制针对这些癌症的免疫应答，例如通过抑制免疫系统效应细胞的作用。因此，Treg细胞的这种特异性募集代表了肿瘤可以促进免疫特权的一种机制。因此，有人建议阻断Treg细胞迁移或功能以战胜人类癌症。
[0017]意识到Curiel的发现后，围绕Plitas/Rudensky和De Simone/Abrignani/Pagani的两个独立团队发现肿瘤浸润性Treg细胞的特征在于CCR8的选择性表达。事实上，对于肿瘤浸润性Treg，Treg细胞耗竭的选择性很重要，因为Treg细胞的全身耗竭可能导致严重的自身免疫(Nishika本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种特异性结合CCR8的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段是非内化的或特征在于以低于同种型对照的内化的1.5、2、3、4、5、6、7或10倍内化进入具有内源靶标表达的细胞。2.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合CCR8，其中所述抗体或片段的特征在于HCDR3区包含10至34％的酪氨酸和2至20％的组氨酸。3.一种特异性结合CCR8的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含源自人的CDR。4.一种特异性结合CCR8的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段对来自至少两个物种的CCR8具有交叉反应性，优选地选自人、食蟹猴和小鼠，最优选地其中所述抗体或抗原结合片段对人和食蟹猴CCR8具有交叉反应性。5.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合CCR8，其中所述抗体或抗原结合片段，a.不阻断CCL1诱导的β
‑
arrestin信号传导和/或b.不诱导ERK1/2磷酸化和/或c.不诱导AKT磷酸化。6.一种特异性结合CCR8的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段是非岩藻糖基化的，和a.通过人效应细胞例如人NK细胞，在表达人CCR8的靶细胞中诱导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)，和b.通过人效应细胞例如人巨噬细胞，在表达人CCR8的靶细胞中诱导抗体依赖性细胞介导的吞噬作用(ADCP)，c.其中最大ADCC和ADCP诱导的表达人CCR8的靶细胞的体外耗竭为至少30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、70％、80％、90％、95％或99％。7.根据权利要求2至6中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段是非内化的或特征在于以低于同种型对照的内化的1.5、2、3、4、5、6、7或10倍内化到具有内源靶标表达的细胞中。8.根据权利要求1或3至7中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段的特征在于HCDR3区包含10％至34％的酪氨酸和/或2％至34％的组氨酸。9.根据权利要求1至2或4至8中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体包含源自人的CDR。10.根据权利要求1至3或5至9中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段对来自至少两个物种的CCR8具有交叉反应性，优选地选自人、食蟹猴和小鼠，最优选地其中所述抗体或抗原结合片段对人和食蟹猴CCR8具有交叉反应性。11.根据权利要求1至10中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段以第一解离常数KD结合来自第一物种的CCR8并且以第二解离常数KD结合来自第二物种的CCR8，其中所述第一和第二解离常数处于相同数量级。12.根据权利要求1至4或6至11中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段，a.不阻断CCL1诱导的β
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arrestin信号传导和/或
b.不诱导ERK1/2磷酸化和/或c.不诱导AKT磷酸化。13.根据权利要求1至5或7至12中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段a.通过人效应细胞例如人NK细胞，在表达人CCR8的靶细胞中诱导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)，和b.通过人效应细胞例如人巨噬细胞，在表达人CCR8的靶细胞中诱导抗体依赖性细胞介导的吞噬作用(ADCP)，和任选地c.其中最大ADCC和ADCP诱导的表达人CCR8的靶细胞的体外耗竭为至少30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、70％、80％、90％、95％或99％。14.根据权利要求1至13中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段特异性结合CCR8的硫酸化的富含酪氨酸的结构域。15.根据权利要求1至14中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段(i)以EC50<15nM、<10nM、<5nM、<1nM或<0.6nM特异性结合a.人CCR8和/或根据SEQ ID NO:46的分离的多肽，其中Y3、Y15和Y17中的至少两个或全部已被硫酸化，和/或b.食蟹猴CCR8和/或根据SEQ ID NO:47的分离的多肽，其中Y3、Y15和Y17中的至少两个或全部已被硫酸化，和/或c.鼠CCR8和/或根据SEQ ID NO:48的分离的多肽，其中Y3、Y14和Y15中的至少两个或全部已被硫酸化，和/或(ii)以EC50<50nM、<25nM、<15nM或<10nM结合激活的人调节性T细胞。16.根据权利要求1至15中任一项的分离的抗体或其抗原结合片段，a.其中抗体或抗原结合片段以低于530nM、500nM、450nM、400nM、300nM或200nM的解离常数(KD)结合人Fcγ受体IIIA变体V176(CD16a)，和/或b.其中所述抗体或抗原结合片段以低于30μM、20μM、10μM、5μM或1μM的解离常数(KD)结合人FcγRIIA(CD32a)。17.根据权利要求1至16中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段是无岩藻糖基化的。18.根据权利要求1至17中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段a.通过人效应细胞例如人NK细胞，在表达人CCR8的靶细胞中诱导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)，和/或b.通过人效应细胞例如人巨噬细胞，在表达人CCR8的靶细胞中诱导抗体依赖性细胞介导的吞噬作用(ADCP)，优选地，其中c.ADCC诱导的激活人调节性T细胞的最大耗竭至少为25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、70％、80％、90％、95％、98％或99％，和/或
d.ADCP诱导的激活人调节性T细胞的最大耗竭至少为5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％或50％，和/或e.最大ADCC和ADCP诱导的激活的人调节性T细胞的体外耗竭至少为30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、70％、80％、90％、95％或99％。19.根据权利要求1至18中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中a.抗体或抗原结合片段对ADCC诱导的激活的人调节性T细胞耗竭的EC50低于100pM、50pM、25pM、12.5pM、10pM或5pM和/或b.抗体或抗原结合片段对ADCP诱导的激活的人调节性T细胞耗竭的EC50低于500pM、250pM、200pM、150pM、100pM、75pM、50pM或25pM。20.根据前述权利要求中任一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段的有效剂量a.在体外或受试者中将激活或瘤内调节性T细胞的数量减少到低于50％、40％、30％、25％、20％、10％、5％或1％，和/或b.在体外或受试者中将瘤内CD8+T细胞与瘤内Tr...

【专利技术属性】
技术研发人员：S，
申请(专利权)人：拜耳公司，
类型：发明
国别省市：