特异性结合TRAF2的试剂在制备Wnt通路抑制剂中的应用制造技术

本发明专利技术公开了特异性结合TRAF2的试剂在制备Wnt通路抑制剂中的应用和特异性结合TRAF2的试剂在制备治疗Wnt通路异常激活的疾病的药物中的应用。所述特异性结合TRAF2的试剂可以高亲和地集合TRAF2，并继而抑制Wnt通路，从而抑制Wnt异常相关的肿瘤的进展。抑制Wnt异常相关的肿瘤的进展。抑制Wnt异常相关的肿瘤的进展。

【技术实现步骤摘要】
特异性结合TRAF2的试剂在制备Wnt通路抑制剂中的应用


[0001]本专利技术涉及肿瘤治疗领域，具体涉及特异性结合TRAF2的试剂在制备Wnt通路抑制剂中的应用、特异性结合TRAF2的试剂在制备治疗Wnt通路异常激活的疾病中的应用、一种体外化疗耐药性的癌症模型及建立其的方法、一种试剂盒和一种药物组合物。

技术介绍

[0002]大肠癌是发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一，迄今为止临床尚无相应的靶向药物。APC(adenomatous polyposis coli)突变导致Wnt/β
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catenin信号通路异常激活是大肠癌最主要的驱动因子，但由于APC是截断失活性突变，相应的靶向药物开发面临诸多挑战，针对APC非依赖的Wnt/β
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catenin信号通路发现抑制剂，有望开发新型的结肠癌靶向药物。
[0003]Wnt/β
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catenin信号通路
[0004]Wnt信号通路是一个进化上非常保守的蛋白质作用网络。经典Wnt信号通路可简单概括为：1)Wnt分泌因子在细胞膜与受体(Frizzled家族及LRP家族)结合；2)信号通过Dishevelled蛋白将导致细胞质内的β
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catenin被APC、Axin、CK1α和GSK3β组成的降解复合物磷酸化，使其能够被β
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TRCP E3连接酶介导泛素化降解；3)β
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catenin在细胞质内聚集并进入细胞核和TCF/LEF(T细胞因子)形成复合物启动靶基因(比如c
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myc)的转录。
[0005]该通路最先在胚胎发育中发现，通路的异常抑制或激活将导致胚胎发育缺陷。Wnt信号通路不仅与肿瘤侵袭转移的相关事件如癌细胞的迁移黏附、细胞外基质的降解及肿瘤的血管生成密切相关，而且在调节肿瘤干细胞的自我更新、增殖与分化中发挥重要作用。此外，有研究证实Wnt/β
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catenin信号通路与化疗耐药性有关。现在已有大量证据证实Wnt信号通路的异常激活和癌症尤其是大肠癌的发生和发展高度相关。
[0006]由于Wnt/β
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catenin信号通路在大肠癌发生中的关键作用，过去20多年来世界上有众多研究机构和制药公司致力于Wnt抑制剂的开发研究。不过，迄今为止尚无靶向Wnt/β
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catenin信号通路的药物应用于临床，大多数抑制剂处于临床前研究，很少数进入临床1期或2期。Wnt抑制剂开发进展缓慢的原因是大多数抑制剂是靶向Wnt信号通路的上游或中游，但是临床基因组测序表明81.9％的大肠癌组织有APC基因的失活性突变和4.7％β
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catenin基因的激活性突变，理论上这些突变将导致β
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catenin的降解受阻和异常积聚，Porcupine抑制剂的靶标Wnt蛋白或Tankyrase抑制剂的靶标Axin在通路上处于APC之前，因此对这些异常集聚的β
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catenin不能有调控作用。
[0007]涉及Wnt/β
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catenin信号通路的疾病包括癌症、神经系统疾病、骨病、皮肤病、心血管疾病、纤维化疾病及代谢综合征等疾病；涉及Wnt/β
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catenin信号通路的癌症包括但不限于大肠癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌及骨肉瘤；特别是大肠癌。
[0008]路路通酸(liquidambaric acid，LDA，结构式如下式I所示)是路路通的主要活性成分，最早是在1988年，从枫香树的干燥成熟果实路路通中提取鉴定出来的一种新的五环三萜类化合物。其研究较多的是抗病毒和抗炎作用，作用机制与毛细血管通透性有关。
[0009][0010]TRAF2(tumor necrosis factor(TNF)receptor
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associated factor2)
[0011]结构上，TRAF2属于TRAF家族，其家族具有有七个成员:TRAF1
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TRAF7。除了TRAF7，TRAF家族成员通常共享一个共同的TRAF域。其中TRAF2是由一个环指结构域、几个锌指基元、一个包含N端卷曲螺旋结构域(TRAF
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N)和一个C端β
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三明治结构域(TRAF
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C)组成。
[0012]功能上，TRAF2是一种促进k63连接多聚泛素化的E3泛素连接酶，同时也是一种适配蛋白。TRAF2可发挥多种受体特异性功能，但也介导TNFR1和TNFR2之间的交叉，决定TNF刺激的结果。当激活典型的NF
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κB和JNK/MAP激酶信号通路，其中TNF可通过激活两种不同的受体TNFR1和TNFR2，TNFR1与TRADD招募TRAF2，TNFR2直接招募TRAF2进而激活。而TNFR2也可以激活非典型的NF
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κB信号通路，导致大量基因表达的变化，驱动炎症，细胞增殖和细胞存活，区分TRAF2作为支架和E3泛素连接酶的功能，可能是其潜在的分子机制。
[0013]TRAF2作为一种适配蛋白，在肿瘤启动和进展中与多种受体特异性功能相关。目前已经在结肠癌、肺癌、乳腺癌和胰腺癌等多种癌症中都证实有TRAF2的异常激活，基因敲除或敲低TRAF2则显著抑制肿瘤的生长、侵袭，或增加肿瘤的化疗敏感性。
[0014]综上所述，TRAF2是个理想的肿瘤治疗靶标，急需发现靶向TRAF2的小分子抑制剂。

技术实现思路

[0015]针对现有技术中对Wnt通路研究的不足、缺少Wnt通路抑制剂和Wnt通路异常相关肿瘤的治疗药物的缺陷，本专利技术提供了特异性结合TRAF2的试剂在制备Wnt通路抑制剂中的应用、特异性结合TRAF2的试剂在制备治疗Wnt通路异常激活的疾病中的应用、一种体外化疗耐药性的癌症模型及建立其的方法、一种试剂盒和一种药物组合物。本专利技术的专利技术人意外发现TRAF2是Wnt通路的抑制蛋白，而LDA可特异性地结合TRAF2，从而抑制Wnt通路。本专利技术所述LDA的结构式如式I所示。
[0016][0017]为解决上述技术问题，本专利技术提供的一个技术方案为：特异性结合TRAF2的试剂在制备Wnt通路抑制剂中的应用。
[0018]优选地，所述试剂为抗体或小分子化合物。更优选地，所述小分子化合物为LDA。
[0019]为解决上述技术问题，本专利技术提供的一个技术方案为：特异性结合TRAF2的试剂在制备治疗Wnt通路异常激活的疾病的药物中的应用，所述疾病包括癌症、神经系统疾病、骨病、皮肤病、心血管疾病、纤维化疾病和代谢综合征；所述癌症优选大肠癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、胃癌、肝癌或骨肉瘤；所述大肠癌更优选为结肠癌。
[0020]优选地，所述试剂为抗体或小分子化合物。更优选地，所述小分子化合物为LDA。
[0021]为解决上述技术问题，本专利技术提供的一个技术方案为：LDA在制备TRAF2抑本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.特异性结合TRAF2的试剂在制备Wnt通路抑制剂中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂为抗体或小分子化合物；优选地，所述小分子化合物为LDA。3.特异性结合TRAF2的试剂在制备治疗Wnt通路异常激活的疾病的药物中的应用，所述疾病包括癌症、神经系统疾病、骨病、皮肤病、心血管疾病、纤维化疾病和代谢综合征；所述癌症优选大肠癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、胃癌、肝癌或骨肉瘤；所述大肠癌更优选为结肠癌。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述试剂为抗体或小分子化合物；优选地，所述小分子化合物为LDA。5.LDA在制备TRAF2抑制剂中的应用。6.LDA在制备治疗TRAF2相关疾病的药物中的应用。7.一种体外化疗耐药性的癌症模型，所述癌症模型中缺失TRAF2基因；所述癌症优选大肠癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、胃癌、肝癌或骨肉瘤；所述大肠癌更优选为结肠...

【专利技术属性】
技术研发人员：屈祎，闫蓉，柯细松，张卫东，朱红岩，
申请(专利权)人：上海中医药大学，
类型：发明
国别省市：