一种仑伐替尼耐药标记物及其相关试剂的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种仑伐替尼耐药标记物及其相关试剂的应用，所述仑伐替尼耐药标记物为JUN，JUN可用于预测仑伐替尼的药效。通过过对肝癌患者组织转录组测序，或通过PCR、基因芯片、组织芯片、NanoString技术、免疫组化的方法检测相关分子的表达，可为仑伐替尼的用药与肝癌的精准治疗提供线索。癌的精准治疗提供线索。癌的精准治疗提供线索。

【技术实现步骤摘要】
一种仑伐替尼耐药标记物及其相关试剂的应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，特别涉及一种仑伐替尼耐药标记物及其相关试剂的应用。

技术介绍

[0002]原发性肝癌在我国目前常见的恶性肿瘤中，发病率排第四位，死亡率排第二位，严重威胁我国人民的生命和健康。肝癌早期患者(巴塞罗纳0期A期)，手术切除和肝移植等治疗可以有效地提高肝癌患者的治愈率和生存预后。然而由于肝癌起病隐匿，早期症状缺乏特异性，很多患者被诊断为肝癌时，就已经处于中期或晚期。长期以来，由于药物治疗方案少，而且临床有效率低，中晚期肝癌普遍显示预后差、生存率低。
[0003]索拉非尼(Sorafenib)是最早用于肝癌治疗药物，然而，索拉非尼仅能将中位生存期提高三个月，且有效率低，尚不足10％。仑伐替尼(Lenvatinib)是原发性肝癌临床中常用的一线药物，可作用的靶点包括VEGFR1
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3、FGFR1
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4、PDGFRα、KIT和RET，适用于不可切除的中国肝癌分期方案(Chinalivercancerstaging，CNLC)中IIb、IIIa、IIIb期及肝功能Child
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PughA级的肝癌病人。研究表明，仑伐替尼治疗后肝癌患者的中位生存期，不亚于索拉非尼。2018年美国国家癌症综合网络(NCCN)、欧洲肿瘤内科学会(ESMO)、欧洲肝脏研究学会(EASL)、中国临床肿瘤学会(CSCO)等指南推荐仑伐替尼作为晚期肝细胞癌一线标准治疗药物。尽管仑伐替尼显示出明显优于索拉非尼的临床有效率，但其临床有效率仅为24.1％，而且大部分人群并不适用，出现了很多无效治疗现象。因此，亟需补充仑伐替尼的药敏分子分型方案，提高肝癌治疗疗效。

技术实现思路

[0004]本申请为申请号202210636256.6的分案申请，母案申请日为2022年6月7日，专利技术创造名称为《仑伐替尼药敏标记物及其相关试剂的应用》。
[0005]针对现有技术中存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种仑伐替尼耐药标记物及其相关试剂的应用，采用其可对仑伐替尼耐药人群进行提示，为肝癌精准治疗提供依据。本专利技术的第二个目的提供该仑伐替尼耐药标记物相关试剂的一些应用，该标记物的相关试剂包括：检测其表达的定量试剂、抑制剂等，这些相关试剂的应用能够填补肝癌精准诊疗领域的空白。
[0006]本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：
[0007]本专利技术的第一方面：发现JUN的高表达与仑伐替尼耐药相关，因此JUN基因表达能够作为指导原发性肝癌治疗的潜在耐药生物标记物。即本专利技术提供了一种仑伐替尼耐药标记物，所述仑伐替尼耐药标记物为JUN。
[0008]进一步的，所述耐药标记物为RNA或其逆转录的cDNA，或蛋白。
[0009]具体筛选过程为：
[0010]专利技术人收集了多例原发性肝癌患者的手术标本，多点取样，通过三维培养的方法，
成功建立了涵盖数百个位点的肝癌类器官生物库。团队通过苏木精
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伊红(Hematoxylin
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Eosin，HE)染色，证实类器官保留了患者的病理学特征。通过对类器官和对应的患者标本的免疫荧光、免疫组化染色，发现肝癌类器官与临床上肝癌患者的分子标记物也是一致的。
[0011]选取近百个位点，进行组织和对应类器官的外显子、转录组测序，分析了组织与对应类器官的基因组特征。从体细胞突变、拷贝数变异和转录组相似性等多维度验证了类器官生物库高度保留组织样本的分子特征。此外，团队建立的大规模肝癌组织和类器官队列与以往肝癌研究一致，具有肝癌的高发突变。另外，专利技术人的肝癌数据反映了不同程度的肿瘤间(inter
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tumor)和肿瘤内异质性(intra
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tumorheterogeneity)，为研究肝癌药敏异质性提供了依据。
[0012]本专利技术选取临床上常用的肝癌药物索拉非尼、仑伐替尼等，对类器官生物库进行大规模药物筛选。专利技术人将类器官药敏与临床治疗效果相比对，发现其药敏效果是高度一致的。
[0013]为了研究肝癌一线靶向药物仑伐替尼的药敏分子分型，对多个类器官位点进行了转录组测序，通过Lasso模型及生信分析，解析出仑伐替尼的敏感标记物为ACOT6、MT1X、NEDD4L、PCYOX1，耐药标记物为JUN、HIST1H1E、WNT6、ZC3H12D、CHAC1、ANKRD37、CST1、SPNS3、COX6A2。其训练集AUC为0.86。之后，我们随后通过同样的方法，收集了多个肝癌标本进行类器官培养、药敏测试和转录组测序，进行分子分型研究，得到仑伐替尼的验证集为0.81。
[0014]本专利技术的第二方面：提供了所述仑伐替尼耐药标记物JUN表达量的定量试剂在制备仑伐替尼耐药性检测试剂的应用。
[0015]进一步的，检测的样本为肝癌组织样本，所述定量试剂为转录组测序试剂、PCR、基因芯片、组织芯片、NanoString技术、免疫组化试剂中任意一种。
[0016]进一步的，提供了一种仑伐替尼耐药性评估试剂盒，包含检测所述仑伐替尼耐药性标记物JUN表达量的定量试剂。
[0017]进一步的，提供了一种原发性肝癌的仑伐替尼耐药分析系统，包括：
[0018]靶点表达量检测装置：用于检测样本中所述仑伐替尼耐药标记物JUN的表达量；所述样本为患者肝癌组织；
[0019]耐药分析装置：基于仑伐替尼耐药性标记物JUN的表达量，确定肝癌的用药效果；
[0020]结果输出装置：用于输出耐药分析装置分析得到的结果。
[0021]本专利技术的第三方面：提供了一种治疗肝癌的药物组合物，包含仑伐替尼及仑伐替尼耐药标记物JUN的抑制剂。该药物组合物通过抑制仑伐替尼耐药基因的表达来增进仑伐替尼对特定患者的药效。
[0022]进一步的，所述仑伐替尼耐药标记物JUN的抑制剂为shc
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JUN。
[0023]本专利技术相比现有技术的有益效果为：
[0024]本专利技术确定了JUN基因与仑伐替尼耐药相关，所述耐药标记物JUN可用于预测仑伐替尼的药效。通过对肝癌患者的组织测序，或通过RT
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qPCR、免疫组化的方法检测相关分子的表达，可为仑伐替尼的用药与肝癌的精准治疗提供线索。
附图说明
[0025]下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步说明：
[0026]图1为肝细胞肝癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)患者的类器官保留患者的病理特征和组织标记物。其中，图1A，HCC患者不同位点的HE及免疫组化染色；图1B，HCC患者类器官的显微镜下状态和HE染色；图1C，类器官的免疫荧光染色；图1D，类器官的免疫组化染色。
[0027]图2为类器官保留患者的外显子、转录组特征。其中，图2A，外显子测序揭示类器官保留了患者的突变特征。图2B，转录组测序显示类器官保留了患者的转录组特征。
[0028]图3为类器官药本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种仑伐替尼耐药标记物，其特征在于，所述仑伐替尼耐药标记物为JUN。2.根据权利要求1所述的仑伐替尼耐药标记物，其特征在于，所述耐药标记物为RNA或其逆转录的cDNA，或蛋白。3.检测权利要求1中所述仑伐替尼耐药标记物JUN表达量的定量试剂在制备仑伐替尼耐药性检测试剂的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，检测的样本为肝癌组织样本，所述定量试剂为转录组测序试剂、PCR、基因芯片、组织芯片、NanoString技术、免疫组化试剂中任意一种。5.一种仑伐替尼耐药性评估试剂盒，其特征在于：包含检测权利要求1中所述仑伐替尼耐药性标记物JUN...

【专利技术属性】
技术研发人员：张宁，杨慧，程景辉，吴健民，庄昊，
申请(专利权)人：北京大学第一医院，
类型：发明
国别省市：