一种间充质干细胞修复注射液及其制备方法技术

本发明专利技术提出了一种间充质干细胞修复注射液及其制备方法，属于医药技术领域。通过乳液法制得了多孔中空CaCO3/SiO2微球，进一步与磷酸氢二铵反应制得多孔中空羟基磷灰石/SiO2微球，表面经过聚乳酸

【技术实现步骤摘要】
一种间充质干细胞修复注射液及其制备方法


[0001]本专利技术涉及医药
，具体涉及一种间充质干细胞修复注射液及其制备方法。

技术介绍

[0002]间充质干细胞是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层和外胚层。间充质干细胞最初在骨髓中发现，其具有多向分化潜能，造血支持和促进干细胞植入、免疫调控等多种功能，因此备受关注。间充质干细胞在体内或体外的诱导下，可以分化为脂肪、骨、神经等多种组织细胞，连续传代培养仍具有多向分化潜能。
[0003]间充质干细胞在体外培养过程中可分泌内皮细胞生长因子(VEGF)、干细胞生长因子(SCF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、表皮细胞生长因子(EGF)、粒细胞集落刺激因子(GCSF)、巨噬细胞击落刺激因子(M
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CSF)、白细胞介素(IL)等多种细胞因子，发挥重要的旁分泌作用，并可产生一系列细胞外基质分子如粘连蛋白、层粘连蛋白、
Ⅰ‑Ⅳ
型胶原、蛋白聚糖等。这些旁分泌因子参与机体组织损伤修复，抑制受损组织细胞凋亡，促进受损组织细胞增殖，抗炎症反应以及抑制损伤部位引发炎症的相关细胞增殖和迁移等。
[0004]间充质干细胞注射液在临床上可以用于预防和治疗免疫系统疾病，糖尿病等。但是与其他注射液不同的是，间充质干细胞注射液中的活性成分为干细胞，传统用于配置注射液的氯化钠、DMSO等辅料对间充质干细胞进行保存时，会使干细胞的活性大幅度下降，无法长期保证细胞活性。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提出一种间充质干细胞修复注射液及其制备方法，将间充质干细胞接种于微球上，提高了注射液的稳定性，延长了间充质干细胞的保存时间，提高了其存活率，通过加入包埋混合素，提高了注射液对软骨消炎、软骨修复的作用，具有广阔的应用前景。
[0006]本专利技术的技术方案是这样实现的：本专利技术提供一种间充质干细胞修复注射液的制备方法，通过乳液法制得了多孔中空CaCO3/SiO2微球，进一步与磷酸氢二铵反应制得多孔中空羟基磷灰石/SiO2微球，表面经过聚乳酸
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羟基乙酸共聚物包覆，然后通过丝素蛋白和聚多巴胺表面改性，制得的改性聚乳酸
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羟基乙酸共聚物包覆的多孔中空羟基磷灰石/SiO2微球接种间充质干细胞悬液，与包埋混合素β和白细胞介素6的微球、去离子水和椰油酰胺丙基甜菜碱混合均匀，制得间充质干细胞修复注射液。
[0007]优选地，所述间充质干细胞为大鼠滑膜间充质干细胞。
[0008]作为本专利技术的进一步改进，包括以下步骤：S1.多孔中空CaCO3/SiO2微球的制备：将亲油乳化剂、正硅酸烷基酯溶于有机溶剂中，得到油相；将亲水乳化剂、致孔剂、碳酸钠溶于水中，得到水相；将油相加入水相中，搅拌
混合均匀，乳化，然后将乳化液倒入氯化钙溶液中，搅拌反应，离心，洗涤，干燥，制得多孔中空CaCO3/SiO2微球；S2.多孔中空羟基磷灰石/SiO2微球的制备：将步骤S1制得的多孔中空CaCO3/SiO2微球加入磷酸氢二铵溶液中，调节溶液pH值为碱性，加热搅拌反应，离心，洗涤，干燥，制得多孔中空羟基磷灰石/SiO2微球；S3.聚乳酸
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羟基乙酸共聚物的包覆：将步骤S2制得的多孔中空羟基磷灰石/SiO2微球加入乙醇水溶液中，加入硅烷偶联剂，加热搅拌反应，离心，洗涤，加入二氯甲烷中，加入聚乳酸
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羟基乙酸共聚物，搅拌反应，离心，洗涤，干燥，制得聚乳酸
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羟基乙酸共聚物包覆的多孔中空羟基磷灰石/SiO2微球；S4.丝素/聚多巴胺改性：将步骤S3制得的聚乳酸
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羟基乙酸共聚物包覆的多孔中空羟基磷灰石/SiO2微球加入水中，加入多巴胺盐酸盐和催化剂，加热搅拌反应，加入丝素蛋白，搅拌反应，离心，洗涤，冻干，得到改性聚乳酸
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羟基乙酸共聚物包覆的多孔中空羟基磷灰石/SiO2微球；S5.间充质干细胞的吸附：将步骤S4制得的改性聚乳酸
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羟基乙酸共聚物包覆的多孔中空羟基磷灰石/SiO2微球加入注射器中，加入间充质干细胞悬液，在负压下使得细胞悬液浸润并进入微球，培养，离心，洗涤，得到接种间充质干细胞的微球；S6.混合素的包埋：将干扰素β和白细胞介素6均匀分散于海藻酸钠水溶液中，乳化，滴加氯化钙溶液，常温固化，离心，洗涤，冻干，制得包埋混合素；S7.间充质干细胞修复注射液的制备：将步骤S5制得的接种间充质干细胞的微球、步骤S6制得的包埋混合素、去离子水、椰油酰胺丙基甜菜碱混合均匀，制得间充质干细胞修复注射液。
[0009]作为本专利技术的进一步改进，步骤S1中所述致孔剂包括大孔致孔剂和介孔致孔剂，所述介孔致孔剂选自碳酸氢铵、十六烷基三甲基溴化铵、氧乙烯
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氧丙烯三嵌段共聚物PEO20
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PPO70
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PEO20、PEO106
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PPO70
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PEO106中的至少一种；所述大孔致孔剂选自聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、聚乙二醇辛基苯基醚中的至少一种，优选地，所述致孔剂为碳酸氢铵和聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯的混合物，质量比为2
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3:5；所述亲油乳化剂、正硅酸烷基酯的质量比为1
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2:5
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10；所述亲水乳化剂、致孔剂、碳酸钠的质量比为1
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2:2
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3:10
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15；所述油相和水相的质量比为3
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5:7
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10；所述乳化液和氯化钙溶液的质量比为10
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12:7
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10；所述氯化钙溶液的浓度为5
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7wt%。
[0010]优选地，所述亲油乳化剂选自司盘
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20、司盘
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40、司盘
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60、司盘
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80中的至少一种；所述亲水乳化剂选自吐温
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20、吐温
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40、吐温
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60、吐温
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80中的至少一种；所述有机溶剂选自石油醚、二氯甲烷、氯仿、甲苯、正己烷、环己烷、环庚烷、正庚烷、乙醚中的至少一种；所述正硅酸烷基酯为正硅酸甲酯或正硅酸乙酯。
[0011]作为本专利技术的进一步改进，步骤S2中所述磷酸氢二铵的添加量为保证钙和磷的摩尔比为5:3，所述调节溶液pH值为11.5
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12.5，所述加热搅拌反应的温度为90
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100℃，时间为12
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15h。
[0012]作为本专利技术的进一步改进，步骤S3中所述多孔中空羟基磷灰石/SiO2微球、硅烷偶联剂、聚乳酸
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羟基乙酸共聚物的质量比为10:0.5
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1:3
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5，所述加热搅拌反应的温度为50
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70℃，时间为2
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3h，所述搅拌反应的时本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种间充质干细胞修复注射液的制备方法，其特征在于，通过乳液法制得了多孔中空CaCO3/SiO2微球，进一步与磷酸氢二铵反应制得多孔中空羟基磷灰石/SiO2微球，表面经过聚乳酸
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羟基乙酸共聚物包覆，然后通过丝素蛋白和聚多巴胺表面改性，制得的改性聚乳酸
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羟基乙酸共聚物包覆的多孔中空羟基磷灰石/SiO2微球接种间充质干细胞悬液，与包埋混合素β和白细胞介素6的微球、去离子水和椰油酰胺丙基甜菜碱混合均匀，制得间充质干细胞修复注射液。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.多孔中空CaCO3/SiO2微球的制备：将亲油乳化剂、正硅酸烷基酯溶于有机溶剂中，得到油相；将亲水乳化剂、致孔剂、碳酸钠溶于水中，得到水相；将油相加入水相中，搅拌混合均匀，乳化，然后将乳化液倒入氯化钙溶液中，搅拌反应，离心，洗涤，干燥，制得多孔中空CaCO3/SiO2微球；S2.多孔中空羟基磷灰石/SiO2微球的制备：将步骤S1制得的多孔中空CaCO3/SiO2微球加入磷酸氢二铵溶液中，调节溶液pH值为碱性，加热搅拌反应，离心，洗涤，干燥，制得多孔中空羟基磷灰石/SiO2微球；S3.聚乳酸
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羟基乙酸共聚物的包覆：将步骤S2制得的多孔中空羟基磷灰石/SiO2微球加入乙醇水溶液中，加入硅烷偶联剂，加热搅拌反应，离心，洗涤，加入二氯甲烷中，加入聚乳酸
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羟基乙酸共聚物，搅拌反应，离心，洗涤，干燥，制得聚乳酸
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羟基乙酸共聚物包覆的多孔中空羟基磷灰石/SiO2微球；S4.丝素/聚多巴胺改性：将步骤S3制得的聚乳酸
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羟基乙酸共聚物包覆的多孔中空羟基磷灰石/SiO2微球加入水中，加入多巴胺盐酸盐和催化剂，加热搅拌反应，加入丝素蛋白，搅拌反应，离心，洗涤，冻干，得到改性聚乳酸
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羟基乙酸共聚物包覆的多孔中空羟基磷灰石/SiO2微球；S5.间充质干细胞的吸附：将步骤S4制得的改性聚乳酸
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羟基乙酸共聚物包覆的多孔中空羟基磷灰石/SiO2微球加入注射器中，加入间充质干细胞悬液，在负压下使得细胞悬液浸润并进入微球，培养，离心，洗涤，得到接种间充质干细胞的微球；S6.混合素的包埋：将干扰素β和白细胞介素6均匀分散于海藻酸钠水溶液中，乳化，滴加氯化钙溶液，常温固化，离心，洗涤，冻干，制得包埋混合素；S7.间充质干细胞修复注射液的制备：将步骤S5制得的接种间充质干细胞的微球、步骤S6制得的包埋混合素、去离子水、椰油酰胺丙基甜菜碱混合均匀，制得间充质干细胞修复注射液。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S1中所述致孔剂包括大孔致孔剂和介孔致孔剂，所述介孔致孔剂选自碳酸氢铵、十六烷基三甲基溴化铵、氧乙烯
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氧丙烯三嵌段共聚物PEO20
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PPO70
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PEO20、PEO106
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PPO70
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PEO106中的至少一种；所述大孔致孔剂选自聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、聚乙二醇辛基苯基醚中的至少一种，优选地，所述致孔剂为碳酸氢铵和聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯的混合物，质量比为2
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3:5；所述亲油乳化剂、正硅酸烷基酯的质量比为1
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2:5
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10；所述亲水乳化...

【专利技术属性】
技术研发人员：王壮，雷起凤，尹娜，梁玉倩，
申请(专利权)人：北京青藤谷禧干细胞科技研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：