含成纤维细胞条件培养液的眼用制剂及制备方法技术

本发明专利技术的目的是提供一种含成纤维细胞条件培养液的眼用制剂，按质量百分比由以下物料组成：去离子水40％

【技术实现步骤摘要】
含成纤维细胞条件培养液的眼用制剂及制备方法


[0001]本专利技术属于医疗卫生
，具体涉及一种含成纤维细胞条件培养液的眼用制剂，本专利技术还涉及含成纤维细胞条件培养液的眼用制剂的制备方法。

技术介绍

[0002]干眼症指多种因素导致，以眼睛干涩为主要症状的泪液分泌障碍性眼病，常伴有双眼痒感、异物感、烧灼感，或畏光、视物模糊、视力波动等表现。近年来，手机、电脑、隐性眼镜使用增多，熬夜和过度用眼造成的“视觉疲劳综合征”导致干眼症的发病率呈逐渐上升趋势；同时长期使用抗生素类滴眼液以及全身性疾病的影响，也诱发和加剧了干眼症的发生，严重影响人们的视觉健康和生活质量。
[0003]目前理论认为，泪膜不稳定是干眼症的主要原因，临床上将干眼症分为水缺乏型、粘蛋白缺乏型、脂质缺乏型及混合型。治疗干眼症最理想的方法是能够彻底去除病因，随损毁的眼泪腺、睑板腺、结膜杯状细胞等分泌功能恢复正常。那么什么是干眼症的真正病因呢？
[0004]在从事成纤维细胞大量体外扩增的过程中，发现干眼症患者行双眼皮或下眼袋手术切除的皮肤进行原代细胞培养时，无法获得大量扩增，传1
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2代细胞就传不下去，与其它患者不同。进一步研究发现，只有在使用支原体清除剂时，干眼症患者切除的皮肤培养出来的成纤维细胞才能获得和其它患者皮肤培养出的细胞一样的倍增能力。因此研究提出：干眼症患者是由于眼周包括角膜，睑板腺等部位感染了支原体，进而影响了这些部位分泌细胞外基质的成纤维细胞分泌功能下降，产生了如下变化：
[0005]角膜主要由成纤维细胞的弹力纤维等细胞外基质构成。分泌功能下降，自然角膜含水量就下降，呈现“眼干”症状。
[0006]泪腺、睑板腺导管周围胶原下降，锁水能力下降，蠕动性下降，导致泪腺分泌油脂、睑板腺分泌油脂受阻，从而出现不同类型的干眼症状；
[0007]同理也会影响到结膜的杯状细胞等组织的正常功能。
[0008]支原体是在1898年发现的，又称人形支原体，是一种无细胞壁、介于独立生活和细胞内寄生生活间的最小型原核生物。其大小介于细菌和病毒之间。它感染细胞后，一般细胞在显微镜下没有明显的变化，随之时间的延长细胞出现变形、死亡，无法传代下去。医学研究中仅在培养皿、75cm2或者175cm培养瓶中培养细胞，是看不出支原体对细胞的影响的。只有在细胞移植临床应用中，达到108这个数量级出现肉眼可见的临床效果时，需要用到细胞工厂来培养时，如果因污染，支原体对细胞的影响才显现出来。
[0009]支原体感染是一种非常隐匿、不呈现典型的“红肿热痛”炎症表现。因此干眼症按目前的理论认为是自身免疫性疾病，故而在临床上使用激素、环孢素A滴眼液等免疫抑制剂来治疗干眼症。而研究认为干眼症是支原体造成的一种感染性疾病。由于其感染的隐匿性，临床上不容易觉察到，忽略了其作为致病菌的可能性。正是由于对干眼症患者眼周手术切除皮肤进行大规模培养成纤维细胞时，才发现了支原体的存在。
[0010]临床上能够检测到细菌、霉菌、病毒入血并繁殖，从没在临床上听说支原体入血被检测到。说明支原体只存在体表、粘膜等处，机体的细胞或体液免疫对进入深部支原体有杀伤作用。视觉疲劳综合征，正是由于长期处于睁眼状态，眼周运动减少，从而使眼睛周围血液循环减慢，从而使机体的体液或细胞免疫功能下降，不利于杀死支原体，从而加剧了干眼症的发生。
[0011]人成纤维细胞条件培养液(Human Fibroblast Conditioned Medium)是随着细胞生物技术诞生一种新的生物材料。皮肤真皮作为结缔组织，包括细胞和非细胞两部分组成。非细胞部分即细胞外基质(ECM，ExrtaCellular Matrix)，主要包括胶原纤维(Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白)和弹性纤维、纤维粘连蛋白等。细胞成分主要是成纤维细胞，是生成真皮ECM中所有组分、维持ECM微环境稳定、参与ECM的更新和重建。体外扩增的细胞产生大量的培养上清液即成纤维细胞条件培养液。这其中除了含有上述ECM外，还含有碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)、转化生长因子
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β(TGF
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β)等生长因子。因此将成纤维细胞条件培养液加入眼部制剂中，将会对干眼症的治疗起到积极的作用：

技术实现思路

[0012]本专利技术的目的是提供一种含成纤维细胞条件培养液的眼用制剂，解决了现有技术中存在的没有启动机体自身细胞和体液免疫功能清除和抑制支原体的问题，本专利技术通过结膜和角膜上皮组织吸收细胞外基质，通过胶体渗透压增加吸引水分过来，达到组织间夜增加，促进细胞外液循环，充分发挥自身细胞和体液免疫功能从而达到清除和抑制支原体的目的。
[0013]本专利技术的另一目的是提供一种含成纤维细胞条件培养液的眼用制剂的制备方法。
[0014]本专利技术所采用的第一技术方案是，含成纤维细胞条件培养液的眼用制剂，按质量百分比由以下物料组成：去离子水40％
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90％、海藻糖5％
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28％、玻尿酸0.05％
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0.3％、成纤维细胞条件培养液5％
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30％，以上物料质量百分比之和为100％。
[0015]本专利技术第一技术方案的特点还在于，
[0016]所述成纤维细胞条件培养液制备方法如下：
[0017]S1.传代人皮肤成纤维细胞至第4代，在细胞工厂进行体外扩增；
[0018]S2.细胞培养采用8％胎牛血清+专用成纤维培养基；或者使用无血清间充质细胞培养基进行培养；
[0019]S3.待铺满覆盖率≥90％收集无菌的成纤维细胞上清液；
[0020]S4.将S3中收集的成纤维细胞上清液收汇总后按100毫升上清液加入注射用活性炭1克的配比关系，搅拌，过滤，除色及异味，得到澄清淡黄色、透明液体，然后无菌保存，即为成纤维细胞条件培养液。
[0021]S4中搅拌时间为6分钟～10分钟。
[0022]S4中过滤具体为：依次经0.45um、0.22um微孔滤膜进行过滤。
[0023]本专利技术所采用的第二技术方案是，含成纤维细胞条件培养液的眼用制剂的制备方法，具体按照以下步骤实施：
[0024]步骤1、将去离子水、海藻糖、玻尿酸、充分混合，搅拌，高温灭菌；
[0025]步骤2、静止冷却后，无菌条件下加入成纤维细胞条件培养液密封混匀；
[0026]步骤3、充分混匀后静置，然后调节PH；
[0027]步骤4、过滤，无菌灌装至一次性滴眼瓶中；
[0028]步骤5、最后进行终末辐照灭菌，即得到含成纤维细胞条件培养液的眼用制剂。
[0029]本专利技术第二技术方案的特点还在于，
[0030]步骤1中搅拌速度为100r/min～300r/min，时间为30min～60min，高温灭菌温度为100℃～123℃，高温灭菌时间为20分钟～40分钟；
[0031]步骤2中加入成纤维细胞条件培养液后按质量百分比：去离子水40％
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.含成纤维细胞条件培养液的眼用制剂，其特征在于，按质量百分比由以下物料组成：去离子水40％
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90％、海藻糖5％
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28％、玻尿酸0.05％
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0.3％、成纤维细胞条件培养液5％
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30％，以上物料质量百分比之和为100％。2.根据权利要求1所述的含成纤维细胞条件培养液的眼用制剂，其特征在于，所述成纤维细胞条件培养液制备方法如下：S1.传代人皮肤成纤维细胞至第4代，在细胞工厂进行体外扩增；S2.细胞培养采用8％胎牛血清+专用成纤维培养基；或者使用无血清间充质细胞培养基进行培养；S3.待铺满覆盖率≥90％收集无菌的成纤维细胞上清液；S4.将S3中收集的成纤维细胞上清液收汇总后按100毫升上清液加入注射用活性炭1克的配比关系，搅拌，过滤，除色及异味，得到澄清淡黄色、透明液体，然后无菌保存，即为成纤维细胞条件培养液。3.根据权利要求2所述的含成纤维细胞条件培养液的眼用制剂，其特征在于，所述S4中搅拌时间为6分钟～10分钟。4.根据权利要求2所述的含成纤维细胞条件培养液的眼用制剂，其特征在于，所述S4中过滤具体为：依次经0.45um、0.22um微孔滤膜进行过滤。5.含成纤维细胞条件培养液的眼用制剂的制备方法，其特征在于，具体按照以下步骤实施：步骤1、将去离子水、海藻糖、玻尿酸、充分混合，搅拌，高温灭菌；步骤2、静止冷却后，无菌条件下加入成纤维细胞条件培养液密封混匀；步骤3、充分混匀后静置，然...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵玉明，
申请(专利权)人：北京恩吉赛生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：