神经移植物及其制备方法技术

本发明专利技术描述了再生潜力降低的组织移植物、制备此类移植物的方法以及相关之试剂盒与处理方法。该方法可以包括用包含胰蛋白酶、α

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】神经移植物及其制备方法


[0001]本专利申请要求2021年8月25日提交的美国非临时专利申请第17/411,718号的优先权，该申请要求2020年8月28日提交的美国临时专利申请第63/071,635号的优先权，这些申请的全部内容在通过引用并入本文。

技术介绍

[0002]周围神经损伤是慢性残疾的主要来源。当切断的轴突无法与远端神经重新建立连续性时，对神经损伤的管理不善会导致疼痛的神经瘤。尽管神经在受伤后有再生的潜力，但这取决于再生神经纤维与切断的神经节段(以及其中的许旺氏细胞基底层)的适当接触。在严重的组织损伤的情况下，正在再生的轴突可能无法到达远端神经残端，而会形成一团缠结的轴突及结缔组织，最终导致疼痛的球状神经瘤。在神经严重受损的情况下，例如受损或切断的神经的不连续性太大而无法桥接，疼痛性神经瘤的形成仍然是一个挑战。
[0003]目前用于神经瘤治疗之允许对齐的轴突生长的技术，如将神经移植物或导管缝合到神经残端(nerve stump)的末端，并不能充分保护神经末端免受包括生长因子和其他促进轴突生长的物质之外部环境的影响。随着时间的推移，轴突因此可以生长穿过移植物或导管，并在它们离开开放的远端时形成神经瘤，于该处不再有促进对齐生长的结构。当前的市售产品，例如神经帽(nerve cap)，已被用于经由阻遏轴突来提供用于阻碍神经元延伸和神经生长的物理屏障。然而，由于神经帽中缺乏内部结构而可造成轴突于随机方向延伸，这些装置仍可导致一个或多个疼痛性神经瘤之产生。

技术实现思路

[0004]根据本公开，制备组织移植物的方法可以用包括(a)胰蛋白酶及α
‑
胰凝乳蛋白酶(alpha
‑
chymotrypsin，ACT)，或(b)胰蛋白酶、ACT及乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA)的分解溶液(消化溶液)处理组织，以从组织中基本上去除一种或多种易感蛋白质(susceptible proteins)。
[0005]该分解溶液可包含约3.5x103USP单位/mL至约4.5x103USP单位/mL的胰蛋白酶。该分解溶液可包含约50USP单位/mL至约55USP单位/mL的ACT。该分解溶液可包含约1.2mM至约1.5mM的EDTA。该分解溶液可包含约3.5x103USP单位/mL至约4.5x103USP单位/mL的胰蛋白酶、约50USP单位/mL至约55USP单位/mL的ACT、以及约1.2mM至约1.5mM的EDTA。该分解溶液还可包含至少一种蛋白分解酶。该一种或多种易感蛋白质包括层连结蛋白α
‑
1、层连结蛋白α
‑
2、层连结蛋白α
‑
4、层连结蛋白α
‑
5、层连结蛋白β
‑
1、层连结蛋白β
‑
2、层连结蛋白γ
‑
1、胶原蛋白IVα
‑
1(IV)链、胶原蛋白IVα
‑
1/5(IV)链、胶原蛋白αIV
‑
2链、胶原蛋白αIV
‑
3链、纤网蛋白1(III型4、7结构域)、珍珠素(perlecan)、巢蛋白(nidogen)
‑
1、巢蛋白
‑
2或其组合。经处理的该组织可基本上不包含层连结蛋白α
‑
1、层连结蛋白α
‑
2、层连结蛋白α
‑
4、层连结蛋白α
‑
5、层连结蛋白β
‑
1、层连结蛋白β
‑
2或层连结蛋白γ
‑
1中的一种或多种。经处理的该组织可基本上不包含胶原蛋白IVα
‑
1(IV)链、胶原蛋白IVα
‑
1/5(IV)链、胶原蛋白αIV
‑
2链或胶
原蛋白αIV
‑
3链中的一种或多种。经处理的该组织可基本上不包含纤网蛋白1(III型4、7结构域)、珍珠素、巢蛋白
‑
1、巢蛋白
‑
2中的一种或多种。经处理的该组织可包含胶原蛋白Iα
‑
1链、胶原蛋白α
‑
2(I)链、胶原蛋白α
‑
3(VI)链、基膜聚醣(lumican)、胶原蛋白α
‑
1(VI)链、胶原蛋白α
‑
1(XXVIII)链、皮连蛋白(dermatopontin)、胶原蛋白α
‑
1(III)链、胶原蛋白α
‑
3(V)链、角蛋白、II型细胞骨架1、小纤维蛋白
‑
1、核心蛋白聚醣(decorin)、胶原蛋白α
‑
1(XVI)链、玻璃黏连蛋白(vitronectin)、胶原蛋白α
‑
1(XXXI)链、髓磷脂蛋白P0、胶原蛋白α
‑
2(VI)链、胶原蛋白α
‑
1(VIII)链、胶原蛋白α
‑
1(V)链、无孢蛋白聚醣(asporin)、脯精蛋白(prolargin)、双醣链蛋白聚醣(biglycan)、胶原蛋白α
‑
1(II)链、髓磷脂P2蛋白、骨膜素(periostin)、胶原蛋白α
‑
1(XIV)链、α
‑
水晶体蛋白B链或胶原蛋白α
‑
1(XII)链中的一种或多种。可在约4℃至约40℃的温度下用该分解溶液处理该组织。可用该分解溶液处理该组织约4小时至约24小时的时间段范围。该方法可进一步包括用pH范围为约6.8至约7.5的缓冲溶液清洗经处理的该组织。该缓冲溶液可包括磷酸盐缓冲液、盐性阴极液(saline catholytes)、Tris缓冲液(Tris
‑
buffered saline)、二甲胂酸盐缓冲液(cacodylate buffer)、索任生磷酸盐缓冲液(phosphate buffer)、磷酸盐
‑
柠檬酸盐缓冲液(phosphate
‑
citrate buffer)或巴比妥缓冲液(barbital buffer)。可用该缓冲溶液清洗经处理的该组织两次或更多次。可用该缓冲溶液在约4℃至约40℃的温度范围清洗经处理的该组织。可用该缓冲溶液在约1分钟至约4小时的时间段范围清洗经处理的该组织。该方法可进一步包括用包含α
‑
抗胰蛋白酶及α
‑2‑
巨球蛋白的血清清洗经处理的该组织。该血清可为胎牛血清、兔血清、山羊血清、马血清、绵羊血清、猪血清或鸡血清。可用该血清清洗经处理的该组织两次或更多次。可用该血清在约4℃至约40℃的温度范围清洗经处理的该组织。可用该血清在约30分钟至约8小时的时间段范围清洗经处理的该组织。该方法可进一步包括使经处理的该组织与钙通道阻断剂、细胞外钙(extracellular calcium)、醣胺聚醣及/或醣蛋白接触，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种制备组织移植物的方法，其特征在于，包括：用包含(a)胰蛋白酶及α
‑
胰凝乳蛋白酶(ACT)，或(b)胰蛋白酶、ACT及乙二胺四乙酸(EDTA)的分解溶液处理组织，以从该组织中基本上去除一种或多种易感蛋白质。2.如权利要求1记载的方法，其中，该分解溶液包含约3.5x 103USP单位/mL至约4.5x 103USP单位/mL的胰蛋白酶。3.如权利要求1或2记载的方法，其中，该分解溶液包含约50USP单位/mL至约55USP单位/mL的ACT。4.如前述权利要求任一项记载的方法，其中，该分解溶液包含约1.2mM至约1.5mM的EDTA。5.如前述权利要求任一项记载的方法，其中，该分解溶液包含以下一种或多种：约3.5x 103USP单位/mL至约4.5x 103USP单位/mL的胰蛋白酶；约50USP单位/mL至约55USP单位/mL的ACT；及约1.2mM至约1.5mM的EDTA。6.如前述权利要求任一项记载的方法，其中该分解溶液还包含至少一种蛋白分解酶。7.如前述权利要求任一项记载的方法，其中，该一种或多种易感蛋白质包括层连结蛋白α
‑
1、层连结蛋白α
‑
2、层连结蛋白α
‑
4、层连结蛋白α
‑
5、层连结蛋白β
‑
1、层连结蛋白β
‑
2、层连结蛋白γ
‑
1、胶原蛋白IVα
‑
1(IV)链、胶原蛋白IVα
‑
1/5(IV)链、胶原蛋白αIV
‑
2链、胶原蛋白αIV
‑
3链、纤网蛋白1(III型4、7结构域)、珍珠素、巢蛋白
‑
1、巢蛋白
‑
2中的至少一种或其组合。8.如前述权利要求任一项记载的方法，其中经处理的该组织基本上不包含层连结蛋白α
‑
1、层连结蛋白α
‑
2、层连结蛋白α
‑
4、层连结蛋白α
‑
5、层连结蛋白β
‑
1、层连结蛋白β
‑
2和层连结蛋白γ
‑
1的一种或多种。9.如前述权利要求任一项记载的方法，其中经处理的该组织基本上不包含胶原蛋白IVα
‑
1(IV)链、胶原蛋白IVα
‑
1/5(IV)链、胶原蛋白αIV
‑
2链和胶原蛋白αIV
‑
3链中的一种或多种。10.如前述权利要求任一项记载的方法，其中经处理的该组织基本上不包含纤网蛋白1(III型4、7结构域)、珍珠素、巢蛋白
‑
1、巢蛋白
‑
2中的一种或多种。11.如前述权利要求任一项记载的方法，其中，经处理的该组织包含胶原蛋白Iα
‑
1链、胶原蛋白α
‑
2(I)链、胶原蛋白α
‑
3(VI)链、基膜聚醣、胶原蛋白α
‑
1(VI)链、胶原蛋白α
‑
1(XXVIII)链、皮连蛋白、胶原蛋白α
‑
1(III)链、胶原蛋白α
‑
3(V)链、角蛋白、II型细胞骨架1、小纤维蛋白
‑
1、核心蛋白聚醣、胶原蛋白α
‑
1(XVI)链、玻璃黏连蛋白、胶原蛋白α
‑
1(XXXI)链、髓磷脂蛋白P0、胶原蛋白α
‑
2(VI)链、胶原蛋白α
‑
1(VIII)链、胶原蛋白α
‑
1(V)链、无孢蛋白聚醣、脯精蛋白(prolargin)、双醣链蛋白聚醣、胶原蛋白α
‑
1(II)链、髓磷脂P2蛋白、骨膜素、胶原蛋白α
‑
1(XIV)链、α
‑
水晶体蛋白B链或胶原蛋白α
‑
1(XII)链中的一种或多种。12.如前述权利要求任一项记载的方法，其中在约4℃至约40℃的温度下用该分解溶液处理该组织。13.如前述权利要求任一项记载的方法，其中用该分解溶液处理该组织约4小时至约24小时的时间段范围。14.如前述权利要求任一项记载的方法，进一步包括用pH范围为约6.8至约7.5的缓冲
溶液清洗经处理的该组织。15.如权利要求14记载的方法，其中该缓冲溶液包括磷酸盐缓冲液、盐性阴极液、Tris缓冲液、二甲胂酸盐缓冲液、索任生磷酸盐缓冲液、磷酸盐
‑
柠檬酸盐缓冲液或巴比妥缓冲液。16.如权利要求14或15记载的方法，其中用该缓冲溶液清洗经处理的该组织两次或更多次。17.如权利要求14
‑
16任一项记载的方法，其中用该缓冲溶液在约4℃至约40℃的温度范围清洗经处理的该组织。18.如权利要求14
‑
17任一项记载的方法，其中用该缓冲溶液在约1分钟至约4小时的时间段范围清洗经处理的该组织。19.如前述权利要求任一项记载的方法，进一步包括用包含α
‑
抗胰蛋白酶及α
‑2‑
巨球蛋白的血清清洗经处理的该组织。20.如权利要求19所述的方法，其中该血清为胎牛血清、兔血清、山羊血清、马血清、绵羊血清、猪血清或鸡血清。21.如权利要求19或20记载的方法，其中用该血清清洗经处理的该组织两次或更多次。22.如权利要求19
‑
21任一项记载的方法，其中用该血清在约4℃至约40℃的温度范围清洗经处理的该组织。23.如权利要求19
‑
22任一项记载的方法，其中用该血清在约30分钟至约8小时的时间段范围清洗经处理的该组织。24.如前述权利要求任一项记载的方法，进一步包括使经处理的该组织与钙通道阻断剂、细胞外钙、醣胺聚醣及/或醣蛋白接触，其中该缓冲溶液、该血清或该缓冲溶液及该血清两者可选地包含钙通道阻断剂、细胞外钙、醣胺聚醣及/或醣蛋白。25.如权利要求24记载的方法，其中该组织移植物包含钙通道阻断剂，且其中该钙通道阻断剂包含钴Co
2+
、锰Mn
2+
、镧La
3+
或尼群地平中的一种或多种。26.如权利要求24记载的方法，其中该组织移植物包含醣胺聚醣，且其中该醣胺聚醣包含角蛋白硫酸盐或软骨素硫酸盐中的一种或多种。27.如权利要求24记载的方法，其中该组织移植物包含醣蛋白，且其中该醣蛋白包含一种或多种髓磷脂相关之醣蛋白。28.如前述权利要求任一项记载的方法，其中该组织移植物为神经移植物，其导致在移植入患者后神经瘤形成减少及/或轴突向外生长减少。29.如前述权利要求任一项记载的方法，其中该组织移植物具有长度约3mm至约100mm，例如约5mm至约100mm，或约15mm至约40mm。30.如前述权利要求任一项记载的方法，其中该组织移植物的直径约为1mm至约10mm，例如直径约为1mm至约7mm，或直径约为1mm至约2mm。31.如前述权利要求任一项记载的方法，其中该组织移植物限定总体积的范围为约5mm3至约55000mm3。32.如前述权利要求任一项记载的方法，其中经处理的该组织移植物藉由冷冻干燥进一步处理。33.如前述权利要求任一项记载的方法，经处理的该组织移植物通过经处理的该组织
形成糊状物或经处理的该组织形成凝胶来进一步处理。34.如前述权利要求任一项记载的方法，其中该组织为哺乳动物组织，例如人类组织、非人灵长类动物组织、囓齿动物组织、马组织、犬组织、兔组织、猪组织或羊组织。35.如权利要求1
‑
33任一项记载的方法，其中该组织为非哺乳动物组织，例如鱼类组织、两栖动物组织、昆虫组织或植物组织。36.如权利要求1
‑
33任一项记载的方法，其中该组织为神经组织，例如周围神经组织或中枢神经系统组织、上皮组织、结缔组织、肌肉组织、毛细管组织、真皮组织、骨骼组织、平滑肌组织、心脏组织、或脂肪组织中的至少一种。37.权利要求1
‑
33中任一项记载的方法，其中该组织是上皮组织、结缔组织或肌肉组织。38.权利要求1
‑
33中任一项记载的方法，其中该组织是毛细血管组织、真皮组织、骨骼组织、平滑肌组织、心脏组织或脂肪组织。39.权利要求1
‑
33中任一项记载的方法，其中该组织是合成组织。40.一种根据权利要求1
‑
33任一项的方法制备的组织移植物。41.如权利要求40记载的组织移植物，其中该神经移植物基本上不包含层连结蛋白α
‑
1、层连结蛋白α
‑
2、层连结蛋白α
‑
4、层连结蛋白α
‑
5、层连结蛋白β
‑
1、层连结蛋白β
‑
2、层连结蛋白γ
‑
1、胶原蛋白IVα
‑
1(IV)链、胶原蛋白IVα
‑
1/5(IV)链、胶原蛋白αIV
‑
2链、胶原蛋白αIV
‑
3链、纤网蛋白1(III型4、7结构域)、珍珠素、巢蛋白
‑
1、巢蛋白
‑
2中的一种或多种。42.一种组织移植物，其特征在于，其中该组织移植物基本上不包含层连结蛋白α
‑
1、层连结蛋白α
‑
2、层连结蛋白α
‑
4、层连结蛋白α
‑
5、层连结蛋白β
‑
1、层连结蛋白β
‑
2、层连结蛋白γ
‑
1、胶原蛋白IVα
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1(IV)链、胶原蛋白IVα
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1/5(IV)链、胶原蛋白αIV
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2链、胶原蛋白αIV
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3链、纤网蛋白1(III型4、7结构域)、珍珠素、巢蛋白
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【专利技术属性】
技术研发人员：珍妮佛，
申请(专利权)人：阿克松根股份公司，
类型：发明
国别省市：