颗粒和测定方法技术

本文公开了颗粒和在用于检测样品中的生物分子的测定中使用所述颗粒的方法。本公开内容的各种方法利用颗粒进行生物分子吸附。在一些方面，本公开内容提供了利用多种颗粒浓度来差异地分级生物样品的方法。在进一步的方面，本公开内容提供了利用低颗粒浓度来增强所吸附生物分子多样性的方法。附生物分子多样性的方法。附生物分子多样性的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】颗粒和测定方法
交叉引用
[0001]本申请要求2020年7月20日提交的美国临时专利申请号63/054,089和2021年5月26日提交的美国临时专利申请号63/193,535的权益，其中的每一个通过引用以其整体并入本文。

技术介绍

[0002]生物样品(诸如生物流体)含有多种蛋白质，其存在、加工和相对丰度可能指示生物状态。高丰度的蛋白质和其他蛋白质可能掩盖测定中相对于其他蛋白质的信号。样品制备(诸如稀释)可能进一步掩盖测定中的相对信号。

技术实现思路

[0003]许多生物分子收集系统(例如许多产生生物分子冠的基底(biomolecule corona
‑
generating substrate))固有地受到偏离目标的分析物结合和目标分子动态交换的限制，因此提供有限的敏感度和谱分析深度。本文认识到需要用于低丰度生物分子鉴定的可重复和量化的分析方法。本公开内容提供了用于扩展目标生物分子收集和分析的动态范围和谱分析深度的一系列系统、组合物和策略。在某些方面，本公开内容提供了定制用于目标生物分子收集的基底质量和表面积比的方法。本公开内容进一步提供了在生物分子数据中产生量化趋势的策略，使得能够以最小的样品扰动对生物样品进行直接深度组成分析。
[0004]本公开内容的各种方面提供了一种用于使用基底测定生物样品的方法，所述方法包括：使所述生物样品与所述基底接触以在其上形成生物分子冠，所述生物分子冠包含来自所述生物样品的生物分子，其中所述基底具有第一表面积与质量比；测定所述生物分子冠以鉴定所述生物分子，其中所鉴定的不同生物分子的数目高于当所述生物样品与具有不同于所述第一表面积与质量比的第二表面积与质量比的基底接触时所鉴定的不同生物分子的数目。
[0005]在一些实施方案中，所述第二表面积与质量比大于所述第一表面积与质量比。在一些实施方案中，具有所述第一表面积与质量比的所述基底具有比具有所述第二表面积与质量比的所述基底更大的表面积。在一些实施方案中，具有所述第一表面积与质量比的所述基底具有比具有所述第二表面积与质量比的所述基底大至少50％的表面积。在一些实施方案中，具有所述第一表面积与质量比的所述基底具有比具有所述第二表面积与质量比的所述基底大至少100％的表面积。在一些实施方案中，具有所述第一表面积与质量比的所述基底具有比具有所述第二表面积与质量比的所述基底大至少200％的表面积。在一些实施方案中，具有所述第一表面积与质量比的所述基底具有比具有所述第二表面积与质量比的所述基底大至少500％的表面积。在一些实施方案中，具有所述第一表面积与质量比的所述基底和具有所述第二表面积与质量比的所述基底具有彼此相差至多25％的密度。在一些实施方案中，具有所述第一表面积与质量比的所述基底和具有所述第二表面积与质量比的所述基底具有彼此相差至多10％的密度。在一些实施方案中，具有所述第一表面积与质量比
的所述第一基底和具有所述第二表面积与质量比的所述基底具有不同的形状。
[0006]在一些实施方案中，具有所述第一表面积与质量比的所述基底包含第一纳米颗粒并且具有所述第二表面积与质量比的所述基底包含第二纳米颗粒。在一些实施方案中，所述第一纳米颗粒和所述第二纳米颗粒具有相同的颗粒类型。在一些实施方案中，所述第一纳米颗粒或所述第二纳米颗粒具有约80nm至约500nm的直径。在一些实施方案中，所述第一纳米颗粒或所述第二纳米颗粒具有约120nm至约350nm的直径。在一些实施方案中，所述第一纳米颗粒或所述第二纳米颗粒具有至少100nm的直径。在一些实施方案中，所述第一纳米颗粒或所述第二纳米颗粒具有至多500nm的直径。
[0007]在一些实施方案中，所述第一纳米颗粒或所述第二纳米颗粒具有至多1的多分散性指数。在一些实施方案中，所述第一纳米颗粒或所述第二纳米颗粒具有椭圆形几何形状。在一些实施方案中，所述第一纳米颗粒或所述第二纳米颗粒具有基本上球形的几何形状。
[0008]在一些实施方案中，所述第一纳米颗粒或所述第二纳米颗粒包括芯材料和壳材料。在一些实施方案中，所述芯材料包括金属、氧化物、氮化物、陶瓷、碳材料、硅材料、聚合物或其任何组合。在一些实施方案中，所述壳材料包括聚合物、糖类、脂质、肽、自组装单层、溶胶
‑
凝胶、水凝胶、玻璃或其任何组合。在一些实施方案中，所述芯材料具有比所述壳材料更大的密度。在一些实施方案中，所述壳材料包括至少两种材料，并且所述至少两种材料是相分离的。
[0009]在一些实施方案中，具有所述第一表面积与质量比的所述基底或具有所述第二表面积与质量比的所述基底包含表面官能化。在一些实施方案中，所述表面官能化包括极性官能团、酸性官能团、碱性官能团、带电荷官能团、可聚合官能团或其任何组合。在一些实施方案中，所述表面官能化包括氨丙基官能化、胺官能化、硼酸官能化、羧酸官能化、甲基官能化、N
‑
琥珀酰亚胺酯官能化、PEG官能化、链霉亲和素官能化、甲醚官能化、三乙氧基丙基氨基硅烷官能化、巯基官能化、PCP官能化、柠檬酸盐官能化、硫辛酸官能化、BPEI官能化、羧基官能化、羟基官能化或其任何组合。在一些实施方案中，所述表面官能化包括在具有所述第一表面积与质量比的所述基底的表面上或在具有所述第二表面积与质量比的所述基底的表面上至少约1个官能团每20nm2的平均密度。在一些实施方案中，所述表面官能化包括在具有所述第一表面积与质量比的所述基底的表面上或在具有所述第二表面积与质量比的所述基底的表面上约1个官能团每30nm2至约1个官能团每60nm2的平均密度。
[0010]在一些实施方案中，具有所述第一表面积与质量比或所述第二表面积与质量比的所述基底包含微粒。在一些实施方案中，所述微粒具有约1微米至约2微米的直径。在一些实施方案中，所述微粒具有小于约1.5微米的直径。在一些实施方案中，具有所述第二表面积与质量比的所述基底包含微粒。在一些实施方案中，具有所述第二表面积与质量比的所述基底包含纳米颗粒。在一些实施方案中，具有所述第一表面积与质量比的所述基底包含纳米颗粒并且具有所述第二表面积与质量比的所述基底包含微粒。
[0011]在一些实施方案中，具有所述第一表面积与质量比的所述基底和具有所述第二表面积与质量比的所述基底是直径彼此相差至多10％的颗粒。在一些实施方案中，所述生物分子冠占所述生物样品的生物质量的至多0.1％。在一些实施方案中，所述生物分子冠占所述生物样品的生物质量的至多0.01％。在一些实施方案中，所述生物分子冠占所述生物样品的生物质量的至多0.001％。在一些实施方案中，所述生物分子冠占所述生物样品的生物
质量的至多0.0001％。
[0012]在一些实施方案中，所鉴定的不同生物分子的数目比当所述生物样品与具有所述第二表面积与质量比的所述基底接触时所鉴定的不同生物分子的数目高至少5％。在一些实施方案中，所鉴定的不同生物分子的数目比当所述生物样品与具有所述第二表面积与质量比的所述基底接触时所鉴定的不同生物分子的数目高至少10％。在一些实施方案中，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于使用基底测定生物样品的方法，所述方法包括：(a)使所述生物样品与所述基底接触以在所述基底上形成生物分子冠，所述生物分子冠包含来自所述生物样品的生物分子，其中所述基底具有第一表面积与质量比；(b)测定所述生物分子冠以鉴定所述生物分子，其中所鉴定的不同生物分子的数目高于当所述生物样品与具有不同于所述第一表面积与质量比的第二表面积与质量比的基底接触时所鉴定的不同生物分子的数目。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第二表面积与质量比大于所述第一表面积与质量比。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中具有所述第一表面积与质量比的所述基底具有比具有所述第二表面积与质量比的所述基底更大的表面积。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的方法，其中具有所述第一表面积与质量比的所述基底具有比具有所述第二表面积与质量比的所述基底大至少50％的表面积。5.根据权利要求1
‑
4中任一项所述的方法，其中具有所述第一表面积与质量比的所述基底具有比具有所述第二表面积与质量比的所述基底大至少100％的表面积。6.根据权利要求1
‑
5中任一项所述的方法，其中具有所述第一表面积与质量比的所述基底具有比具有所述第二表面积与质量比的所述基底大至少200％的表面积。7.根据权利要求1
‑
6中任一项所述的方法，其中具有所述第一表面积与质量比的所述基底具有比具有所述第二表面积与质量比的所述基底大至少500％的表面积。8.根据权利要求1
‑
7中任一项所述的方法，其中具有所述第一表面积与质量比的所述基底和具有所述第二表面积与质量比的所述基底具有彼此相差至多25％的密度。9.根据权利要求1
‑
8中任一项所述的方法，其中具有所述第一表面积与质量比的所述基底和具有所述第二表面积与质量比的所述基底具有彼此相差至多10％的密度。10.根据权利要求1
‑
9中任一项所述的方法，其中具有所述第一表面积与质量比的所述第一基底和具有所述第二表面积与质量比的所述基底具有不同的形状。11.根据权利要求1
‑
10中任一项所述的方法，其中具有所述第一表面积与质量比的所述基底包含第一纳米颗粒并且具有所述第二表面积与质量比的所述基底包含第二纳米颗粒。12.根据权利要求11所述的方法，其中所述第一纳米颗粒和所述第二纳米颗粒具有相同的颗粒类型。13.根据权利要求11或12所述的方法，其中所述第一纳米颗粒或所述第二纳米颗粒具有约80nm至约500nm的直径。14.根据权利要求11
‑
13中任一项所述的方法，其中第一纳米颗粒或所述第二纳米颗粒具有约120nm至约350nm的直径。15.根据权利要求11
‑
13中任一项所述的方法，其中所述第一纳米颗粒或所述第二纳米颗粒具有至少100nm的直径。16.根据权利要求11、12或15所述的方法，其中所述第一纳米颗粒或所述第二纳米颗粒具有至多500nm的直径。17.根据权利要求11
‑
16中任一项所述的方法，其中所述第一纳米颗粒或所述第二纳米颗粒具有至多1的多分散性指数。
18.根据权利要求11
‑
17中任一项所述的方法，其中所述第一纳米颗粒或所述第二纳米颗粒具有椭圆形几何形状。19.根据权利要求11
‑
18中任一项所述的方法，其中所述第一纳米颗粒或所述第二纳米颗粒具有基本上球形的几何形状。20.根据权利要求11
‑
19中任一项所述的方法，其中所述第一纳米颗粒或所述第二纳米颗粒包括芯材料和壳材料。21.根据权利要求20所述的方法，其中所述芯材料包括金属、氧化物、氮化物、陶瓷、碳材料、硅材料、聚合物或其任何组合。22.根据权利要求20或21所述的方法，其中所述壳材料包括聚合物、糖类、脂质、肽、自组装单层、溶胶
‑
凝胶、水凝胶、玻璃或其任何组合。23.根据权利要求20
‑
22中任一项所述的方法，其中所述芯材料具有比所述壳材料更大的密度。24.根据权利要求20
‑
23中任一项所述的方法，其中所述壳材料包括至少两种材料，并且其中所述至少两种材料是相分离的。25.根据权利要求1
‑
24中任一项所述的方法，其中具有所述第一表面积与质量比的所述基底或具有所述第二表面积与质量比的所述基底包含表面官能化。26.根据权利要求25所述的方法，其中所述表面官能化包括极性官能团、酸性官能团、碱性官能团、带电荷官能团、可聚合官能团或其任何组合。27.根据权利要求25或26所述的方法，其中所述表面官能化包括氨丙基官能化、胺官能化、硼酸官能化、羧酸官能化、甲基官能化、N
‑
琥珀酰亚胺酯官能化、PEG官能化、链霉亲和素官能化、甲醚官能化、三乙氧基丙基氨基硅烷官能化、巯基官能化、PCP官能化、柠檬酸盐官能化、硫辛酸官能化、BPEI官能化、羧基官能化、羟基官能化或其任何组合。28.根据权利要求25
‑
27中任一项所述的方法，其中所述表面官能化包括在具有所述第一表面积与质量比的所述基底的表面上或在具有所述第二表面积与质量比的所述基底的表面上至少约1个官能团每20nm2的平均密度。29.根据权利要求25
‑
28中任一项所述的方法，其中所述表面官能化包括在具有所述第一表面积与质量比的所述基底的表面上或在具有所述第二表面积与质量比的所述基底的表面上约1个官能团每30nm2至约1个官能团每60nm2的平均密度。30.根据权利要求1
‑
29中任一项所述的方法，其中具有所述第一表面积与质量比或所述第二表面积与质量比的所述基底包含微粒。31.根据权利要求30所述的方法，其中所述微粒具有约1微米至约2微米的直径。32.根据权利要求30或31所述的方法，其中所述微粒具有小于约1.5微米的直径。33.根据权利要求30
‑
32中任一项所述的方法，其中具有所述第二表面积与质量比的所述基底包含微粒。34.根据权利要求30
‑
32中任一项所述的方法，其中具有所述第二表面积与质量比的所述基底包含纳米颗粒。35.根据权利要求1
‑
29中任一项所述的方法，其中具有所述第一表面积与质量比的所述基底包含纳米颗粒并且具有所述第二表面积与质量比的所述基底包含微粒。36.根据权利要求1
‑
35中任一项所述的方法，其中具有所述第一表面积与质量比的所
述基底和具有所述第二表面积与质量比的所述基底是直径彼此相差至多10％的颗粒。37.根据权利要求1
‑
36中任一项所述的方法，其中所述生物分子冠占所述生物样品的生物质量的至多0.1％。38.根据权利要求1
‑
37中任一项所述的方法，其中所述生物分子冠占所述生物样品的生物质量的至多0.01％。39.根据权利要求1
‑
38中任一项所述的方法，其中所述生物分子冠占所述生物样品的生物质量的至多0.001％。40.根据权利要求1
‑
39中任一项所述的方法，其中所述生物分子冠占所述生物样品的生物质量的至多0.0001％。41.根据权利要求1
‑
40中任一项所述的方法，其中所鉴定的不同生物分子的数目比当所述生物样品与具有所述第二表面积与质量比的所述基底接触时所鉴定的不同生物分子的数目高至少5％。42.根据权利要求1
‑
41中任一项所述的方法，其中所鉴定的不同生物分子的数目比当所述生物样品与具有所述第二表面积与质量比的所述基底接触时所鉴定的不同生物分子的数目高至少10％。43.根据权利要求1
‑
42中任一项所述的方法，其中所鉴定的不同生物分子的数目比当所述生物样品与具有所述第二表面积与质量比的所述基底接触时所鉴定的不同生物分子的数目高至少25％。44.根据权利要求1
‑
43中任一项所述的方法，其中具有所述第一表面积与质量比的所述基底在与所述生物样品进行所述接触时形成胶体。45.根据权利要求1
‑
44中任一项所述的方法，其中具有所述第二表面积与质量比的所述基底在与所述生物样品接触时不形成胶体。46.根据权利要求1
‑
45中任一项所述的方法，其中(a)的所述接触进行少于一小时。47.根据权利要求1
‑
46中任一项所述的方法，其中(a)的所述接触进行少于30分钟。48.根据权利要求1
‑
47中任一项所述的方法，其中在所述生物分子冠达到平衡之前进行(b)的所述测定。49.根据权利要求1
‑
48中任一项所述的方法，其中经受(b)的所述测定的所述生物分子冠的组成和在所述生物分子冠达到所述平衡之后的所述生物分子冠的组成共享至多85％的蛋白质。50.根据权利要求1
‑
49中任一项所述的方法，其中所述基底包含选自以下的颗粒：包含二氧化硅表面的超顺磁性氧化铁颗粒(SPION)、包含N
‑
(3
‑
三甲氧基甲硅烷基丙基)二亚乙基三胺表面的SPION、包含聚(二甲基氨基丙基甲基丙烯酰胺)(二甲胺)表面的SPION、包含羧基官能化聚苯乙烯表面的SPION和包含葡聚糖涂层的SPION。51.根据权利要求1
‑
50中任一项所述的方法，其中所述基底包含选自以下的至少两种颗粒：包含二氧化硅表面的超顺磁性氧化铁颗粒(SPION)、包含N
‑
(3
‑
三甲氧基甲硅烷基丙基)二亚乙基三胺表面的SPION、包含聚(二甲基氨基丙基甲基丙烯酰胺)(二甲胺)表面的SPION、包含羧基官能化聚苯乙烯表面的SPION和包含葡聚糖涂层的SPION。52.根据权利要求1
‑
51中任一项所述的方法，其中所述基底包含选自以下的至少三种颗粒：包含二氧化硅表面的超顺磁性氧化铁颗粒(SPION)、包含N
‑
(3
‑
三甲氧基甲硅烷基丙
基)二亚乙基三胺表面的SPION、包含聚(二甲基氨基丙基甲基丙烯酰胺)(二甲胺)表面的SPION、包含羧基官能化聚苯乙烯表面的SPION和包含葡聚糖涂层的SPION。53.根据权利要求1
‑
52中任一项所述的方法，其中所述基底包含选自以下的至少四种颗粒：包含二氧化硅表面的超顺磁性氧化铁颗粒(SPION)、包含N
‑
(3
‑
三甲氧基甲硅烷基丙基)二亚乙基三胺表面的SPION、包含聚(二甲基氨基丙基甲基丙烯酰胺)(二甲胺)表面的SPION、包含羧基官能化聚苯乙烯表面的SPION和包含葡聚糖涂层的SPION。54.根据权利要求1
‑
53中任一项所述的方法，其中所述基底包含：包含二氧化硅表面的超顺磁性氧化铁颗粒(SPION)、包含N
‑
(3
‑
三甲氧基甲硅烷基丙基)二亚乙基三胺表面的SPION、包含聚(二甲基氨基丙基甲基丙烯酰胺)(二甲胺)表面的SPION、包含羧基官能化聚苯乙烯表面的SPION和包含葡聚糖涂层的SPION。55.根据权利要求1
‑
53中任一项所述的方法，其中所述基底包含：包含聚(N
‑
(3
‑
(二甲基氨基)丙基)甲基丙烯酰胺)(PDMAPMA)表面的超顺磁性氧化铁颗粒(SPION)。56.根据权利要求1
‑
55中任一项所述的方法，其中所述基底包含：包含聚(低聚(乙二醇)甲基醚甲基丙烯酸酯)(POEGMA)表面的超顺磁性氧化铁颗粒(SPION)。57.根据权利要求1
‑
56中任一项所述的方法，其中所述基底包含：包含N
‑
(3
‑
三甲氧基甲硅烷基丙基)二亚乙基三胺表面的超顺磁性氧化铁颗粒(SPION)。58.根据权利要求1
‑
57中任一项所述的方法，其中所述基底包含：包含聚(二甲基氨基丙基甲基丙烯酰胺)(二甲胺)表面的超顺磁性氧化铁颗粒(SPION)。59.根据权利要求1
‑
58中任一项所述的方法，其中所述基底包含：包含葡聚糖表面的超顺磁性氧化铁颗粒(SPION)。60.根据权利要求1
‑
59中任一项所述的方法，其中所述基底包含：包含具有基于胺
‑
环氧化学的混合化学成分的表面的超顺磁性氧化铁颗粒(SPION)。61.根据权利要求1
‑
60中任一项所述的方法，其中所述基底包含：包含两性离子聚合物涂覆的(聚(N
‑
[3
‑
(二甲基氨基)丙基]甲基丙烯酰胺
‑
共
‑
[2
‑
(甲基丙烯酰基氧基)乙基]二甲基
‑
(3
‑
磺丙基)氢氧化铵，P(DMAPMA
‑
co
‑
SBMA))表面的超顺磁性氧化铁颗粒(SPION)。62.根据权利要求1
‑
61中任一项所述的方法，其中所述基底包含：包含苯乙烯表面的超顺磁性氧化铁颗粒(SPION)，所述苯乙烯表面包含油酸官能化。63.根据权利要求1
‑
62中任一项所述的方法，其中所述基底包含：包含硼化苯乙烯表面的超顺磁性氧化铁颗粒(SPION)。64.根据权利要求1
‑
63中任一项所述的方法，其中所述基底包含：包含羧基化苯乙烯表面的超顺磁性氧化铁颗粒(SPION)。65.根据权利要求1
‑
64中任一项所述的方法，其中所述基底包含：包含羧基化苯乙烯表面的超顺磁性氧化铁微粒(SPION)。66.根据权利要求1
‑
65中任一项所述的方法，其中所述基底包含：包含强酸性二氧化硅表面的超顺磁性氧化铁微粒(SPION)。67.根据权利要求1
‑
66中任一项所述的方法，其中所述基底包含选自以下的至少一种颗粒：二氧化硅涂覆的SPION、聚(二甲基氨基丙基甲基丙烯酰胺)涂覆的SPION、N
‑
(3
‑
三甲氧基甲硅烷基丙基)二亚乙基三胺涂覆的SPION、1,6
‑
己二胺涂覆的SPION和N1
‑
(3
‑
(三甲氧基甲硅烷基)丙基)己烷
‑
1,6
‑
二胺官能化的二氧化硅涂覆的SPION。
68.根据权利要求1
‑
67中任一项所述的方法，其中所述基底包含选自以下的至少两种颗粒：二氧化硅涂覆的SPION、聚(二甲基氨基丙基甲基丙烯酰胺)涂覆的SPION、N
‑
(3
‑
三甲氧基甲硅烷基丙基)二亚乙基三胺涂覆的SPION、1,6
‑
己二胺涂覆的SPION和N1
‑
(3
‑
(三甲氧基甲硅烷基)丙基)己烷
‑
1,6
‑
二胺官能化的二氧化硅涂覆的SPION。69.根据权利要求1
‑
68中任一项所述的方法，其中所述基底包含选自以下的至少三种颗粒：二氧化硅涂覆的SPION、聚(二甲基氨基丙基甲基丙烯酰胺)涂覆的SPION、N
‑
(3
‑
三甲氧基甲硅烷基丙基)二亚乙基三胺涂覆的SPION、1,6
‑
己二胺涂覆的SPION和N1
‑
(3
‑
(三甲氧基甲硅烷基)丙基)己烷
‑
1,6
‑
二胺官能化的二氧化硅涂覆的SPION。70.根据权利要求1
‑
69中任一项所述的方法，其中所述基底包含选自以下的至少四种颗粒：二氧化硅涂覆的SPION、聚(二甲基氨基丙基甲基丙烯酰胺)涂覆的SPION、N
‑
(3
‑
三甲氧基甲硅烷基丙基)二亚乙基三胺涂覆的SPION、1,6
‑
己二胺涂覆的SPION和N1
‑
(3
‑
(三甲氧基甲硅烷基)丙基)己烷
‑
1,6
‑
二胺官能化的二氧化硅涂覆的SPION。71.根据权利要求1
‑
70中任一项所述的方法，其中所述基底包含：二氧化硅涂覆的SPION、聚(二甲基氨基丙基甲基丙烯酰胺)涂覆的SPION、N
‑
(3
‑
三甲氧基甲硅烷基丙基)二亚乙基三胺涂覆的SPION、1,6
‑
己二胺涂覆的SPION和N1
‑
(3
‑
(三甲氧基甲硅烷基)丙基)己烷
‑
1,6
‑
二胺官能化的二氧化硅涂覆的SPION。72.一种使用基底测定生物样品的方法，所述方法包括：(a)使所述生物样品与所述基底接触以在所述基底上形成生物分子冠，所述生物分子冠包含来自所述生物样品的生物分子，其中所述基底具有1至6000cm2/mg的表面积与质量比；以及(b)测定所述生物分子冠以鉴定所述生物分子，其中所鉴定的不同生物分子的数目高于当使用比在(a)中使用的所述基底的所述量高10％或更多的所述基底的量测定所述生物样品时所鉴定的不同生物分子的数目。73.根据权利要求72所述的方法，其中所述生物分子冠包含每毫克(mg)基底至少1微克(μg)生物分子。74.根据权利要求72或73所述的方法，其中所述生物分子冠包含每毫克(mg)基底至多1微克(μg)生物分子。75.根据权利要求72
‑
74中任一项所述的方法，其中所述生物分子冠包含每100平方厘米(cm2)基底至少1μg生物分子。76.根据权利要求72
‑
75中任一项所述的方法，其中所述生物分子冠包含每100平方厘米(cm2)基底至多1微克(μg)生物分子。77.根据权利要求72
‑
76中任一项所述的方法，其中所述基底包含纳米颗粒。78.根据权利要求77所述的方法，其中所述纳米颗粒具有至少50nm的直径。79.根据权利要求77或78所述的方法，其中所述纳米颗粒具有至多500nm的直径。80.根据权利要求77
‑
79中任一项所述的方法，其中所述纳米颗粒具有约80nm至约500nm的直径。81.根据权利要求77
‑
80中任一项所述的方法，其中所述纳米颗粒包含约120nm至约350nm的直径。82.根据权利要求77
‑
81中任一项所述的方法，其中所述纳米颗粒具有至多1的多分散
性指数。83.根据权利要求77
‑
82中任一项所述的方法，其中所述纳米颗粒具有椭圆形几何形状。84.根据权利要求77
‑
83中任一项所述的方法，其中所述纳米颗粒具有基本上球形的几何形状。85.根据权利要求77
‑
84中任一项所述的方法，其中所述纳米颗粒是两性离子性的。86.根据权利要求85所述的方法，其中所述纳米颗粒包含胺官能化和硫酰基或有机硫官能化。87.根据权利要求85或86所述的方法，其中所述两性离子性的纳米颗粒在至少4的pH范围内是两性离子性的。88.根据权利要求77
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87中任一项所述的方法，其中所述纳米颗粒包括芯材料和壳材料。89.根据权利要求88所述的方法，其中所述芯材料包括金属、氧化物、氮化物、陶瓷、碳材料、硅材料、聚合物或其任何组合。90.根据权利要求88或89所述的方法，其中所述芯材料包括二氧化硅。91.根据权利要求88
‑
90中任一项所述的方法，其中所述芯材料包括金属或金属氧化物。92.根据权利要求91所述的方法，其中所述芯材料包括氧化铁。93.根据权利要求88
‑
92中任一项所述的方法，其中所述芯材料是磁性的。94.根据权利要求93所述的方法，其中所述芯材料是超顺磁性的。95.根据权利要求88
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94中任一项所述的方法，其中所述壳材料具有小于约10nm的厚度。96.根据权利要求88
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95中任一项所述的方法，其中所述壳材料具有大于约10nm的厚度。97.根据权利要求88
‑
96中任一项所述的方法，其中所述壳材料包括聚合物、糖类、脂质、肽、自组装单层、硅材料、溶胶
‑
凝胶、水凝胶、玻璃或其任何组合。98.根据权利要求97所述的方法，其中所述壳材料包括葡聚糖。99.根据权利要求97或98所述的方法，其中所述壳材料包括聚苯乙烯、N
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(3
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(二甲基氨基)丙基)甲基丙烯酰胺(DMAPMA)或其组合。100.根据权利要求99所述的方法，其中所述聚苯乙烯或所述DMAPMA是官能化的。101.根据权利要求88
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100中任一项所述的方法，其中所述壳材料包括具有一定程度相分离的两种材料。102.根据权利要求88
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101中任一项所述的方法，其中所述芯材料具有比所述壳材料更大的密度。103.根据权利要求72
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102中任一项所述的方法，其中所述基底包含表面官能化。104.根据权利要求103所述的方法，其中所述表面官能化包括极性官能团、酸性官能团、碱性官能团、带电荷官能团、可聚合官能团或其任何组合。105.根据权利要求103或104所述的方法，其中所述表面官能化包括氨丙基官能化、胺官能化、硼酸官能化、羧酸官能化、甲基官能化、N
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琥珀酰亚胺酯官能化、PEG官能化、链霉亲
和素官能化、甲醚官能化、三乙氧基丙基氨基硅烷官能化、巯基官能化、PCP官能化、柠檬酸盐官能化、硫辛酸官能化、BPEI官能化、羧基官能化、羟基官能化或其任何组合。106.根据权利要求103
‑
105中任一项所述的方法，其中所述表面官能化在所述基底的表面上具有至少约20个官能团/cm2的平均密度。107.根据权利要求103
‑
106中任一项所述的方法，其中所述表面官能化具有约30个官能团/cm2至约60个官能团/cm2的平均密度。108.根据权利要求72
‑
107中任一项所述的方法，其中所述基底包含带正电荷的颗粒、中性颗粒、带负电荷的颗粒或其组合。109.根据权利要求72
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108中任一项所述的方法，其中所述基底包含二氧化硅颗粒、胺官能化颗粒、聚乙二醇官能化颗粒或其组合。110.根据权利要求72
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109中任一项所述的方法，其中所述基底包含羧酸盐官能化颗粒。111.根据权利要求72
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110中任一项所述的方法，其中所述基底包含羧酸盐官能化苯乙烯颗粒。112.根据权利要求72
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111中任一项所述的方法，其中所述基底包含葡聚糖涂覆的颗粒。113.根据权利要求72
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112中任一项所述的方法，其中所述基底包含硫酰基官能化颗粒。114.根据权利要求113所述的方法，其中所述硫酰基官能化颗粒还包含带正电荷的表面官能化。115.根据权利要求72
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114中任一项所述的方法，其中所述基底包含微粒。116.根据权利要求115所述的方法，其中所述微粒具有小于约5微米的直径。117.根据权利要求115或116所述的方法，其中所述微粒具有小于约2微米的直径。118.根据权利要求115
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117中任一项所述的方法，其中所述微粒具有约1微米至约2微米的直径。119.根据权利要求72
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118中任一项所述的方法，其中所述基底包含具有不同密度的多种颗粒。120.根据权利要求72
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119中任一项所述的方法，其中所述基底具有至少约0.01克每立方厘米(g/cm3)的密度。121.根据权利要求72
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120中任一项所述的方法，其中所述基底具有小于约15g/cm3的密度。122.根据权利要求72
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121中任一项所述的方法，其中所述基底具有在约0.05克每立方厘米(g/cm3)与约10g/cm3之间的密度。123.根据权利要求72
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122中任一项所述的方法，其中所述基底具有在约0.8克每立方厘米(g/cm3)与约3g/cm3之间的密度。124.根据权利要求72
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123中任一项所述的方法，其中(b)中所鉴定的所述生物分子跨越的浓度比当使用比(a)中使用的所述基底的所述量高10％或更多的所述基底的量测...

【专利技术属性】
技术研发人员：奥米德，
申请(专利权)人：禧尔公司，
类型：发明
国别省市：