一种核酸扩增反应体系及其在病原体检测中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种核酸扩增反应体系及其在病原体检测中的应用。所述核酸扩增反应体系包括RT

【技术实现步骤摘要】
一种核酸扩增反应体系及其在病原体检测中的应用


[0001]本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种核酸扩增反应体系。

技术介绍

[0002]PCR(PolymeraseChainReaction，PCR)是一种分子生物学常用技术，目前已经广泛应用于各种病原微生物以及疾病的诊断、动物疫病监测、物种鉴定、环境监控、药物基因组学研究等。荧光定量PCR(quantitativePolymerase ChainReaction，qPCR)是指在PCR反应体系中加入荧光修饰探针，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过扩增曲线对未知模板进行定性或定量分析的方法。目前市场上用于检测病原微生物核酸的产品大多采用qPCR或荧光定量逆转录PCR(quantitativereversetranscriptionPCR,RT
‑
qPCR)。
[0003]qPCR技术是以DNA为模板的PCR技术。常规qPCR反应需经过高温变性、低温退火、适温延伸三个步骤，通过20～40次的反复扩增，可实现对模板DNA的指数性扩增，通过荧光信号的变化本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种核酸扩增反应体系，包括RT
‑
qPCR缓冲液和酶混合液，其特征在于，所述RT
‑
qPCR缓冲液各组分在PCR反应体系中的组成为：Tris缓冲液 20
‑
40mM Tris缓冲液pH为8.3～8.9钾离子 40
‑
60mM硫酸铵 20
‑
50mM镁离子 3
‑
7mM四甲基氯化铵 25
‑
40mM海藻糖 0.5
‑
1.5wt％二甲基亚砜 体积百分比0.1％
‑
2％所述PCR反应体系的溶剂为无酶水。2.如权利要求1所述的核酸扩增反应体系，其特征在于，所述酶混合液的组分包括：热启动DNA聚合酶、牛血清白蛋白、逆转录酶、UDG酶、RNA酶抑制剂。3.如权利要求2所述的核酸扩增反应体系，其特征在于，所述酶混合液各组分在PCR反应体系中的组成为：热启动DNA聚合酶0.1
‑
2U/μL；逆转录酶0.2
‑
2U/μL；RNA酶抑制剂0.1
‑
2U/μL；UDG酶0.001
‑
0.05U/μL；牛血清白蛋白0.1
‑
0.5wt％。4.如权利要求1所述的核酸扩增反应体系，其特征在于：所述核酸扩增反应体系还包括dA/T/G/C/UTPs，其中dATP、dTTP、dGTP、dCTP、dUTP在PCR反应体系中的浓度分别为400
‑
800μM。5.如权利要求1
‑
4任一项所述的核酸扩增反应体系，其特征在于，所述酸扩增反应体系进行PCR扩增的程序为：逆转录时间 2min；热启动时间 1s；变性时间 0s；退火及延伸时间 13s。6.权利要求1
‑
4任一项...

【专利技术属性】
技术研发人员：张琳，李丹，董晋涛，金捷，罗承梅，
申请(专利权)人：上海思路迪生物医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：