复合物的细胞内递送制造技术

本发明专利技术提供了用于将瞬时和/或可逆的复合物递送到细胞中的方法，该方法包括使细胞悬浮液通过缩窄部，其中所述缩窄部使该细胞变形，从而引起该细胞的扰动，这样使得该复合物进入该细胞。该细胞。该细胞。

【技术实现步骤摘要】
复合物的细胞内递送
[0001]本申请是申请日为2017年1月11日、申请号为201780015147.X、专利技术名称为“复合物的细胞内递送”的专利技术专利申请的分案申请。
[0002]相关申请的交叉引用
[0003]本申请要求于2016年1月12日提交的美国临时申请号62/277,858的优先权，将其通过引用以其全文特此结合。


[0004]本公开文本总体上涉及通过使细胞悬浮液通过缩窄部以将复合物递送到细胞中的方法。

技术介绍

[0005]细胞内递送是工程化有机体的研究和开发中的中心步骤。旨在对分子进行细胞内递送的现有技术依赖于电场、纳米粒子或成孔化学品。然而，这些方法遭遇许多并发症，包括非特异性分子递送、有效载荷分子的修饰或损坏、高细胞死亡、低通量和/或难以实施。由于它们的尺寸大，由诸如多肽、核酸、碳水化合物、脂质和/或小分子等生物分子构成的复合物不能容易地穿过细胞膜。因此，此类复合物的递送一直是一个挑战，并且对于在将复合物递送至多种细胞类型方面非常有效的细胞内递送技术存在未满足的需求。此外，允许快速、高通量细胞内递送复合物的技术可以更有效地应用于大规模临床、生产和药物筛选应用。描述使用通道将化合物递送至细胞的方法的参考文献包括WO 2013059343、WO 2015023982、和PCT/US 2015/058489。
[0006]本文引用的所有参考文献，包括专利申请和出版物，均通过引用以其全文并入。

技术实现思路

[0007]本专利技术提供了用于将两种或更多种分子的复合物递送到细胞中的方法，该方法包括使细胞悬浮液通过缩窄部，其中所述缩窄部使细胞变形，从而引起细胞的扰动，这样使得分子的复合物进入细胞，其中所述细胞悬浮液与分子的复合物接触。在一些实施方案中，分子的复合物的形成是可逆的。在一些实施方案中，复合物的至少两种或更多种分子通过非共价相互作用缔合。在一些实施方案中，复合物中的至少两种分子在复合物中具有从约1μM至约1pM的结合亲和力。在一些实施方案中，复合物中的至少两种分子在复合物中具有从约1μM至约1nM或从约1nM至约1pM的结合亲和力。在一些实施方案中，复合物在细胞悬浮液中的半衰期为约1分钟至约48小时。在一些实施方案中，复合物在细胞悬浮液中的半衰期为约1分钟至约20分钟、约20分钟至约40分钟、约40分钟至约1小时、约1小时至约2小时、约2小时至约6小时、约6小时至约12小时、约12小时至约24小时、约24小时至约36小时、或约36小时至约48小时。
[0008]在一些实施方案中，复合物在洗涤剂的存在下解离。在一些实施方案中，复合物在洗涤剂的存在下以约0.1％(w/v)至约10％(w/v)的浓度解离。在一些实施方案中，复合物在
洗涤剂的存在下以约0.1％(w/v)至约1％(w/v)、约1％(w/v)至约5％(w/v)、或约5％(w/v)至约10％(w/v)的浓度解离。
[0009]在一些实施方案中，在从约0℃至约40℃范围内的温度下使细胞悬浮液与分子的复合物接触。在一些实施方案中，分子的复合物在比细胞悬浮液与分子的复合物接触的温度高的温度下解离。在一些实施方案中，分子的复合物在约50℃至约70℃的温度下解离。在一些实施方案中，分子的复合物在约50℃至约60℃、或约60℃至约70℃的温度下解离。
[0010]在一些实施方案中，在从约50mM至约300mM范围内的离子强度下使细胞悬浮液与分子的复合物接触。在一些实施方案中，分子的复合物在比细胞悬浮液与分子的复合物接触的离子强度大的离子强度下解离。在一些实施方案中，分子的复合物在约350mM至约1000mM的离子强度下解离。在一些实施方案中，分子的复合物在约350mM至约400mM、约400mM至约500mM、约500mM至约600mM、约700mM至约800mM、约800mM至约900mM、或约900mM至约1000mM的离子强度下解离。在一些实施方案中，分子的复合物在比细胞悬浮液与分子的复合物接触的离子强度小的离子强度下解离。在一些实施方案中，分子的复合物在约0mM至约50mM的离子强度下解离。在一些实施方案中，分子的复合物在约0mM至约10mM、约10mM至约20mM、约20mM至约30mM、约30mM至约40mM、或约40mM至约50mM的离子强度下解离。
[0011]在一些实施方案中，在从约100mOsm/L至约500mOsm/L范围内的摩尔渗透压浓度下使细胞悬浮液与分子的复合物接触。在一些实施方案中，分子的复合物在比细胞悬浮液与分子的复合物接触的离子强度大的摩尔渗透压浓度下解离。在一些实施方案中，分子的复合物在约600mOsm/L至约1000mOsm/L的摩尔渗透压浓度下解离。在一些实施方案中，分子的复合物在约600mOsm/L至约700mOsm/L、约700mOsm/L至约800mOsm/L、约800mOsm/L至约900mOsm/L、或约900mOsm/L至约1000mOsm/L的摩尔渗透压浓度下解离。在一些实施方案中，分子的复合物在比细胞悬浮液与分子的复合物接触的摩尔渗透压浓度低的摩尔渗透压浓度下解离。在一些实施方案中，分子的复合物在约0mOsm/L至约100mOsm/L的摩尔渗透压浓度下解离。在一些实施方案中，分子的复合物在约0mOsm/L至约20mOsm/L、约20mOsm/L至约20mOsm/L、约20mOsm/L至约40mOsm/L、约40mOsm/L至约60mOsm/L、约60mOsm/L至约80mOsm/L、或约80mOsm/L至约100mOsm/L的摩尔渗透压浓度下解离。
[0012]在一些实施方案中，在从约5.5至约8.5范围内的pH下使细胞悬浮液与分子的复合物接触。在一些实施方案中，分子的复合物在比细胞悬浮液与分子的复合物接触的pH高或低的pH下解离。在一些实施方案中，分子的复合物在约4.0至约5.5的pH下或在约8.5至约10的pH下解离。在一些实施方案中，分子的复合物在约4.0至约4.5、约4.5至约5.0、约5.0至约5.5、约8.5至约9.0、约9.0至约9.5、或约9.5至约10.0的pH下解离。
[0013]在一些实施方案中，当细胞通过缩窄部时的剪切力范围为从约1kPa至约10kPa。在一些实施方案中，复合物在约10kPa至约100kPa的剪切力下解离。在一些实施方案中，复合物在约10kPa至约25kPa、约25kPa至约50kPa、约50kPa至约75kPa、或约75kPa至约100kPa的剪切力下解离。
[0014]在一些实施方案中，分子的复合物包含a)一种或多种多肽，b)一种或多种核酸，c)一种或多种脂质，d)一种或多种碳水化合物，e)一种或多种小分子，f)一种或多种含金属的化合物，g)一种或多种多肽和一种或多种核酸，h)一种或多种多肽和一种或多种脂质，i)一种或多种多肽和一种或多种碳水化合物，j)一种或多种多肽和一种或多种小分子，k)一种
或多种多肽和一种或多种含金属的化合物，l)一种或多种核酸和一种或多种脂质，m)一种或多本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于将两种或更多种分子的复合物递送到细胞中的方法，该方法包括使细胞悬浮液通过缩窄部，其中所述缩窄部使该细胞变形，从而引起该细胞的扰动，这样使得分子的该复合物进入该细胞，其中所述细胞悬浮液与分子的该复合物接触。2.权利要求1的方法，其中分子的该复合物的形成是可逆的。3.权利要求1或2的方法，其中该复合物的至少两种或更多种分子通过非共价相互作用缔合。4.权利要求1
‑
3中任一项的方法，其中在该复合物中的至少两种分子在该复合物中的结合亲和力在约1μM至约1pM范围内。5.权利要求1
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4中任一项的方法，其中该复合物中的至少两种分子在该复合物中的结合亲和力为约1μM至约1nM或从约1nM至约1pM范围内。6.权利要求1
‑
5中任一项的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：T，
申请(专利权)人：SQZ生物技术公司，
类型：发明
国别省市：