用于PBMC冷冻保存的调配物制造技术

本申请提供了经修饰的外周血单核细胞(PBMC)的调配物，其中所述调配物包括：包含至少一种抗原(例如，人乳头瘤病毒(HPV)抗原)的PBMC和冷冻保存培养基。在一些实施例中，通过在存在佐剂的情况下温育所述PBMC对所述PBMC进行调节。进行调节。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于PBMC冷冻保存的调配物
[0001]相关申请交叉引用
[0002]本申请要求于2020年12月29日提交的美国临时申请第63/131,454号的权益，所述美国临时申请的全部内容通过引用并入本文。
[0003]以ASCII文本文件形式提交的序列表
[0004]以下以ASCII文本文件形式提交的内容通过引用整体并入本文：序列表的计算机可读形式(CRF)(文件名：750322003040SEQLIST.TXT，记录日期：2021年12月23日，大小：12,994字节)。


[0005]本公开总体上涉及在冷冻保存培养基中包括至少一种抗原的外周血单核细胞(PBMC)的调配物。还提供了制造此类包括至少一种抗原的PBMC的方法、调配可冷冻保存的调配物的方法以及冷冻保存所述调配物的方法。

技术介绍

[0006]乳头瘤病毒是病毒粒子大小的直径约为55nm的小的无包膜DNA病毒。超过100种人乳头瘤病毒(HPV)基因型被完全表征，并且推测存在更多的基因型。HPV是宫颈癌以及一些外阴癌、阴道癌、阴茎癌、口咽癌、肛门癌和直肠癌的已知原因。尽管大多数HPV感染是无症状的并且是自发清除的，但是具有致癌性HPV类型之一的持续感染可以进展为癌前病变或癌症。其它HPV相关疾病可以包含寻常疣、跖疣、扁平疣、肛门生殖器疣、肛门病变、表皮发育不良、局灶性上皮增生、口腔乳头状瘤、疣状囊肿、喉乳头状瘤病、鳞状上皮内病变(SIL)、宫颈上皮内瘤变(CIN)、外阴上皮内瘤变(VIN)和阴道上皮内瘤变(VAIN)。
[0007]许多已知的HPV类型导致良性病变，其中一部分是致癌的。基于流行病学和系统发育关系，将HPV类型分类为十五种“高风险类型”(HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73和82)和三种“可能的高风险类型”(HPV 26、53和66)，已知其一起表现为低度和高度宫颈病变和癌症，以及其它非生殖器癌症，如外阴癌、阴道癌、阴茎癌、肛门癌和肛周癌，以及头颈癌。最近，也描述了高风险类型HPV 16和18与乳腺癌的关联。已知分类为“低风险类型”的十一种HPV类型(HPV 6、11、40、42、43、44、54、61、70、72和81)表现为良性低度宫颈病变、生殖器疣和复发性呼吸道乳头状瘤病。皮肤HPV 5型、8型和92型与皮肤癌症相关。在一些HPV相关癌症中，免疫系统被抑制并且相应地，抗肿瘤应答被显著削弱。参见Suresh和Burtness《美国血液学与肿瘤学杂志(Am J Hematol Oncol)》13(6):20
‑
27(2017)。
[0008]免疫疗法通常可以分为两种主要类型的干预，被动或主动。被动方案包含施用预激活和/或工程化细胞(例如，CAR T细胞)、疾病特异性治疗抗体和/或细胞因子。主动免疫疗法策略旨在刺激体内免疫系统效应子功能。若干种目前主动方案包含使用疾病相关肽、裂解物或同种异体全细胞的疫苗接种策略，输注自体树突细胞(DC)作为肿瘤抗原递送的媒剂，以及输注免疫检查点调节剂。参见Papaioannou,Nikos E.等人《转化医学年鉴(Annals of translational medicine)》4.14(2016)。过继免疫疗法可以用于调节免疫应答，增强抗
肿瘤活性，并实现治疗或预防HPV相关癌症的目标。
[0009]由疾病相关抗原刺激的CD8
+
细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和CD4
+
辅助性T(Th)细胞具有靶向和破坏患病细胞的潜力；然而，目前用于诱导内源性T细胞应答的方法已经面临挑战。本文所描述的方法用于以高通量方式有效地产生包括至少一种抗原的PBMC，其可以用于诱导强大的抗原特异性T细胞应答。公开了PBMC的调配物，所述调配物包括至少一种抗原、冷冻保存培养基和一种或多种增强PBMC的活力和/或功能的药剂。还公开了制造此类包括至少一种抗原的PBMC的方法、调配可冷冻保存的调配物的方法以及冷冻保存所述调配物的方法。本文所描述的方法还描述了用于使用包括HPV抗原和/或佐剂的PBMC治疗患有HPV相关癌症的个体的方法、治疗、剂量和方案。
[0010]在本文中引用的所有文献，包含专利申请和出版物，通过引用整体并入本文。专利公开WO 2013/059343、WO 2015/023982、WO 2016/070136、WO 2017041050、WO 2017008063、WO 2017/192785、WO 2017/192786、WO 2019/178005、WO 2019/178006、WO 2020/072833、WO 2020/154696以及WO 2020/176789、US20180142198和US20180201889特此通过引用整体并入本文。

技术实现思路

[0011]在一些方面，本专利技术提供了一种药物调配物，所述药物调配物包括外周血单核细胞(PBMC)，所述调配物包括：a)PBMC，其中所述PBMC包括至少一种抗原；b)冷冻保存培养基；以及c)人血清白蛋白。在一些方面，本专利技术提供了一种药物调配物，所述药物调配物包括外周血单核细胞(PBMC)，所述调配物包括：a)PBMC，其中所述PBMC包括至少一种抗原；b)冷冻保存培养基；c)低温保存培养基；以及d)人血清白蛋白。在一些实施例中，所述组合物包括约5
×
106个PBMC至约5
×
107个PBMC。在一些实施例中，所述组合物包括约2
×
107个PBMC至约3
×
107个PBMC。在一些实施例中，所述组合物包括约2.75
×
107个PBMC。在一些实施例中，所述组合物包括约1
×
106个PBMC/mL至约1
×
107个PBMC/mL。在一些实施例中，所述组合物包括约4
×
106个PBMC/mL至约6
×
106个PBMC/mL。在一些实施例中，所述组合物包括约5.0
×
106个PBMC/mL。在一些实施例中，所述组合物中的≥70％、≥80％、≥90％或≥95％的所述PBMC是活的。在一些实施例中，所述组合物包括约3
×
106个活PBMC/mL至约7
×
106个活PBMC/mL。在一些实施例中，所述组合物包括约5
×
106个活PBMC/mL。在一些实施例中，所述组合物先前已被冷冻，并且所述组合物在解冻之后包括约4
×
106个活PBMC/mL。在一些实施例中，所述调配物中的所述PBMC在≤
‑
196℃下储存至少约12个月之后维持约≥70％活力。
[0012]在一些实施例中，所述调配物中的所述冷冻保存培养基的百分比为约40％至约95％(w/w)。在一些实施例中，所述调配物中的所述冷冻保存培养基的百分比为约80％(w/w)。在一些实施例中，所述调配物中的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种药物调配物，其包括外周血单核细胞(PBMC)，所述调配物包括：a)PBMC，其中所述PBMC包括至少一种抗原；b)冷冻保存培养基；以及c)人血清白蛋白。2.一种药物调配物，其包括外周血单核细胞(PBMC)，所述调配物包括：a)PBMC，其中所述PBMC包括至少一种抗原；b)冷冻保存培养基；c)低温保存培养基；以及d)人血清白蛋白。3.根据权利要求1或2所述的调配物，其中所述组合物包括约5
×
106个PBMC至约5
×
107个PBMC。4.根据权利要求1或2中任一项所述的调配物，其中所述组合物包括约2
×
107个PBMC至约3
×
107个PBMC。5.根据权利要求1至4中任一项所述的调配物，其中所述组合物包括约2.75
×
107个PBMC。6.根据权利要求1至5中任一项所述的调配物，其中所述组合物包括约1
×
106个PBMC/mL至约1
×
107个PBMC/mL。7.根据权利要求1至6中任一项所述的调配物，其中所述组合物包括约4
×
106个PBMC/mL至约6
×
106个PBMC/mL。8.根据权利要求1至7中任一项所述的调配物，其中所述组合物包括约5.0
×
106个PBMC/mL。9.根据权利要求1至8中任一项所述的调配物，其中所述组合物中的≥70％、≥80％、≥90％或≥95％的所述PBMC是活的。10.根据权利要求1至6中任一项所述的调配物，其中所述组合物包括约3
×
106个活PBMC/mL至约7
×
106个活PBMC/mL。11.根据权利要求1至6中任一项所述的调配物，其中所述组合物包括约5
×
106个活PBMC/mL。12.根据权利要求1至11中任一项所述的调配物，其中所述组合物先前已被冷冻，并且所述组合物在解冻之后包括约4
×
106个活PBMC/mL。13.根据权利要求1至12中任一项所述的调配物，其中所述调配物中的所述PBMC在≤
‑
196℃下储存至少约12个月之后维持约≥70％活力。14.根据权利要求1至13中任一项所述的调配物，其中所述调配物中的所述冷冻保存培养基的百分比为约40％至约95％(w/w)。15.根据权利要求1和3至14中任一项所述的调配物，其中所述调配物中的所述冷冻保存培养基的百分比为约80％(w/w)。16.根据权利要求2至14中任一项所述的调配物，其中所述调配物中的所述冷冻保存培养基的百分比为约50％(w/w)。17.根据权利要求1至16中任一项所述的调配物，其中所述冷冻保存培养基包括二甲亚砜(DMSO)。
18.根据权利要求17所述的调配物，其中所述冷冻保存培养基中的DMSO的百分比为约5％至约15％(w/w)。19.根据权利要求17或18所述的调配物，其中所述冷冻保存培养基中的DMSO的百分比为约10％DMSO(w/w)。20.根据权利要求1至19中任一项所述的调配物，其中所述冷冻保存培养基是CS10。21.根据权利要求2至14和16至20中任一项所述的调配物，其中所述调配物中的低温保存培养基的百分比为约25％至约35％(w/w)。22.根据权利要求2至14和16至21中任一项所述的调配物，其中所述调配物中的所述低温保存培养基的百分比为约30％(w/w)。23.根据权利要求2至14和16至22中任一项所述的调配物，其中所述低温保存培养基包括维生素E的水溶性类似物。24.根据权利要求2至14和16至23中任一项所述的调配物，其中所述低温培养基包括trolox((
±
)
‑6‑
羟基
‑
2,5,7,8
‑
四甲基色满
‑2‑
甲酸)。25.根据权利要求2至14和16至24中任一项所述的调配物，其中所述低温保存培养基是FRS。26.根据权利要求1至25中任一项所述的调配物，其中所述人血清白蛋白以人血清白蛋白溶液的形式提供。27.根据权利要求26所述的调配物，其中所述调配物中的人血清白蛋白溶液的百分比为约15％至约25％(w/w)。28.根据权利要求26或27所述的调配物，其中所述调配物中的人血清白蛋白溶液的百分比为约为约20％(w/w)。29.根据权利要求26至28中任一项所述的调配物，其中所述人血清白蛋白溶液包括浓度为约0.08mmol/g白蛋白的辛酸钠和/或浓度为约0.08mmol/g白蛋白的乙酰色氨酸。30.根据权利要求1至29中任一项所述的调配物，其中所述调配物中的人血清白蛋白的百分比为约为约2％至约8％(w/w)。31.根据权利要求1至30中任一项所述的调配物，其中所述调配物中的人血清白蛋白的百分比为约为约5％(w/w)。32.根据权利要求1至31中任一项所述的调配物，其中所述调配物的pH为约6.0至约8.5。33.根据权利要求1至32中任一项所述的调配物，其中所述调配物的pH为约7.4。34.一种外周血单核细胞(PBMC)的药物调配物，所述调配物包括：a)约1
×
106个PBMC/mL至约1
×
107个PBMC/mL，其中PBMC包括至少一种抗原；b)百分比为约65％至约95％(w/w)的冷冻保存培养基；以及c)约2％至约8％的人血清白蛋白，其中所述调配物的pH为约pH 6.0至约pH 8.5。35.一种外周血单核细胞(PBMC)的药物调配物，所述调配物包括：a)约5
×
106个PBMC/mL，其中PBMC包括至少一种抗原；
b)百分比为约50％(w/w)的冷冻保存培养基；以及c)百分比为约5％(w/w)的人血清白蛋白，其中所述调配物的pH为约pH 7.4。36.一种外周血单核细胞(PBMC)的药物调配物，所述调配物包括：a)约1
×
106个PBMC/mL至约1
×
107个PBMC/mL，其中PBMC包括至少一种抗原；b)百分比为约40％至约60％(w/w)的冷冻保存培养基；c)百分比为约25％至约35％的低温保存培养基；以及d)约2％至约8％的人血清白蛋白，其中所述调配物的pH为约pH 6.0至约pH 8.5。37.一种外周血单核细胞(PBMC)的药物调配物，所述调配物包括：a)约5
×
106个PBMC/mL，其中PBMC包括至少一种抗原；b)百分比为约50％(w/w)的冷冻保存培养基；c)百分比为约30％(w/w)的低温保存培养基；以及d)百分比为约5％(w/w)的人血清白蛋白，其中所述调配物的pH为约pH 7.4。38.根据权利要求36或37所述的调配物，其中所述冷冻保存培养基是CS10。39.根据权利要求36至38中任一项所述的调配物，其中所述低温保存培养基是FRS。40.根据权利要求1至39中任一项所述的调配物，其中所述调配物是无菌的。41.根据权利要求1至40中任一项所述的调配物，其中所述调配物包括小于约2EU/mL内毒素。42.根据权利要求1至41中任一项所述的调配物，其中所述调配物不含支原体。43.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：H，
申请(专利权)人：SQZ生物技术公司，
类型：发明
国别省市：