经修饰抗体及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种改进的经修饰抗体，其溶解度增加并且能够被浓缩为具有高浓度，以及一种用于制备所述改进的经修饰抗体的方法；并且涉及一种经修饰抗体，其中位于所述抗体的框架区中的氨基酸被取代，以及一种用于制备所述经修饰抗体的方法。饰抗体的方法。饰抗体的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】经修饰抗体及其制备方法


[0001]本专利技术涉及具有增加的溶解度且能够被高度浓缩的改进的经修饰抗体及其产生方法，更具体地说，本专利技术涉及其骨架中的氨基酸被取代的经修饰抗体及其产生方法。

技术介绍

[0002]抗体作为治疗剂在治疗诸如癌症和自身免疫性疾病等疾病方面非常有效。评价抗体的可开发性要考虑到高的产量、稳定的配制品、高的理化和体内稳定性、高的溶解度和PK特征(Next generation antibody drugs:pursuit of the'High
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hanging fruit'.Nat.Rev.Drug Discovery.,2018,17:197
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223.)
[0003]作为蛋白质药物的抗体可能由于共价键的变化而导致在化学上不稳定，或者可能由于三维空间结构的变形而导致在物理上不稳定。抗体可能由于水解、氧化、脱酰胺、二硫键修饰或外消旋化而导致在化学上不稳定，并且可能由于聚集、吸附或溶解而导致在物理上不稳定。
[0004]抗体的不稳定性可能会影响溶解度、功效等，并降低抗体的稳定性和溶解度，从而导致生产率和生产产量的下降，以及聚集倾向的增加，这会增加免疫原性的风险。
[0005]在这种技术背景下，诸位专利技术人努力开发经修饰抗体，通过提高抗体的溶解度可以将其高度浓缩。结果，诸位专利技术人发现，基于通过在特定位置处的氨基酸取代来提高溶解度可以实现高度浓缩，并且基于此完成了本专利技术。

技术实现思路

[0006]因此，本专利技术的一个目标是提供具有增加的溶解度的改进的经修饰抗体及其片段。
[0007]本专利技术的另一个目标是提供产生所述经修饰抗体及其片段的方法。
[0008]根据本专利技术的一个方面，上述和其他目标可以通过提供经修饰抗体及其片段来实现，在所述经修饰抗体及其片段中至少一个选自以下的氨基酸被取代：重链可变区第13位和第42位处的氨基酸(基于AHO编号系统)以及轻链可变区第94位处的氨基酸(基于AHO编号系统)。
[0009]根据本专利技术的另一个方面，提供了产生经修饰抗体及其片段的方法，在所述经修饰抗体及其片段中至少一个选自以下的氨基酸被取代：重链可变区第13位和第42位处的氨基酸(基于AHO编号系统)以及轻链可变区第94位处的氨基酸(基于AHO编号系统)。
附图说明
[0010]图1示出了抗体结构建模和热点分析的结果。
[0011]图2示出了抗体热点中L11T、V13S和V103S(基于AHO编号系统，下文称为“L11T”、“V12S”和“V93S”)的表达测试的结果。
[0012]图3示出了抗体热点中N42T、Q77R和N94S(基于AHO编号系统，下文称为“N35T”、
“
Q61R”和“N76S”)的表达测试的结果。
[0013]图4示出了抗体热点中V13S、N42T和N94S(基于AHO编号系统，下文称为“V12S”、“N35T”和“N76S”)的表达测试的结果。
[0014]图5A至5G示出了通过SDS
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PAGE纯化抗体的结果。
[0015]图6示出了根据本专利技术的抗Ang2抗体的热稳定性分析的结果。
[0016]图7A至7C示出了使用小鼠CNV(脉络膜血管新生)模型评价根据本专利技术的抗Ang2抗体的抗血管生成功效的结果。
具体实施方式
[0017]除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语都具有与本专利技术所涉及领域的技术人员所理解的含义相同的含义。通常，本文所用的命名法是本领域熟知的，并且是常用的。
[0018]诸位专利技术人发现，经修饰抗体及其片段表现出提高的溶解度，可以浓缩至高水平，从而表现出提高的生产率，在所述经修饰抗体及其片段中至少一个选自以下的氨基酸被取代：重链可变区第13位(V12)和第42位(N35)处的氨基酸(基于AHO编号系统)以及轻链可变区第94位(N76)处的氨基酸(基于AHO编号系统)。
[0019]特别地，诸位专利技术人发现，经修饰抗体及其片段表现出提高的溶解度，可以浓缩至高水平，从而表现出提高的生产率，在所述经修饰抗体及其片段中重链可变区中第13位(V12)处的氨基酸被丝氨酸(S)取代，重链可变区中第42位(N35)处的氨基酸被苏氨酸(T)取代，或者轻链可变区中第94位(N76)处的氨基酸被丝氨酸(S)取代，其中编号基于AHO编号系统。
[0020]基于此，在一个方面，本专利技术涉及经修饰抗体及其片段，其中至少一个选自以下的氨基酸被取代：重链可变区第13位和第42位处的氨基酸(基于AHO编号系统)以及轻链可变区第94位处的氨基酸(基于AHO编号系统)。
[0021]在另一个方面，本专利技术涉及用于产生经修饰抗体及其片段的方法，在所述经修饰抗体及其片段中至少一个选自以下的氨基酸被取代：重链可变区第13位和第42位处的氨基酸(基于AHO编号系统)以及轻链可变区第94位处的氨基酸(基于AHO编号系统)。
[0022]本文公开的抗体或其片段的氨基酸的位置可以基于AHO编号系统来定义或标识。在一些情况下，本文公开的抗体或其片段的氨基酸的位置可以意指从对应于SEQ ID NO:34的重链可变区和SEQ ID NO:32的轻链可变区的氨基酸序列的N末端开始的氨基酸的No.1开始按顺序编号的位置。
[0023]在一个实施方案中，重链可变区中第13位和第42位处的氨基酸(基于AHO编号系统)以及轻链可变区中第94位处的氨基酸(基于AHO编号系统)可以被丝氨酸(S)或苏氨酸(T)取代。
[0024]在具体的实施方案中，氨基酸取代可以包括选自以下的一个或多个位置(基于AHO编号系统)处的氨基酸取代：
[0025]用丝氨酸(S)取代重链可变区中第13位处的缬氨酸(V)；
[0026]用苏氨酸(T)取代重链可变区中第42位处的天冬酰胺(N)；以及
[0027]用丝氨酸(S)取代轻链可变区中第94位处的天冬酰胺(N)。
[0028]在本专利技术的具体实施方案中，氨基酸取代可以包括以下位置(基于AHO编号系统)处的氨基酸取代：
[0029]用丝氨酸(S)取代重链可变区中第13位处的缬氨酸(V)；
[0030]用苏氨酸(T)取代重链可变区中第42位处的天冬酰胺(N)；
[0031]用丝氨酸(S)取代轻链可变区中第94位处的天冬酰胺(N)；
[0032]用丝氨酸(S)取代重链可变区中第13位处的缬氨酸(V)，以及用苏氨酸(T)取代重链可变区第42位处的天冬酰胺(N)；
[0033]用丝氨酸(S)取代重链可变区第13位处的缬氨酸(V)，以及用丝氨酸(S)取代轻链可变区第94位处的天冬酰胺(N)；
[0034]用苏氨酸(T)取代重链可变区第42位处的天冬酰胺(N)，以及用丝氨酸(S)取代轻链可变区第94位处的天冬酰胺(N)；或者
[0035]用丝氨酸(S)取代重链可变区第13位处的缬氨酸(V)，用苏氨酸(T)取代重链可变区本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种经修饰抗体及其片段，其中至少一个选自以下的氨基酸被取代：重链可变区第13位和第42位处的氨基酸(基于AHO编号系统)以及轻链可变区第94位处的氨基酸(基于AHO编号系统)。2.根据权利要求1所述的经修饰抗体及其片段，其中所述重链可变区中第13位和第42位处的氨基酸(基于AHO编号系统)以及所述轻链可变区中第94位处的氨基酸(基于AHO编号系统)被丝氨酸(S)或苏氨酸(T)取代。3.根据权利要求1所述的经修饰抗体及其片段，其中所述氨基酸取代包括选自以下的一个或多个位置(基于AHO编号系统)处的氨基酸取代：用丝氨酸(S)取代所述重链可变区中第13位处的缬氨酸(V)；用苏氨酸(T)取代所述重链可变区中第42位处的天冬酰胺(N)；以及用丝氨酸(S)取代所述轻链可变区中第94位处的天冬酰胺(N)。4.根据权利要求1所述的经修饰抗体及其片段，其中具有氨基酸取代的所述重链可变区包含序列为QVQLVESGGGLX1KPGGSLRLSCAAS(其中X1是S)和/或MX2WVRQAPGKGLEWVSS(其中X2是T)的框架区。5.根据权利要求1所述的经修饰抗体及其片段，其中具有氨基酸取代的所述轻链可变区包含序列为NLQSGVSSQFSGSGSGTDFTLTIX3SLQPEDSATYYC(其中X3是S)的框架区。6.根据权利要求1所述的经修饰抗体及其片段，其中所述经修饰抗体或其片段包含一个或多个选自以下的框架区：QVQLVESGGGLX1KPGGSLRLSCAAS(其中X1是S)；MX2WVRQAPGKGLEWVSS(其中X2是T)；以及NLQSGVSSQFSGSGSGTDFTLTIX3SLQPEDSATYYC(其中X3是S)。7.根据权利要求1所述的经修饰抗体及其片段，其中所述抗体或其片段包含：重链可变区，所述重链可变区包括选自SEQ ID NO:1、7、13、19和25的重链CDR1；选自SEQ ID NO:2、8、14、20和26的重链CDR2；和选自SEQ ID NO:3、9、15、21、27、43、44和45的重链CDR3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包括选自SEQ ID NO:4、10、16、22和28的轻链CDR1；选自SEQ ID NO:5、11、17、23和29的轻链CDR2；和选自SEQ ID NO:6、12、18、24和3...

【专利技术属性】
技术研发人员：高种一，河政旼，李周炯，南周伶，李元燮，
申请(专利权)人：药物抗体公司，
类型：发明
国别省市：