人血液样本中脂类分子含量测定及其结直肠癌诊断试剂盒制备与应用。本发明专利技术有关人血液样本中脂类分子的提取与含量测定以及结直肠癌脂类分子标志物的确定。特别是，本发明专利技术包括了血液样本中几种结直肠癌脂类标志物检测的细节，并根据脂类分子标记物组成一种用于结直肠癌诊断的试剂盒。根据样本中脂类标记物的含量，通过特定的计算分析，可诊断样本提供者患结直肠癌的可能性，还为结直肠癌治疗中的疗效分析提供了新的手段。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术提供了一种测定个体血液样本中多种脂类分子水平的方法，这些脂类分子 包括溶血磷脂酰胆碱(LPC)的各种亚型(14:0LPC、 16:0LPC、 18:0LPC、 20:0LPC、 22:0LPC、 18:1LPC、 18:2LPC、 20:4LPC、 22:6LPC，采用不饱和有机化合物的阿拉 伯数字编号定位，冒号后数字表示双键位置)、神经鞘氨醇磷酸胆碱(SPC)、血小板 活化因子(L-PAF)，鞘磷脂(SM，包括SM703和SM731，其中703与731分别指 两种亚型的分子量)。我们专利技术了一种脂类分子的生物标记组合，将其制备成试剂盒， 以人体血液为样本，根据脂类标记分子的含量测定和综合分析，确定个体患有结直 肠癌的可能性，以此进行结直肠癌的辅助检测。
技术介绍
结直肠癌(CRC)是威胁人类健康的主要癌症之一，是常见的恶性肿瘤。近20 多年来，世界上多数国家结直肠癌发病率和死亡率处于上升趋势。据世界卫生组织 (WHO)Parkin博士报告，2002年结直肠癌新病例102.3万，死亡52.9万，分别比2000 年增加了8.3%和7.5%，其发病率和死亡率分别居所有癌症的第三位和第四位。在现 有癌症患者中，结直肠癌占了 11.4%，居第二位。我国情况亦相似，以上海为例， 1973--1993年结直肠癌发病率每年递增4.2%,比全球平均递增速度还要高一倍多。 1990-1992年我国十分之一人口抽样调査表明，结直肠癌平均调整死亡率为4.54/10 万，比1977年全国结直肠癌死亡率3.54 / 10万增加了 28.2%,居所有癌症死亡率的 第五位。最近据WHO报告的资料，我国结直肠癌死亡率2005年比1991年增加了 70.7%，年均增加4.71%。中国患者的发病年龄多在40 — 60岁，中位发病年龄比欧美约提前10年，高峰 在50岁左右，但30岁以下的结直肠癌患者也比欧美多见。由于结直肠癌起病隐匿， 症状的公众知晓度较低，许多患者在确诊时已经处于晚期。所以如果出现大便习惯 与粪便性状的改变、腹痛或血便，应该及时就诊。结直肠癌的临床危险因素包括年龄，大多在50岁以后；高蛋白高脂低纤维素饮食、吸烟和饮酒；家族史；患过大 肠息肉；胆囊切除10年以上；重症溃疡性结肠炎多年不愈；接受过下腹部放射治疗； 不明原因反复便血等等。结直肠癌大约有25%的患者初次就诊时就巳经发生转移。另外，高达50%的新诊断患者最终将进展为转移性结直肠癌，发生转移的患者能存活5年以上的不足5 %，其最常见的转移部位是肝脏或其附近的淋巴结。转移性结直肠癌的医疗需求非 常大，目甜出现了西妥昔单抗这样第一个靶向作用于表皮生长因子受体的单克隆抗 体，作为一种治疗结直肠癌且毒副作用远小于传统化疗药物的西妥昔单抗(爱必妥)， 为伊立替康标准化疗失败的转移癌患者提供了一种新的治疗选择。由于生存时间的长短取决于疾病诊断的时期，因此早期诊断极为重要。就全球 而言，迄今结直肠癌的"三早"(早期发现、早期诊断、早期治疗)远不如人意。按理， 根据目前外科技术和放化疗条件，结直肠癌完全可以争取到更好的治疗效果。临床 资料表明，I期结直肠癌术后5年生存率达90%以上，II期为68.4%， III期为39.7%， IV期仅为10.2。/。。事实上，临床所见I期患者仅10% 20%，误诊、漏诊情况十分严 重。文献资料统计结直肠癌的误诊率达60% 70%，约64% 85%的患者经历6个月 以上才获得正确诊断，以致相当多患者失去治愈机会。在治疗上，虽然公认结直肠 癌以手术治疗为主，但是手术治疗的效果在很大程度上取决于结直肠癌所处的时期。许多研究表明，结直肠癌变是一个涉及原癌基因激活、抑癌基因失活等多基因、多 阶段、多歩骤渐进演化的积累过程。与结直肠癌相关的抑癌基因有p53、 APC、 DCC等， 原癌基因有K-ras、 c-myc等，并可能用于临床辅助诊断。1. CD44人的CD44基因位于第11号染色体短臂上,大小约60kb,含有20个外显子。其中外显 子6 15(即V1 V10)在转录过程中易于通过选择性剪接形成剪接变异体，即CD44V。 Coppola D等(Coppola D.,Hyacinthe M., Fu L.， W a/.CD44V6 expression in human colorectal carcinoma. Hum Pathol,1998,29:627-635.)对34例结直肠癌切除标本的检测结果发现腺瘤 中CD44V6检出率为100%，癌为91%,转移灶最弱，仅38%，因此认为D44V6的表达是 结直肠癌的早期标志。国内吴健雄等(吴健雄，余宏迢,邵永孚，等.转移相关基因CD44V在 大肠癌中的表达及其临床意义.中华肿瘤杂志，1996,18(5):347-350)的研究证实CD44V mRNA在结直肠癌中的异常表达具有普遍性，既可能是早期癌变伴随出现的生物学标志， 也可能是判断结直肠癌转移的有用指标。Kim等(Kim H., Yang X.Y.， RosadaC expression in colorectal adenomas is an early event occurring prior to k-ras and p53 gene mutation . Arch Biochem Biophys, 1994,310(2): 504-507)认为，在结肠癌进展过程中，CD44 基因的表达与突变的K-ras基因相关联，是被活化的H-ras基因所诱导，并认为此种异常 表达早于K-ras和p53基因突变。因而认为，CD44V6基因异常表达是肿瘤发生的早期事 {牛。Yamao等(Yamao T.， Matsumura Y,, Shimada Y.，" a/.Abnormal expression of CD445variants in the exfoliated cells in the faeces of patients with colorectal cancer. Gastroenterology, 1998， 144(6): 1196.)应用RT-PCR及Southern杂交技术检测了 25例结直肠癌患者及15例 健康对照者粪便中脱落细胞的CD44、 CD44V6及CD44V10的表达。结果显示结直肠癌 患者的CD44V6及CD44V10的阳性检出率分别为68%和60%，术后的阴转率分别为88.2 %和80.0%。而且CD44V6及CD44V1()均可在Duckes A期患者术前粪便中检出。因而， 对粪便中脱落细胞的CD44基因异常表达分析可作为非侵袭性方法用于结直肠癌患者的 早期诊断及无症状高危人群的筛选。2. p53p53基因位于人类17号染色体短臂(17pl3.1)。全长约1620kb。由11个外显子和10 个内含子组成。p53基因在进化过程中高度保守，外显子2、 4、 5、 7、 8分别编码5个在 进化上高度保守的结构。野生型p53(WTp53)与调控细胞生长周期、调节细胞转化、DNA 复制、诱导细胞程序性死亡有关。有实验表明，分化良好的腺瘤，包括家族性多发性结 肠息肉这一常染色体显性遗传病以及结直肠息肉中p本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种通过检测人个体样本中溶血磷脂酰胆碱（ＬＰＣ）及其它脂类分子的水平辅助诊断结直肠癌的试剂盒。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：桑建利，徐燕，张俊杰，赵克，肖刚，叶颖江，丛羽生，张伟，张研，
申请(专利权)人：桑建利，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。