一种用于酶联免疫检测试剂盒的稳定保护剂及其制备方法技术

本申请涉及生物检测试剂领域，尤其涉及一种用于酶联免疫检测试剂盒的稳定保护剂及其制备方法；所述稳定保护剂包括蛋白稳定剂、基础盐缓冲液、氨基酸、表面活性剂、防腐剂、多羟基化合物、过氧化物酶稳定缓冲剂和纯化水；多羟基化合物包括丙三醇、海藻糖和山梨醇；蛋白稳定剂包括血清蛋白；所述方法包括：配制基础盐缓冲液；加入蛋白稳定剂和氨基酸，并搅拌至溶解完全，得到第一稀释液；加入海藻糖和山梨醇，并搅拌至溶解完全，得到第二稀释液；加入过氧化物酶稳定缓冲剂、表面活性剂、防腐剂和丙三醇，并搅拌至溶解完全，后以纯化水定容，得到稳定保护剂；通过上述组分和方法，可提高高温稳定性，从而延长稳定保护剂的稳定保护时间。从而延长稳定保护剂的稳定保护时间。从而延长稳定保护剂的稳定保护时间。

【技术实现步骤摘要】
一种用于酶联免疫检测试剂盒的稳定保护剂及其制备方法


[0001]本申请涉及生物检测试剂领域，尤其涉及一种用于酶联免疫检测试剂盒的稳定保护剂及其制备方法。

技术介绍

[0002]酶联免疫检测(ELISA)是为一种常用的检测方法，服务于生物工作，因其具有特异、灵敏、简便、快速的特点，现已在生物医学研究领域及临床疾病的诊疗中得到了广泛的应用。通过搭建ELISA检测技术平台，可以加速检测进度和效率，而基于成熟的抗原
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抗体制备平台制备的关键原料，采用竞争法和双抗体夹心法这两大主流方法学是支撑酶联免疫检测技术的关键，基于上述两大主流方法已成功开发出涉及肿瘤、激素、自身免疫、心血管、代谢等十多个领域的检测技术。其中，双抗体夹心法是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体，然后和待检样本中的相应抗原结合形成免疫复合物，加入生物素标记抗体，与免疫复合物中洗涤后抗原结合形成生物素标抗体
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抗原
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固相抗体复合物，再加HRP酶标记亲和素，与免疫复合物中生物素标抗体结合形成HRP酶标记亲和素
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生物素标抗体
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抗原
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固相抗体复合物，后加底物显色，定量分析样本中的抗原含量。
[0003]而通过双抗体夹心法进行酶联免疫检测过程中，需要使用到的辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase，HRP)，其具有活性高、稳定、分子量小、纯酶容易制备的有点，因此被广泛应用。而现阶段过氧化物酶作为多个试剂盒显色体系的关键成分，因此过氧化物酶对试剂盒的质量有重要影响。目前影响HRP在体外环境中发挥功能的一个主要限制因素在于其稳定性，因此确保HRP经长时间运输后的稳定性是一大技术难点。
[0004]目前市面上的所售的合格的HRP稳定剂，在37℃的环境下可保持HRP的活性至7天左右，但是若要进行试剂盒的长途运输，往往环境温度会超过37℃，或者运输时间超过7天，都会导致试剂盒的稳定性降低，影响试剂盒检测的准确性，因此如何提高稳定保护剂在37℃以上温度的稳定时间，以避免HRP酶活性的改变导致试剂检测结果准确性降低，是目前亟需解决的技术问题。

技术实现思路

[0005]本申请提供了一种用于酶联免疫检测试剂盒的稳定保护剂及其制备方法，以解决现有技术中辣根过氧化物酶的稳定剂在37℃以上温度的稳定时间过短的问题。
[0006]第一方面，本申请提供了一种用于酶联免疫检测试剂盒的稳定保护剂，所述稳定保护剂包括蛋白稳定剂、基础盐缓冲液、氨基酸、表面活性剂、防腐剂、多羟基化合物、过氧化物酶稳定缓冲剂和纯化水；
[0007]以质量分数计，所述稳定保护剂的化学组分包括：
[0008]蛋白稳定剂：0.5％～2％，氨基酸：0.5％～1％，多羟基化合物：20％～35％，余量为过氧化物酶稳定缓冲剂和纯化水的混合液；
[0009]其中，所述多羟基化合物包括：丙三醇、海藻糖和山梨醇；
[0010]所述蛋白稳定剂包括血清蛋白。
[0011]可选的，以质量分数计，所述多羟基化合物包括：丙三醇：20％～30％，海藻糖：0.5％～2％和山梨醇：0.5％～2％。
[0012]可选的，所述血清蛋白包括牛血清蛋白、马血清蛋白和兔血清蛋白中的至少一种。
[0013]可选的，所述氨基酸为中性氨基酸。
[0014]可选的，所述中性氨基酸包括甘氨酸。
[0015]可选的，所述过氧化物酶稳定缓冲剂的质量分数为5％～10％。
[0016]可选的，以质量分数计，所述稳定保护剂的化学组分还包括：基础盐缓冲液：2.2％～4.6％，表面活性剂：0.05％～0.1％，防腐剂：0.05％～0.1％。
[0017]可选的，所述基础盐缓冲液包括4
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(2
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羟乙基)
‑1‑
哌嗪乙磺酸：0.5％～1％，氯化钠：1％～2％，无水磷酸二氢钠：0.2％～0.6％。
[0018]可选的，所述表面活性剂包括吐温20。
[0019]第二方面，本申请提供了一种制备第一方面所述的稳定保护剂的方法，所述方法包括：
[0020]配制所述基础盐缓冲液；
[0021]向所述基础盐缓冲液中加入所述蛋白稳定剂和所述氨基酸，并进行搅拌至溶解完全，得到第一稀释液；
[0022]向所述第一稀释液中加入所述海藻糖和所述山梨醇，并进行搅拌至溶解完全，得到第二稀释液；
[0023]向所述第二稀释液中加入所述过氧化物酶稳定缓冲剂、所述表面活性剂、所述防腐剂和所述丙三醇，并进行搅拌至溶解完全，后以所述纯化水进行定容，得到稳定保护剂。
[0024]本申请实施例提供的上述技术方案与现有技术相比具有如下优点：
[0025]本申请实施例提供的一种用于酶联免疫检测试剂盒的稳定保护剂，通过引入蛋白稳定剂，利用蛋白稳定剂中的血清蛋白充当辣根过氧化物酶的稳定剂，防止辣根过氧化物酶的分解和非特异性吸附，从而减轻稳定保护剂中某类酶的变性，并减轻有些不利环境因素(例如过热、表面张力变化和化学因素)所引起的变性，再通过氨基酸的抗氧化性，避免环境温度过高时对辣根过氧化物酶的活性影响，同时还能避免辣根过氧化物酶的变性，再通过多羟基化合物中海藻糖，利用其不具备还原性以及对热和酸碱都有非常好的稳定性的特性，在与氨基酸或蛋白质共存时，即使加热也不会发生美拉德反应，因此对辣根过氧化物酶也具备稳定作用，同时多羟基化合物中山梨醇的不易氧化特性，在加热阶段也同海藻糖一样不会发生美拉德反应，因此山梨醇可以和海藻糖、氨基酸协同提高辣根过氧化物酶的稳定性，最后通过多羟基化合物中丙三醇，由于丙三醇具备保湿和保润功能，同时还兼具抗氧化的功能，不仅能使得稳定保护剂中各成分之间稳定存在，还能进一步避免高温状态对辣根过氧化物酶的破坏而导致酶变性，因此通过稳定保护剂中的蛋白稳定剂、氨基酸和多羟基化合物，能在过氧化物酶稳定缓冲剂的稳定作用基础上，进一步提高辣根过氧化物酶在37℃以上的高温稳定性，从而延长稳定保护剂的稳定保护时间。
附图说明
[0026]此处的附图被并入说明书中并构成本说明书的一部分，示出了符合本申请的实施
例，并与说明书一起用于解释本申请的原理。
[0027]为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0028]图1为本申请实施例提供的方法的流程示意图；
[0029]图2为本申请实施例提供的第0天试剂盒的标准曲线示意图；
[0030]图3为本申请实施例提供的37℃处理7天后试剂盒的标准曲线示意图；
[0031]图4为本申请实施例提供的50℃处理7天后试剂盒的标准曲线示意图。
具体实施方式
[0032]为使本申请实施例的目的、技术方案和优点更加清本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于酶联免疫检测试剂盒的稳定保护剂，其特征在于，所述稳定保护剂包括蛋白稳定剂、基础盐缓冲液、氨基酸、表面活性剂、防腐剂、多羟基化合物、过氧化物酶稳定缓冲剂和纯化水；以质量分数计，所述稳定保护剂的化学组分包括：蛋白稳定剂：0.5％～2％，氨基酸：0.5％～1％，多羟基化合物：20％～35％，余量为过氧化物酶稳定缓冲剂和纯化水的混合液；其中，所述多羟基化合物包括：丙三醇、海藻糖和山梨醇；所述蛋白稳定剂包括血清蛋白。2.根据权利要求1所述的稳定保护剂，其特征在于，以质量分数计，所述多羟基化合物包括：丙三醇：20％～30％，海藻糖：0.5％～2％和山梨醇：0.5％～2％。3.根据权利要求1所述的稳定保护剂，其特征在于，所述血清蛋白包括牛血清蛋白、马血清蛋白和兔血清蛋白中的至少一种。4.根据权利要求1所述的稳定保护剂，其特征在于，所述氨基酸为中性氨基酸。5.根据权利要求4所述的稳定保护剂，其特征在于，所述中性氨基酸包括甘氨酸。6.根据权利要求1所述的稳定保护剂，其特征在于，所述过氧化物酶稳定缓冲剂的质量分数为5％～10％。7.根据权利要求1所述的稳定保护剂，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：张纯，杜巧荣，华权高，葛静，舒芹，
申请(专利权)人：武汉华美生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：