一种大规模定向标记碱性磷酸酶的方法技术

本发明专利技术涉及生物学定点标记技术领域，尤其是一种大规模定向标记碱性磷酸酶的方法，包括如下步骤：Catcher

【技术实现步骤摘要】
一种大规模定向标记碱性磷酸酶的方法


[0001]本专利技术涉及生物学定点标记
，尤其是一种大规模定向标记碱性磷酸酶的方法。

技术介绍

[0002]酶标记法亦称免疫酶技术，是以免疫反应为基础，将抗原、抗体与酶偶联起来的技术的生物学技术。在相关的免疫实验中发挥着至关重要的作用，如酶联免疫吸附实验、免疫印记实验以及酶免疫组织化学染色等。酶标记技术结果易于观察，通过相关的设备进行检测，既能定性，又可定量。常用的酶标技术有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（CIAP）。碱性磷酸酶（CIAP）广泛分布于动物肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织中，本专利技术选用牛小肠碱性磷酸酶（CIAP）作为研究对象，因为CIAP的酶活相对来说较高，且在酶标记实验中使用较为广泛。
[0003]目前碱性磷酸酶标记的方法主要有两种，一种是戊二醛交联标记法，此法是以戊二醛作为双功能交联剂，可分别与酶分子和蛋白分子上的氨基结合，分为一步法和两步法。一步法将蛋白、酶和戊二醛同时混合。这种方法操作很简单，AP、HRP等酶标记蛋白都可用此方法进行，但是同样也存在很大的缺陷，这种本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种大规模定向标记碱性磷酸酶的方法，其特征是，包括如下步骤：S1，Catcher
‑
Taq融合的CIAP蛋白亚克隆设计，设计和构建亚克隆质粒，并在真核表达系统生产Catcher
‑
Taq融合的CIAP蛋白，目的基因经软件分析后进行密码子优化，构建至真核表达载体上；S2，Catcher
‑
Taq融合的CIAP蛋白的纯化，Catcher
‑
Taq的CIAP蛋白融合了8
×
His
‑
taq，通过高耐受的Ni填料进行亲和纯化，先上样后平衡，然后进行2
‑
5mM低浓度咪唑洗杂缓冲液进行洗杂，再通过250
‑
500mM高浓度咪唑洗脱缓冲液进行洗脱，最后透析换液至20
‑
50mM Tris
‑
HCl、10
‑
50mM MgCl2及10
‑
50μM ZnCl2的混合液，且所述混合液的pH为6.5
‑
8.5；S3，Spy
‑
Taq融合的c
‑
Myc抗体亚克隆设计，设计和构建亚克隆质粒，并在真核表达系统生产Spy
‑
Taq融合的c
‑
Myc抗体，目的基因经软件分析后进行密码子优化，构建至真核表达载体上；S4，Spy
‑
Taq融合的c
‑
Myc抗体的纯化，Spy
‑
Taq融合蛋白是重组表达的抗体，带有Fc
‑
Taq，通过Prot...

【专利技术属性】
技术研发人员：单玉飞，邹阳，方利，
申请(专利权)人：常州伯仪生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：