本发明专利技术公开了一种CaERF2基因在辣椒耐低温性状选育中的应用，所述CaERF2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述CaERF2基因在辣椒中过量表达。本发明专利技术通过在分子水平上建立耐低温辣椒品种的基因标识，进行辅助选育，可快速又准确地筛选出耐低温的辣椒品种，具有目标性强、育种周期短、成本低的特点，将大幅提高育种的目标性与育种效率，对辣椒产业的长远发展具有重要意义。具有重要意义。具有重要意义。
【技术实现步骤摘要】
CaERF2基因在辣椒耐低温性状选育中的应用
[0001]本专利技术涉及一种CaERF2基因在辣椒耐低温性状选育中的应用，属于辣椒选育
技术介绍
[0002]辣椒(Capsicum annuum L.)隶属于茄科(Solanaceae)辣椒属(Capsicum)，为一年生或多年生草本植物，原产于热带和亚热带地区。在我国，辣椒相关产业发展十分迅速，已成为中国种植面积最大、消费最大和加工方式最多的蔬菜，被列入全国首批优势特色产业集群建设项目。我国辣椒年种植面积稳定在210万公顷以上，占全球辣椒种植面积的40％。
[0003]辣椒原产中南美洲，属于喜温作物，生长发育的适宜温度为20～30℃，苗期白天适宜温度为25～30℃，夜晚适宜温度为15～18℃。辣椒植株长时间处于5～15℃时，生长发育受阻，发生低温胁迫；长时间处在0～5℃时，生长发育停止，易受到冷害；遇到冰点以下的温度时，辣椒植株会发生冻害。低温胁迫会影响辣椒的生长发育和产量，轻则减小辣椒叶面积和落花落果等，重则导致植株死亡。辣椒在现蕾开花时期受到15℃以下的温度时，会导致花粉管伸长受到抑制和生理机能受到破坏，导致辣椒授粉受精不良，最终造成落花落果，影响产量。目前，辣椒多为露地栽培，冬春移栽后频繁遭受低温影响，导致辣椒的结实率下降、单果重和单株产量减少等，产量不足夏秋辣椒的一半。选育或培育耐低温辣椒品种是解决这一问题的有效途径之一。
[0004]目前选育或培育耐低温辣椒品种的方法主要有：一是低温锻炼，低温锻炼可以在一定时间内和轻度的低温胁迫下有效的提高植株的抗冷能力，但在实际生产中这种方法很容易受到限制，因为该方法要求植物必须具备抗冷的遗传特性，若植株长时间受到低温胁迫时，低温驯化的效果则不明显。二是农业措施，如适当增施磷肥和钾肥，少施或不施速效氮肥，可以明显地提高植物的抗低温能力。此技术需要消耗大量人力物力，成本高。三是化学诱导，利用化学药物诱导植物抗低温能力的提高，如植物生长物质细胞分裂素、脱落酸、2,4
‑
二氯苯氧乙酸等可直接或间接影响植物生理过程而提高植物的抗低温能力。此技术存在育种效率低下的缺点。四是抗寒性育种，该方法是植物防寒抗冻的根本途径，有杂交育种、诱变育种、多倍体育种、单倍体育种和抗寒基因工程。此技术育种周期过长。需要应用一种快速高效的选育方法。
技术实现思路
[0005]基于上述，本专利技术提供一种CaERF2基因在辣椒耐低温性状选育中的应用，通过该方法可以快速高效筛选出具有耐低温性状的辣椒，以克服现有技术的不足。
[0006]本专利技术的技术方案是：CaERF2基因在辣椒耐低温性状选育中的应用，所述CaERF2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述CaERF2基因在辣椒中过量表达。
[0007]优选的，包括以下步骤：
[0008](1)提取待筛选辣椒的总RNA；
[0009](2)将总RNA反转录合成cDNA；
[0010](3)以cDNA为模板，利用CaERF2基因引物对P1和内参基因Caactin引物对P2，分别进行实时荧光定量PCR扩增反应；
[0011](4)根据实时荧光定量PCR扩增结果，得到辣椒CaERF2基因和内参基因Caactin的CT值；
[0012](6)根据2
－
△△
CT
法计算待测辣椒CaERF2基因相对表达量，筛选相对表达量高的辣椒个体。
[0013]优选的，所述内参基因Caactin的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
[0014]优选的，所述CaERF2基因引物对P1为：
[0015]正向引物F1：5
’‑
GTTGGCTTATGACAAAGCGG
‑3’
[0016]反向引物R1：5
’‑
CTTCCCCGATGACGAGGAG
‑3’
。
[0017]优选的，所述Caactin基因引物对P2为
[0018]正向引物F2：5
’‑
GGAGTAATGGTAGGAATGGG
‑3’
[0019]反向引物R2：5
’‑
TTGCTGACAATACCATGCTC
‑3’
。
[0020]优选的，所述PCR扩增体系为：配置体系(10μl)：ddH2O 3.6μl、primer
‑
F(10μM)0.2μl、primer
‑
R(10μM)0.2μl、cDNA 1μl、2
×
ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix 5μl；扩增程序：95℃30sec、40个循环为95℃10sec、55℃15sec、72℃20sec。
[0021]AP2/ERF家族是植物类特有的超家族，AP2/ERF类转录因子均含有1个由60
‑
70个氨基酸残基组成的高度保守的AP2/ERF结构域。根据保守结构域差异，可将AP2/ERF类转录因子进一步分为5个亚家族，即ERF、DREB(dehydration
‑
responsive element binding protein)、AP2、RAV(relate to ABI3/VP1)和Soloist，其中ERF亚家族包括1个AP2结构域，该家族成员在植物生长发育、生物胁迫以及非生物胁迫响应中的重要作用也被广泛报道，如参与植物种子形成、器官形成、抵抗病毒危害、提高低温耐受性等。随着生物信息技术的发展和分子生物学的深入研究，ERF在低温胁迫下的作用逐渐成为研究热点。
[0022]本专利技术的有益效果是：通过在辣椒中提高CaERF2基因的表达量，能够显著提高辣椒的耐低温性状。本专利技术在分子水平上建立耐低温辣椒品种的基因标识，进行辅助选育，可快速又准确地筛选出耐低温的辣椒品种，具有目标性强、育种周期短、成本低的特点。将大幅提高育种的目标性与育种效率，对辣椒产业的长远发展具有重要意义。
附图说明
[0023]图1
‘
川椒长线A
’
低温胁迫处理后表型与
‘
辣皇妃158
’
低温胁迫处理后表型；
[0024]图2为
‘
川椒长线A
’
内源CaERF2基因相对表达量与
‘
辣皇妃158
’
内源CaERF2基因相对表达量对比图；
[0025]图3为部分辣椒种质纬度分布图；
[0026]图4为不同辣椒种质内源CaERF2的相对表达量。
具体实施方式
[0027]为使本专利技术的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本专利技术的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发
明。但是本专利技术能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本专利技术内涵的情况本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.CaERF2基因在辣椒耐低温性状选育中的应用，其特征在于，所述CaERF2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述CaERF2基因在辣椒中过量表达。2.根据权利要求1所述的CaERF2基因在辣椒耐低温性状选育中的应用，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取待筛选辣椒的总RNA；(2)将总RNA反转录合成cDNA；(3)以cDNA为模板，利用CaERF2基因引物对P1和内参基因Caactin引物对P2，分别进行实时荧光定量PCR扩增反应；(4)根据实时荧光定量PCR扩增结果，得到辣椒CaERF2基因和内参基因Caactin的CT值；(6)根据2
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△△
CT
法计算待测辣椒CaERF2基因相对表达量，筛选相对表达量高的辣椒个体。3.根据权利要求2所述的CaERF2基因在辣椒耐低温性状选育中的应用，其特征在于，所述内参基因Caactin的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。4.根据权利要求2所述的CaERF2基因在辣椒耐低温性状选育中的应用，其特征在于，所述CaERF2基因引物对P1为：正向引物F1：5
’‑
GTTGGCTTATGACAAAGC...
【专利技术属性】
技术研发人员：肇瑾，黄渺，肖路臣，蔡骏一，宋泽洋，倪芮，罗悠悠，姚依妮，何奕含，刘文霖，
申请(专利权)人：贵州大学，
类型：发明
国别省市：
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