茄子果皮颜色基因扩增用的引物对制造技术

茄子果皮颜色基因扩增用的引物对，其特征在于：引物对的核苷酸序列为：正向引物为：Wz

【技术实现步骤摘要】
茄子果皮颜色基因扩增用的引物对


[0001]本申请属于生物分子检测及育种领域，具体涉及茄子果皮颜色基因扩增用的引物对。

技术介绍

[0002]茄子（Solanum melongena）是亚洲及非洲等地区广泛种植的重要蔬菜作物，其种质资源丰富，具有丰富的果型多态性，是研究果实形状的理想材料。果实形状是园艺作物商品性的主要指标之一。明确茄子果实形状的遗传规律可为开发相关分子标记以及选育消费者喜欢的果形新品种提供依据。
[0003]花青素分布在植物细胞的液泡中，可使植物的部分器官表现红色、紫色、蓝色等，也决定了大部分植物的花色及部分植物的果色。它的基本结构是 3,5,7
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羟基
‑2‑
苯基苯并吡喃，合成前体是苯丙氨酸，在细胞质的内质网中由一系列的酶促反应形成。花青素的合成是受遗传因素和环境因素一起调控的。遗传因素包括花青素合成途径的结构基因和调控因子。环境因素包括光照、温度、外源激素、胁迫因素等。
[0004]国内外学者在控制茄子紫色果皮基因的定位及连锁标记开发方面做了大量研究。在控制茄子紫色果皮基因的定位方面，目前普遍将其作为质量性状来研究，有相关研究发现，控制茄子紫色果皮基因位于茄子的第10和12号染色体上。在连锁标记开发方面，国内外学者开发了许多与控制茄子紫色果皮基因连锁的分子标记，但在紧密连锁程度及适用性上还有待提高。

技术实现思路

[0005]茄子果皮颜色基因扩增用的引物对，其特征在于：引物对的核苷酸序列为：正向引物为：Wz
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1F：5
’‑ꢀ
CTTGTCAAAGACTGATTACACGATA
‑3’
；反向引物为：Wz
‑
1R：5
’‑ꢀ
CCTATCACACCTAATTGTTAAACTG
‑3’
。
[0006]进一步的：用于对茄子紫色果皮基因进行PCR扩增。
[0007]进一步的：用于对茄子绿色果皮基因进行扩增。
[0008]进一步的：用于鉴定茄子果皮颜色基因。
[0009]进一步的：用于剔除茄子样品中不含紫色果皮基因的样品。
[0010]进一步的：用于剔除茄子样品中不含绿色果皮基因的样品。
[0011]进一步的：用于针对茄子表皮颜色的选种育种。
[0012]有益效果：本专利技术的引物对对茄子果皮颜色基因的检测结果更精准、更稳定、更可靠。
附图说明
[0013]图1为实施例1的扩增结果。注：A：sm524；B：sm518。
[0014]图2为实施例1的样本sm524的照片。
[0015]图3为实施例1的样本sm518的照片。
[0016]图4为实施例2的样本表。
[0017]图5为实施例1的扩增结果。
具体实施例
[0018]实施例1、茄子紫色果皮基因的检测试验，茄子基因组DNA的提取采用改良CTAB法；步骤1：获取紫红色外皮茄子sm524和花绿色外皮茄子sm518为试验材料，样本可从广西农业科学院蔬菜研究所获得；步骤2：对上述供试材料进行基因型检测，模板为上述供试材料的基因组DNA；步骤2.1：进行PCR扩增PCR反应体系（12μl）为：DNA工作液2μl、2xEs TaqMasterMix 5ul、正向引物和反向引物各1μl（10uM/L），用3μl ddH2O将总体积补齐至12μl；正向引物为：Wz
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1F：5
’‑ꢀ
CTTGTCAAAGACTGATTACACGATA
‑3’
；反向引物为：Wz
‑
1R：5
’‑ꢀ
CCTATCACACCTAATTGTTAAACTG
‑3’
。
[0019]PCR扩增反应程序：94℃预变性5 min；94℃变性30 s，56℃退火30s，72℃延伸30s，35个循环；72℃延伸5 min；扩增产物用8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，硝酸银染色后观察照相。并对PCR扩增产物进行测序；得到如图1所示的扩增结果；步骤2.2：对199bp的片段进行测序，其DNA序列为：CTCGTCAAAGACTGATTACACGATAATAAACCAAAAAACATAAAAAACTTTAGACCTCATACACCCAACTACTTGTGACGTGTGATTTGCAGTGGCTATTTTAGGCTGAAATTAAAAGGTTATTAAGTTAGTTTAAAAAAAAAAAAAAAAAAAACTTGAAAAGTAAGGTATGGTCAGTTTAACAATTAGGTGTGATAGG对193bp的片段进行测序，其DNA序列为：CTTGTCAAAGACTGATTACACGATAATAAACCAAAAAACATAAAAAACTTTAGACCTCATACACCCAACTACTTGTGACGTGTGATTTGCAGTGGCTATTTTAGGCTGAAATTAAAAGGTTATTAAGTTAGTTTAAAAAAAAAAAAAACTTGAAAAGTAAGGTATGGTCAGTTTAACAATTAGGTGTGATAGG实施例2、紫色果皮茄子基因的检测，1.定位群体的构建本试验以紫皮自交系sm524（表现为果皮紫色）为母本和非紫皮自交系sm518为父本（表现为果皮花绿色）为试验材料，构建F2群体。获得包含300个单株的F2群体，单株均为紫色或非紫色。茄子基因组DNA的提取采用改良CTAB法。
[0020]2.分子标记开发根据已公布的茄子基因组核苷酸序列，选择两亲本之间差异大于3bp的InDel位点首先进行引物的设计与合成，利用双亲DNA 对它们的多态性进行验证，在12号染色体上开发Indel标记。
[0021]3.分子标记Wz
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1的获得经过多态性筛选，发现分子标记Wz
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1在双亲间具有稳定的多态性，根据检测结果，判断Wz
‑
1为共显性标记，且该标记所扩增出的条带清晰，在双亲间差异明显（图1）。图1表
明：分子标记Wz
‑
1在sm524的基因组DNA扩增产物含有大小为199bp的片段，在sm518的基因组DNA扩增产物含有大小为193bp的片段。标记Wz
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1的引物核苷酸序列如下所示：Wz
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1F：5
’‑ꢀ
CTTGTCAAAGACTGATTACACGATA
‑3’
；Wz
‑
1R：5
’‑ꢀ
CCTATCACACCTAATTGTTAAACTG
‑3’
。
[0022]sm524含有的199bp片段：CTCGTCAAAGACTGATTACACGATAATAAACCAAAAAACATAAAAAACTTTAGACCTCATACACCCAACTACTTGTGACGTGTGATTTGCAGTGGCTATTTTAGGCTGAAATTAAAAGGTTAT本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.茄子果皮颜色基因扩增用的引物对，其特征在于：引物对的核苷酸序列为：正向引物为：Wz
‑
1F：5
’‑ꢀ
CTTGTCAAAGACTGATTACACGATA
‑3’
；反向引物为：Wz
‑
1R：5
’‑ꢀ
CCTATCACACCTAATTGTTAAACTG
‑3’
。2.如权利要求1所述的茄子果皮颜色基因扩增用的引物对，其特征在于：用于对茄子紫色果皮基因进行PCR扩增...

【专利技术属性】
技术研发人员：甘桂云，王鹏，王益奎，蒋雅琴，杨其洪，李文嘉，何小艳，
申请(专利权)人：广西壮族自治区农业科学院，
类型：发明
国别省市：