防治根结线虫病用粪生鞘氨醇杆菌及其应用制造技术

本申请公开了一种防治根结线虫病用粪生鞘氨醇杆菌及其应用，为CCTCC No:M20221104的粪生鞘氨醇杆菌菌株PE05。该菌株对根结线虫具有较好的防治效果，利用PE05菌株制备的菌剂对雪茄烟叶根结线虫病的防效在70％以上，具有使用成本低、无残留、对人畜安全的特点。可以作为根结线虫病生防菌微生物使用获得较好的防治效果。效果。

【技术实现步骤摘要】
防治根结线虫病用粪生鞘氨醇杆菌及其应用


[0001]本申请涉及微生物农药、微生物肥料
，特别是一种防治根结线虫病用粪生鞘氨醇杆菌及其应用。

技术介绍

[0002]植物寄生线虫是一类世界性分布的重要植物病原物，全球范围内每年造成的经济损失达1570亿美元(Abad et al.,2008)。根结线虫属(Meloidogyne)线虫是其中危害最严重的病原之一，可寄生烟草、蔬菜、粮食作物、经济作物、果树、观赏植物及杂草等2 000多种寄主(Sasser，1980)。
[0003]爪哇根结线虫(M.javanica)是危害最严重的根结线虫种类之一，也是危害雪茄烟叶根结线虫的优势种(马桂妹，等.2021)，对雪茄烟叶的种植及雪茄烟产业的发展影响极大。利用线虫生防菌开发菌剂防治根结线虫病是最环保的措施之一，利用生防微生物如Purpureocillium lilacinum、Pochonia chlamydosporia、Bacillus nematocida、Bacillus firmus、Pasteuriapenetrans、Burkholderia cepacia、Paenobacillus macerans开发的杀线剂已在很多国家登记并应用于根结线虫病防治(Priyank et al.,2019)；但现有生防微生物种类有限。
[0004]粪生鞘氨醇杆菌(Sphingobacterium faecale)是2022年新发表的细菌新物种(Chen et al.,2022)作用为产脱氨酶细菌，现有并未将该菌种用于根结线虫病防治中。
[0005]上述文献信息：Abad P，Gouzy J，Aury J，et al.Genome sequence of the metazoan plant
‑
parasitic nematode Meloidogyne incognita.Nature Biotechnology，2008，26(8):909
‑
915.
[0006]Sasser J N.Root
‑
knot nematode:a global menace to crop production.Plant Disease，1980，64:36
‑
41.
[0007]Priyank HM,Chinnannan K,Kadirvelu K,et al.,Plant growth promoting rhizobacteria(PGPR):A potential alternative tool for nematodes bio
‑
control.Biocatalysis and Agricultural Biotechnology,2019,17:119
‑
128.
[0008]Chen M,Li N,Zhang XF,et al.2022.Sphingobacterium faecalesp.nov.,a1
‑
aminocyclopropane
‑1‑
carboxylate deaminase producing bacterium isolated from camel faeces.Int.J.Syst.Evol.Microbiol.2022；72:005215.
[0009]马桂妹，谭涛，杨东，等.云南江城雪茄烟根结线虫病的病原鉴定及生物源氨气熏蒸的防治效果研究.云南大学学报(自然科学版),2022,4:1
‑
7.DOI:10.7540/j.ynu.20220171.

技术实现思路

[0010]本申请针对现有根结线虫病防治的问题提供了一种防治根结线虫病用粪生鞘氨醇杆菌及其应用，该菌株尤其适用于防治雪茄烟叶根结线虫。
[0011]本申请提供了一种防治根结线虫病用粪生鞘氨醇杆菌，为CCTCC No:M20221104的粪生鞘氨醇杆菌菌株PE05。
[0012]优选地，所述防治植株为雪茄烟烟株；优选地，雪茄烟烟株为云雪2号品种雪茄烟。
[0013]优选地，所述根结线虫病为爪哇根结线虫；优选地，菌株PE05对爪哇根结线虫J2的致死率达98％。
[0014]本申请提供菌株为从云南省普洱市江城县雪茄烟云雪2号品种的健康烟叶中分离获得，为粪生鞘氨醇杆菌PE05菌株。该菌株的保藏证编号为CCTCC No:M20221104。该菌株可以用于对防治根结线虫病，尤其适用于对烟株上感染的爪哇根结线虫，以及爪哇根结线虫J2的防治，含该菌株的菌剂防治效果与现有常用浓度10％噻唑膦颗粒剂接近，防效可达74％以上。
[0015]且该菌剂不会对环境造成污染，也不易产生耐药性，可安全长期使用，尤其适用于烟田种植面积较大区域使用。
[0016]本申请的另一方面提供了一种防治爪哇根结线虫病用发酵液，含如上述的粪生鞘氨醇杆菌PE05。可按现有微生物发酵方法采用LB培养基，制得发酵液，所得发酵液中同时含有该菌株的代谢产物，从而发挥较好的对根结线虫的防治效果。
[0017]优选地，所述发酵液的制备方法包括以下步骤：
[0018]斜面培养、种子液培养、发酵液培养后得到含该菌株的菌体及其代谢物的发酵液。
[0019]优选地，斜面培养条件：采用LB斜面培养基在32℃～37℃下培养1～2天；
[0020]种子液培养条件：采用LB液体培养基在32℃～37℃，100～150rpm条件下摇床培养2～3天，得到种子液；
[0021]发酵液培养条件：将种子液按体积比为3％
‑
5％接种LB培养基中，发酵培养条件控制在：温度32℃～36℃，搅拌速度120～160rpm，发酵时间48～72小时，得到发酵液；
[0022]优选地，发酵液培养所用发酵罐容积为500
‑
1000L。
[0023]采用上述条件培养发酵可制得含有该菌株的发酵液。
[0024]本申请的另一方面还提供了一种防治爪哇根结线虫病用生防菌剂，含如上述的粪生鞘氨醇杆菌PE05；
[0025]优选地，所述生防菌剂的制备方法包括：将如上述的发酵液，制粒，得到所述生防菌剂；
[0026]优选地，所述制粒操作为将所述发酵液与可溶性玉米淀粉混合后，经喷雾干燥制粒得到所述生防菌剂。
[0027]通过将发酵液制粒后，能制得具有生物活性的生物防治菌剂，该菌剂便于运输，使用时加水稀释即可，使用方便。具体可采用现有常用生物菌剂制备方法制粒。具体参数参照现有生物菌剂制备参数设置。更优选地，植株种子为烟草种子。该菌剂可以用于各类植物根结线虫的防治中，例如还可以为番茄种子、花生植株、黄瓜植株。
[0028]优选地，所述生防菌剂的含水量控制在5％以下；所述生防菌剂中所含粪生鞘氨醇杆菌PE05菌株的有效活菌数在10亿CFU/克以上。
[0029]优选地，所述生防菌剂的使用方本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种防治根结线虫病用粪生鞘氨醇杆菌，其特征在于，为CCTCC No:M20221104的粪生鞘氨醇杆菌菌株PE05。2.根据权利要求1所述的防治根结线虫病用粪生鞘氨醇杆菌，其特征在于，所述防治植株为雪茄烟烟株；优选地，雪茄烟烟株为云雪2号品种雪茄烟。3.根据权利要求1所述的防治根结线虫病用粪生鞘氨醇杆菌，其特征在于，所述根结线虫病为爪哇根结线虫；优选地，菌株PE05对爪哇根结线虫J2的致死率达98％。4.一种防治根结线虫病用发酵液，其特征在于，含如权利要求1～3中任一项所述的粪生鞘氨醇杆菌PE05。5.根据权利要求4所述的发酵液，其特征在于，所述发酵液的制备方法包括以下步骤：斜面培养、种子液培养、发酵液培养后得到含该菌株的菌体及其代谢物的发酵液。6.根据权利要求5所述的发酵液法，其特征在于，斜面培养条件：采用LB斜面培养基在30℃～37℃下培养1～2天；种子液培养条件：采用LB液体培养基在30℃～37℃，100～150rpm条件下摇床培养2～3天，得到种子液；发酵液培养条件：将种子液按体积比为3％
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5％接种LB培养基中，发酵培养条件控制在：温度30℃～37℃，搅拌速度120～160rpm，发酵时间48～72小时，得到发酵液...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘剑金，杨东，张艳，王学坚，周云松，刘子仪，李再明，莫明和，
申请(专利权)人：云南省烟草公司普洱市公司，
类型：发明
国别省市：