一种菌株、生物制剂及其应用和烟叶醇化方法技术

本发明专利技术公开了一种菌株、生物制剂及其应用和烟叶醇化方法，涉及烟草领域。菌株：芽孢杆菌(Bacillus sp.YYZX2)；保藏编号：CCTCC M 20221804；保藏日期2022年11月15日。生物制剂包括芽孢杆菌、酵母菌、海藻糖及陈化烟粉。烟叶醇化：烟叶原料在负压中放置保持，再恢复至常压，用菌悬液喷洒于经过负压处理的烟叶表面后发酵得到发酵烟叶1；发酵烟叶1又在负压环境下放置保持，之后又恢复至常压进行发酵后得到发酵烟叶2；发酵烟叶2经过烘烤、平衡后得到醇化烟叶。本发明专利技术芽孢杆菌抗极端条件能力更强，醇化配方及负压回潮工艺提高了烟叶醇化效率和醇化品质。醇化品质。醇化品质。

【技术实现步骤摘要】
一种菌株、生物制剂及其应用和烟叶醇化方法


[0001]本专利技术涉及烟草领域，具体涉及一种菌株、生物制剂及其应用和烟叶醇化方法。

技术介绍

[0002]香烟原料生产因区域、气候、品种及栽培技术的不同，往往形成不同的原料特色，为了满足香烟生产企业对原料的需求，烟叶醇化过程中往往施加人为因素，常通过添加酶剂、菌剂及香精香料的方式加速或改善烟叶醇化速度，改善品质。已公开的烟叶醇化菌剂涉及的菌种主要有：乳酸菌(lactic acidbacteria)、高地芽孢杆菌(Bacillus altitudinis)、酵母菌(saccharomyces)、曲霉(Aspergillus)、节杆菌(Arthrobacter)、产碱菌(Alcaligenes)、木霉(Trichoderma)、散囊菌(Eurotiales)、荧光假单胞菌(Pseudomonasfluorescens)、蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、黑曲霉(Aspergillus niger)等；已公开的烟叶醇化酶剂主要有：糖化酶、淀粉酶、纤维素酶、脂肪酶、蛋白酶、果胶酶、木质素酶、漆酶等。添加人工合成非天然香料会给人体健康带来一定危害，而天然香料的匹配性则极为苛刻，也很难满足日益增长的市场需求；故筛选和优化烟叶醇化微生物仍然是缩短醇化周期、提高醇化效率、改善醇化品质、控制醇化成本的首选。
[0003]现有技术中醇化菌剂的菌种是从烟草根际土壤、烟株内生菌及新鲜烟株营养体表面分离获得，烘烤后的叶片或烟丝并非分离菌株的适宜生境，这些菌株在实验室控制条件下具有较好的醇化效果，但因在烘烤后烟叶上的适应性较差，应用工艺操作比较苛刻，醇化效果不稳定，难以达到理想状态。
[0004]现有技术中烟叶醇化菌剂、酶剂还具有不同的载体，这或多或少也对醇化结果产生了一定的影响，其中酶剂还存在醇化产物单一且易于形成富集效应，容易出现此消彼长负面效应的概率较高，致使醇化效果不稳定、醇化工艺技术难于控制等缺陷，这也正是很多烟叶醇化制剂难以推广应用于生产实际的原因之一。菌剂、酶剂载体或额外添加的香料物质对醇化后香烟原料的特色和风格会产生不利影响。

技术实现思路

[0005]因此，本专利技术实施例提供了一种菌株、生物制剂及其应用和烟叶醇化方法，主要目的是解决烟叶醇化效率低、醇化品质有待进一步提高的技术问题。
[0006]有鉴于此，一方面，本专利技术实施例提供了一种菌株，所述菌株的分类学命名：芽孢杆菌(Bacillus sp.YYZX2)；保藏编号：CCTCC M 20221804；保藏日期2022年11月15日；保藏单位：中国典型培养物保藏中心(CCTCC)。
[0007]本专利技术提供的上述芽孢杆菌(Bacillus sp.YYZX2)能产生芽孢，抗极端条件的能力更强，当条件适宜时，菌株活化速度快、代谢生长旺盛；当有逆境条件胁迫时又会形成芽孢，使菌体处于休眠或半休眠状态，无论是在醇化过程中的条件变化，还是作为菌剂存放，都具有显著优势。
[0008]另一方面，本专利技术实施例提供了一种生物制剂，所述生物制剂包括上述菌株。
[0009]可选的，所述生物制剂包括酵母菌(Wickerhamomyces sp.)、海藻糖和/或陈化烟粉。
[0010]可选的，以重量份计，所述芽孢杆菌的重量份数为15
‑
20份，所述酵母菌的重量份数为10
‑
15份，所述海藻糖的重量份数为5
‑
10份，所述陈化烟粉的重量份数为65
‑
70份。
[0011]可选的，所述芽孢杆菌的重量份数为20份，所述酵母菌的重量份数为10份，所述海藻糖的重量份数为5份，所述陈化烟粉的重量份数为65份；
[0012]可选的，所述芽孢杆菌的活菌数为3
×
108‑5×
108cfu/g；
[0013]可选的，所述酵母菌的活菌数为2
×
108‑3×
108cfu/g；
[0014]可选的，所述海藻糖为结晶海藻糖；
[0015]可选的，所述陈化烟粉为烤烟K326制备而成。
[0016]本专利技术提供的上述生物制剂配方中的海藻糖具有独特的生物学功能，能在逆境中有效维持细胞内生物膜和蛋白质、活性肽的稳定性和完整性，被赞誉为生命之糖，具有保障配方中菌株和醇化烟叶天然附生菌活性的作用，它能够稳定大分子物质，可以在醇化烟叶矫味方面发挥一定的作用。
[0017]本专利技术提供的上述生物制剂配方中引入的陈化烟粉(K326)作为菌株载体，除了可以避免带入外源物质干扰醇化烟叶品质，更重要的是可以补充醇化过程中成熟陈化烟叶上的天然优势菌；另外，也方便了配方中菌剂的商品化和应用操作。
[0018]再一方面，本专利技术实施例提供了一种生物制剂的制备方法，所述方法包括：所述芽孢杆菌经过培养后得到发酵液1，所述发酵液1经过离心分离，收集菌体1。
[0019]可选的，所述方法还包括：所述酵母菌经过培养后得到发酵液2，所述发酵液2经过离心分离，收集菌体2；
[0020]将烘烤过的烟叶经磨碎和过筛，收集陈化烟粉；
[0021]所述菌体1、所述菌体2、所述海藻糖以及所述陈化烟粉混合后得到所述生物制剂；
[0022]可选的，所述芽孢杆菌是采用LB液体培养基，在温度36℃
‑
38℃和转速180－200r/min条件下进行摇床培养；所述发酵液1的OD
600
值为2－4时，在室温和转速4000－6000r/min条件下进行离心分离2－5min；
[0023]可选的，摇床培养的所述温度为37℃，所述转速为180r/min；所述发酵液1的OD
600
值为3时在室温和转速4000r/min条件下离心分离5min。
[0024]可选的，所述酵母菌是采用PDA液体培养基，在温度29℃
‑
31℃和转速180－200r/min条件下进行摇床培养；所述发酵液2的OD
600
值为2－4时，在室温和转速4000－6000r/min条件下进行离心分离2－3min；
[0025]可选的，所述酵母菌是在温度30℃和转速180r/min条件下摇床培养；所述发酵液2的OD
600
值为3时，在室温和转速4000r/min条件下离心分离3min。
[0026]又一方面，本专利技术实施例提供了上述菌株或上述生物制剂或上述方法制备的生物制剂在烟叶醇化中的应用。
[0027]再一方面，本专利技术实施例提供了一种烟叶醇化方法，所述醇化方法包括：
[0028]上述生物制剂或上述方法制备的生物制剂与水混合配制成菌悬液；
[0029]烟叶原料在负压环境中放置保持，得到预处理烟叶1；
[0030]所述预处理烟叶1在常压环境中，所述菌悬液喷洒于所述预处理烟叶1的烟叶表
面，经过发酵后得到发酵烟叶1；
[0031]所述发酵烟叶1在负压环境下放置本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种芽孢杆菌(Bacillus sp.YYZX2)；保藏编号：CCTCC M 20221804。2.一种生物制剂，其特征在于，所述生物制剂包括权利要求1所述的芽孢杆菌。3.如权利要求2所述的一种生物制剂，其特征在于，所述生物制剂包括酵母菌(Wickerhamomyces sp.)、海藻糖和/或陈化烟粉。4.如权利要求3所述的一种生物制剂，其特征在于，以重量份计，包括：所述芽孢杆菌的重量份数为15
‑
20份，所述酵母菌的重量份数为10
‑
15份，所述海藻糖的重量份数为5
‑
10份，所述陈化烟粉的重量份数为65
‑
70份。5.如权利要求4所述的一种生物制剂，其特征在于，所述芽孢杆菌的重量份数为20份，所述酵母菌的重量份数为10份，所述海藻糖的重量份数为5份，所述陈化烟粉的重量份数为65份；可选的，所述芽孢杆菌的活菌数为3
×
108‑5×
108cfu/g；可选的，所述酵母菌的活菌数为2
×
108‑3×
108cfu/g；可选的，所述海藻糖为结晶海藻糖；可选的，所述陈化烟粉为烤烟K326制备而成。6.权利要求3－5任一项所述的一种生物制剂的制备方法，其特征在于，所述方法包括：所述芽孢杆菌经过培养后得到发酵液1，所述发酵液1经过离心分离，收集菌体1。7.如权利要求6所述的一种生物制剂的制备方法，其特征在于，所述方法还包括：所述酵母菌经过培养后得到发酵液2，所述发酵液2经过离心分离，收集菌体2；将烘烤过的烟叶经磨碎和过筛，收集陈化烟粉；所述菌体1、所述菌体2、所述海藻糖以及所述陈化烟粉混合后得到所述生物制剂；可选的，所述芽孢杆菌是采用LB液体培养基，在温度36℃
‑
38℃和转速180－200r/min条件下进行摇床培养；所述发酵液1的OD
600
值为2－4时，在室温和转速4000－6000r/min条件下进行离心分离2－5min；可选的，所述酵母菌是采用PDA液体培养基，在温度29℃
‑
31℃和转速180－200r/min条件下进行摇床培养；所述发酵液2的OD
600
值为2－4时，在室温和转速4000－6000r/min条件下进行离心分离2－3min。8.权利要求1所述的一种芽孢杆菌或权利要求2－5任一项所述的一种生物制剂或权...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁伟，邹克兴，陈义昌，刘鸿，胡逸超，蔡联合，苏赞，黎新钦，孙会忠，王小东，
申请(专利权)人：广西中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：