一种脱氢酶突变体及利用其制备甲泼尼龙脱氢物的方法技术

本发明专利技术公开了一种脱氢酶突变体及利用其制备甲泼尼龙脱氢物的方法。所述脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；所述脱氢酶突变体为在如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列上具有选自以下一个或多个位点的氨基酸残基的差异：第315位、第330位或第452

【技术实现步骤摘要】
一种脱氢酶突变体及利用其制备甲泼尼龙脱氢物的方法


[0001]本专利技术属于生物工程领域，涉及一种脱氢酶突变体及利用其制备甲泼尼龙脱氢物的方法。

技术介绍

[0002]甲泼尼龙(如式I所示)是一种皮质激素类药物，具有较强的抗炎作用，其抗炎作用为可的松的7倍。用于危重疾病的急救，还可用于内分泌失调、风湿性疾病、胶原性病、皮肤疾病、过敏反应、眼科疾病、胃肠道疾病、血液疾病、白血病、休克、脑水肿、多发性神经炎、脊髓炎及防止癌症化疗引起的呕吐等。目前临床上主要用于脏器移植。
[0003][0004]以往的甾体C1，2脱氢化学生产是采用SeO2脱氢，但是SeO2是剧毒物质，且转化率很低。后来逐渐被生物法所代替，如利用简单节杆菌、分枝杆菌及简单诺卡氏菌等，利用细胞发酵进行C1，2位脱氢反应。如专利《6
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α甲基泼尼松龙中间体的生物脱氢制备方法》(参见CN101760495A)，《一种甲基泼尼松龙脱氢物的生产方法》(参见CN112608970A)等采用细胞发酵的方法生产甲泼尼龙脱氢物。但是细胞发酵周期较长，发酵时间一般在2～3天左右本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种脱氢酶突变体，其特征在于，所述脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；所述脱氢酶突变体为在如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列上具有选自以下一个或多个位点的氨基酸残基的差异：第315位、第330位或第452
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463位。2.如权利要求1所述的脱氢酶突变体，其特征在于，所述脱氢酶突变体在如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列上具有选自以下一个或多个位点的氨基酸残基的差异：所述第315位的氨基酸残基由F突变为A、G、V或S，所述第330位的氨基酸序列残基由L突变为A、G、V或S，和/或删去所述第452位
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第463位的氨基酸残基。3.如权利要求1所述的脱氢酶突变体，其特征在于，所述脱氢酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：5所示，优选为SEQ ID NO：5。4.一种分离的核酸，其中所述核酸编码如权利要求1
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3中任一项所述的脱氢酶突变体。5.一种重组表达载体，其中所述重组表达载体包含如权利要求4所述的核酸；优选地，所述重组表达载体的骨架质粒为pET26b(+)或pET28a(+)。6.一种转化体，其中所述转化体包含如权利要求5所述的重组表达载体；优选地，所述转化体的底盘菌为大肠杆菌，例如大肠杆菌BL21(DE3)。7.一种制备如权利要求1
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3中任一项所述的脱氢酶突变体的方法，其特征在于，所述方法包括将所述转化体在适合的培养基中生长，以产生所述脱氢酶突变体；优选地，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘明欣，何鑫，汪声晨，陈海林，杨艳青，
申请(专利权)人：湖北葛店人福药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：