一株热带盐孢菌、其应用与发酵方法技术

一株热带盐孢菌、其应用与发酵方法。本发明专利技术提供了一株热带盐孢菌(Salinispora tropica)MID2004，于2021年06月07日，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC No：M 2021690。用此菌株发酵制备马瑞佐咪，经过摇瓶和罐上试验，发酵效价高且副产物少，降低后提取难度，适合工业化生产。适合工业化生产。

【技术实现步骤摘要】
一株热带盐孢菌、其应用与发酵方法


[0001]本专利技术涉及微生物
，具体涉及一株热带盐孢菌、其应用与发酵方法。

技术介绍

[0002]马瑞佐咪(Salinosporamide A，NPI
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0052，Marizomib)是一种新型的海生蛋白酶体抑制剂，具有γ
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内酰胺
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β
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内酯双环核心(结构式如下所示)，负责与20S蛋白酶β亚基发生不可逆结合，且对三个活性位点都有抑制作用，对于多种肿瘤细胞模型表现出很强的细胞毒性，是良好的候选药物。BMS(Celgene)公司已经用其开展系列临床研究，如处于临床三期的胶质母细胞瘤(Glioblastoma)研究，处于临床二期的多发性骨髓瘤(Multiple myeloma)、室管膜瘤(Ependymoma)研究，以及多项处于临床一期的研究，同时前两项适应症已获批孤儿药资格。
[0003][0004]Salinosporamide A于2003年被报道，特异性地存在于热带盐孢菌(Salinispora tropica) 中，天然产量仅几mg/L。一般的马瑞佐咪产生菌，生产能力不稳定，产量较低，杂质较多，导致后提取的工艺较为复杂，大大增加了后提取的难度，难以获得高纯度的最终产物，不适宜于工业化大生产。也有报道通过纯化学合成的方法制备马瑞佐咪，但现有的全合成路线均不能很好的适用于药物的大量制备，不仅耗时长、成本高，且使用的试剂毒性较大，安全操作范围较小，水中溶解度和稳定性较差，无法实现工业化大生产。
[0005]现有技术中，会在培养基中添加吸附树脂，用来吸附发酵得到的特定物质，这些吸附树脂不会影响菌体本身的发酵能力。如在文献《Stabilization effect of resin on the production ofpotent proteasome inhibitor NPI
‑
0052during submerged fermentation of Salinispora tropica》中， Ginger Tsueng、Kin S Lam等公开了加入XAD
‑
7树脂后，将热带盐孢菌发酵生产马瑞佐咪的效价从原先的5.7mg/L提高到278mg/L。

技术实现思路

[0006]为了进一步提高发酵的效价，本专利技术提供了一株热带盐孢菌(Salinispora tropica)MID2004，于2021年06月07日，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏单位地址为中国武汉武汉大学，保藏编号为：CCTCC NO：M 2021690。
[0007]本专利技术另外提供了一种所述热带盐孢菌MID2004的用途，用于生产马瑞佐咪；
[0008]或者，用于制备含马瑞佐咪的药品、保健品、食品、饮料、添加剂、饲料中的一个或多个。优选制备含马瑞佐咪的药品、保健品、添加剂中的一个或多个，更优选制备含马瑞佐咪的药品。
[0009]本专利技术另外提供了一种含有所述热带盐孢菌MID2004的发酵液。
[0010]本专利技术另外提供了一种所述发酵液的用途，用于生产马瑞佐咪；
[0011]或者，用于制备含马瑞佐咪的药品、保健品、食品、饮料、添加剂、饲料中的一个或多个。优选制备含马瑞佐咪的药品、保健品、添加剂中的一个或多个，更优选制备含马瑞佐咪的药品。
[0012]本专利技术另外提供了一种用所述热带盐孢菌MID2004生产马瑞佐咪的发酵方法。
[0013]优选地，包括在含有可同化的碳源和/或氮源的发酵培养基里，进行发酵。
[0014]优选地，所述碳源选自可溶性淀粉、玉米淀粉、土豆淀粉、麦芽糊精、蔗糖、麦芽糖、甘露醇、山梨醇、葡萄糖、甘油中的一种或多种；优选地选自可溶性淀粉、玉米淀粉、土豆淀粉、麦芽糊精、蔗糖、甘露醇、山梨醇中的一种或多种；更优选地选自可溶性淀粉、玉米淀粉、土豆淀粉、麦芽糊精中的一种或多种。
[0015]优选地，所述氮源选自黄豆粉、大豆蛋白粉、大豆蛋白胨、酵母浸出粉、麦芽浸出粉、玉米浆粉、酵母粉中的一种或多种；优选地选自大豆蛋白粉、大豆蛋白胨、酵母浸出粉、玉米浆粉、酵母粉中的一种或多种；更优选地选自大豆蛋白粉、大豆蛋白胨中的一种或多种。
[0016]优选地，所述发酵培养基还包括无机盐，所述无机盐选自柠檬酸三钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸钾、碳酸钙、硫酸亚铁、硫酸亚铁水合物、硫酸亚铁铵、硫酸亚铁铵水合物、硫酸铁、硫酸铁水合物、硫酸锌、硫酸铜、硫酸铜水合物、硫酸镁、硫酸锰、硫酸钾、硫酸铵、氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化铝、氯化铁、溴化钾、氯化铜、氯化锌、乙酸钠中的一种或多种；优选地选自碳酸钙、硫酸铁、硫酸铁水合物、溴化钾、氯化钙、硫酸铜、磷酸二氢钾、硫酸镁、氯化钾、乙酸钠中的一种或多种；优选地选自碳酸钙、硫酸铁、硫酸铁水合物、溴化钾、氯化钙、硫酸铜、乙酸钠中的一种或多种。
[0017]优选地，发酵培养基里还包括吸附树脂。
[0018]优选地，所述吸附树脂为适合吸附马瑞佐咪的吸附树脂；优选地选自：LX30、XAD7HP 中的一种或多种。
[0019]优选地，培养温度为26～30℃。
[0020]优选地，种子培养3～4天。
[0021]优选地，发酵培养5～7天。
[0022]优选地，摇瓶种子、种子罐培养基各组分在培养基中的比例为：每100mL培养基中，碳源1.5～4.5g，氮源3～6.5g，无机盐0～0.3g，海水晶2～4g，其余为水。
[0023]优选地，摇瓶种子、种子罐培养基各组分在培养基中的比例为：每100mL培养基中，碳源2.5～3.5g，氮源4～5.5g，无机盐0.1～0.2g，海水晶2.5～3.5g，其余为水。
[0024]优选地，发酵罐培养基各组分在培养基中的比例为：每100mL培养基中，碳源3～7g，氮源2～4g，无机盐0.05～0.5g，海水晶2～4g，树脂2～4g，其余为水。
[0025]优选地，发酵罐培养基各组分在培养基中的比例为：每100mL培养基中，碳源4～6g，氮源2.5～3.5g，无机盐0.1～0.3g，海水晶2.5～3.5g，树脂2.5～3.5g，其余为水；
[0026]有益效果：
[0027]1.本专利技术提供的菌株可获得发酵效价高的马瑞佐咪，同时发酵副产物相对较少，从而降低了后提取的难度；
[0028]2.本专利技术提供的菌株生产能力稳定，适合工业化生产。
附图说明
[0029]图1为保藏编号为CCTCC No：M 2021690的菌落形态；
[0030]图2为保藏编号为CCTCC No：M 2021690的菌丝形态；
[0031]图3为本专利技术实施例3发酵液HPLC图；
[0032]图4为本专利技术实施例4发酵液HPLC图。
具体实施方式
[0033]下述实施例中所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0034]下述实施例中采用的材料、试剂等如无特殊说本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株热带盐孢菌(Salinispora tropica)MID2004，于2021年06月07日，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC No：M 2021690。2.一种如权利要求1所述热带盐孢菌MID2004的用途，其特征在于：用于生产马瑞佐咪；或者，用于制备含马瑞佐咪的药品、保健品、食品、饮料、添加剂、饲料中的一个或多个。3.一种含有如权利要求1所述热带盐孢菌MID2004的发酵液。4.一种如权利要求3所述发酵液的用途，其特征在于：用于生产马瑞佐咪；或者，用于制备含马瑞佐咪的药品、保健品、食品、饮料、添加剂、饲料中的一个或多个。5.一种用如权利要求1所述热带盐孢菌MID2004生产马瑞佐咪的发酵方法。6.如权利要求5所述的发酵方法，其特征在于：包括在含有可同化的碳源和/或氮源的发酵培养基里，进行发酵。7.如权利要求6所述的发酵方法，其特征在于：所述碳源选自可溶性淀粉、玉米淀粉、土豆淀粉、麦芽糊精、蔗糖、麦芽糖、甘露醇、山梨醇、葡萄糖、甘油中的一种或多种；优选地选自可溶性淀粉、玉米淀粉、土豆淀粉、麦芽糊精、蔗糖、甘露醇、山梨醇中的一种或多种；更优选地选自可溶性淀粉、玉米淀粉、土豆淀粉、麦芽糊精中的一种或多种。8.如权利要求6所述的发酵方法，其特征在于：所述氮源选自黄豆粉、大豆蛋白粉、大豆蛋白胨、酵母浸出粉、麦芽浸出粉、玉米浆粉、酵母粉中的一种或多种；优选地选自大豆蛋白粉、大豆蛋白胨、酵母浸出粉、玉米浆粉、酵母粉中的一种或多种；更优选地选自大豆蛋白粉、...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯国栋，张薇，匡春兰，方丽纳，吴芳燕，王蓓，范萍，吴骏，吴晓倩，郑子瑞，
申请(专利权)人：杭州中美华东制药有限公司，
类型：发明
国别省市：