同步除油脱氮菌及筛选，应用，菌剂的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种同步除油脱氮菌及筛选，应用，菌剂的制备方法，菌种为同步除油脱氮菌CYCN

【技术实现步骤摘要】
同步除油脱氮菌及筛选，应用，菌剂的制备方法


[0001]本专利技术涉及一株新的菌种——同步除油脱氮菌CYCN
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1(Pseudomonas koreensis CYCN
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1)，及利用该菌株提高在餐厨油脂多的水环境治理中的油脂降解能力和脱氮能力。

技术介绍

[0002]近年来，随着经济的快速发展和人民生活水平的提高，餐饮废水呈递增趋势，给我们的生活造成很大的困扰，严重污染了生活环境和影响了人类的身心健康。餐饮含油废水是一种高浓度的有机废水，成分非常复杂，其中包含多种多样的动植物油，浊度大、盐分高、COD和氨氮浓度大，并且油脂易结块，容易导致管道淤塞和生化池堵塞，给含油污水的治理带来困难。为了解决这个问题，运用了很多方法对这种状况进行处理，其中物理化学方法虽然处理效果较好，但会产生二次污染，并且运维成本较高，相比之下，生物法不会对环境产生二次污染而受到了广泛的关注。
[0003]目前，针对生活污水中的油脂微生物降解报道了大量研究，主要是聚焦在从环境中筛选分离对油脂有较高降解效率的微生物菌株和脂肪酶。尽管分离鉴定的油脂高效降解微生物已报道了很多，但大多数是在实验室条件下对菌株的油脂降解性能进行表征，没有对其同一菌株的脱氮性能进行验证。根据生物脱氮的机理，充足的碳源是保证污水处理过程中总氮达标的必要条件。餐饮废弃油脂在微生物的作用下分解成甘油和脂肪酸，最后分解成二氧化碳、水，安全无毒且不产生二次污染，故能作为微生物正常生长所需的碳源。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是为了克服现有技术中微生物法处理餐饮含油废水的不足，提供了一种新的菌种——同步除油脱氮菌CYCN
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1(Pseudomonas koreensis CYCN
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1)，及利用该菌株提高污水处理中油脂降解效率以及脱氮效率的方法。
[0005]为实现本专利技术的上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0006]本专利技术首先提供了一种同步除油脱氮菌，菌种为同步除油脱氮菌CYCN
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1(Pseudomonas koreensis CYCN
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1)，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉大学，保藏编号：CCTCC NO:M 20221776；保藏日期：2022年11月14日。
[0007]作为本专利技术的一种优选方案，所述同步除油脱氮菌的菌落形态30℃在LB平板培养12h，菌落呈光滑圆形，直径2～3mm，饱满隆起，不透明，菌落呈淡黄色，边缘整齐，光滑湿润有光泽，粘稠易挑起，菌落随时间的延长而增大，数天后直径≥5mm。
[0008]作为本专利技术的一种优选方案，所述同步除油脱氮菌的细胞形态为24h培养物的细胞具有圆端的直杆，直径0.5
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1.2μm；单个，成对或短链，无芽孢，无动力；生理生化特征为革兰氏阴性，兼氧好氧，化能异养，可降解脂肪酶底物，在大豆油以及短链油脂类底物培养基上形成透明圈，利用细菌16S rDNA序列测序的方法对其进行种属鉴定，序列为如EQ NO:1所示。
[0009]本专利技术还提供了上述的同步除油脱氮菌在油脂降解中的应用。
[0010]本专利技术还提供了上述的同步除油脱氮菌在脱氮处理中的应用。
[0011]本专利技术还提供了上述的同步除油脱氮菌在农家乐含油生活污水处理中的应用。
[0012]本专利技术还提供了上述的同步除油脱氮菌的的筛选方法，所述筛选方法包括以下步骤：
[0013]a)富集培养：获得油脂块，以油脂块为碳源，在驯化培养基中进行富集培养，规定振荡培养时间，为第一期培养；将第二个驯化周期中的培养菌液移至第二期的驯化培养基中，规定振荡培养时间，为第二期培养，进行多次驯化；
[0014]b)分离纯化：将驯化富集好的菌液，按梯度稀释法分别将样品稀释成不同梯度菌悬液，在LB固体平板培养基上进行划线培养，获得单菌落；
[0015]c)除油性能初筛：用接种环挑选单菌落点接到筛选用的脂肪酶平板培养基中，放入恒温培养箱中培养2d，选取产生明显透明圈的菌株接入液体培养基中，放入振荡器中培养；
[0016]d)脱氮性能初筛：在接种环挑选单菌落点接到脂肪酶平板上的同时，也将单菌落挑至96孔板中进行培养，培养规定周期后，从96孔板中各取菌液至NH
4+
与NO2‑
验证板中，加入氨氮，亚硝酸盐显色剂，观察颜色变化；
[0017]e)选取产生较大透明圈，同时在96孔板中显色明显的菌株，在以大豆油为碳源，以氯化铵为唯一氮源的培养基中进行培养，定时取样检测培养基中的氨氮、总氮和动植物油浓度；选取油脂降解率和脱氮效率最高的一株；
[0018]f)复筛：选取产生较大透明圈，同时在96孔板中显色明显的菌株，在以大豆油为碳源，以氯化铵为唯一氮源的培养基中进行培养，定时取样检测培养基中的氨氮、总氮和动植物油浓度；选取油脂降解率和脱氮效率最高的一株，命名为CYCN
‑
1。
[0019]本专利技术还提供了上述的同步除油脱氮菌菌剂的制备方法，将同步除油脱氮菌Pseudomonas koreensis CYCN
‑
1接入液体LB培养基，摇床震荡培养；再将种子菌液倒入发酵罐中进行扩大培养；将培养好的菌液和培养基混合后，密封冷藏。
[0020]作为本专利技术的一种优选方案，所述发酵罐扩大培养时的培养基按照以下比例配置：20L蒸馏水、胰蛋白胨200g、酵母粉100g、氯化钠200g、大豆油40g，pH控制在7.0
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7.2，121℃湿热灭菌30min。
[0021]本专利技术还提供了上述的制备方法得到的菌剂的应用，取村落景区农家乐分散式污水站进水污水处理站的进水，将氨氮与总氮浓度均控制到50mg/L
‑
60mg/L，油含量2g/L；将权利要求88所述的制备方法得到的同步除油脱氮菌剂按1％的量接入调配后的含油污水中。
[0022]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0023]本专利技术的同步除油脱氮菌能够产生脂肪酶的脱氮菌，可以再污水处理设备的好氧池迅速繁殖，成为优势菌，持续分泌脂肪酶，降解动植物油脂，提供脱氮必要的碳源，从而提高污水处理的除油脱氮能力。
附图说明
[0024]图1为实施例1中菌株同步除油脱氮菌Pseudomonas koreensis CYCN
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1脂肪酶验证培养基上产生的透明圈示意图。
[0025]图2为实施例3中菌株同步除油脱氮菌Pseudomonas koreensis CYCN
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1的生长曲线图；
[0026]图3为实施例5菌株同步除油脱氮菌Pseudomonas koreensis CYCN
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1在以大豆油为唯一碳源时油脂降解效果图；
[0027]图4为实施例5菌株同步除油脱氮菌Pseudomonas koreensis CYCN
‑
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种同步除油脱氮菌，其特征在于，菌种为同步除油脱氮菌CYCN
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1(Pseudomonas koreensis CYCN
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1)，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉大学，保藏编号：CCTCCNO:M 20221776；保藏日期：2022年11月14日。2.根据权利要求1所述的一种同步除油脱氮菌，其特征在于，所述同步除油脱氮菌的菌落形态30℃在LB平板培养12h，菌落呈光滑圆形，直径2～3mm，饱满隆起，不透明，菌落呈淡黄色，边缘整齐，光滑湿润有光泽，粘稠易挑起，菌落随时间的延长而增大，数天后直径≥5mm。3.根据权利要求1所述的一种同步除油脱氮菌，其特征在于，所述同步除油脱氮菌的细胞形态为24h培养物的细胞具有圆端的直杆，直径0.5
‑
1.2μm；单个，成对或短链，无芽孢，无动力；生理生化特征为革兰氏阴性，兼氧好氧，化能异养，可降解脂肪酶底物，在大豆油以及短链油脂类底物培养基上形成透明圈，利用细菌16S rDNA序列测序的方法对其进行种属鉴定，序列为如EQ NO:1所示。4.一种如权利要求1所述的同步除油脱氮菌在油脂降解中的应用。5.一种如权利要求1所述的同步除油脱氮菌在脱氮处理中的应用。6.一种如权利要求1所述的同步除油脱氮菌在农家乐含油生活污水处理中的应用。7.一种如权利要求1所述的同步除油脱氮菌的筛选方法，其特征在于，所述筛选方法包括以下步骤：a)富集培养：获得油脂块，以油脂块为碳源，在驯化培养基中进行富集培养，规定振荡培养时间，为第一期培养；将第二个驯化周期中的培养菌液移至第二期的驯化培养基中，规定振荡培养时间，为第二期培养，进行多次驯化；b)分离纯化：将驯化富集好的菌液，按梯度稀释法分别将样品稀释成不同梯度菌悬液，在LB固体平板培养基上进行划线培养，获得单菌落；c)除油性能初筛：用接种环挑选单菌落点接到筛选用的脂肪酶平板培养基...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑展望，李依依，徐涛，金鹏，赵若瑾，覃文攀，徐伟平，
申请(专利权)人：浙江商达公用环保有限公司，
类型：发明
国别省市：