肺炎链球菌无动物源冻干保护剂制造技术

本发明专利技术公开了一种肺炎链球菌无动物源冻干保护剂，属于微生物保存领域。所述冻干保护剂由如下成分组成：1％～5％重量/体积的大豆胨，1％～5％重量/体积的海藻糖，4％～8％重量/体积的甘露醇和0.3％～1.5％体积/体积的甘油，余量为水。该冻干保护剂可较好维持肺炎链球菌活性，效果与脱脂牛奶保护剂或市售无动物源冻干保护剂相当，但不含动物源成分且成本低。低。低。

【技术实现步骤摘要】
肺炎链球菌无动物源冻干保护剂
[0001]本申请是对申请号为202110776003.4，申请日为2021年07月08日的专利技术专利申请提出的分案申请。


[0002]本专利技术属于微生物保存领域，具体涉及肺炎链球菌无动物源冻干保护剂。

技术介绍

[0003]冷冻干燥就是将含水的物质预先降温冻结成固体，然后在低温减压条件下利用水的升华性能，使物质低温脱水而达到干燥目的的一种干燥方法。冷冻干燥能较大程度保留菌的活性，活菌制品在储运前通常需要进行冷冻干燥处理。但是，冷冻干燥过程产生多种应力会造成部分微生物细胞一定的损伤，甚至死亡，需要加入冻干保护剂来尽可能维持微生物的活性。
[0004]冻干保护剂主要可分为复合物、糖类、无机盐类、醇类、氨基酸类、聚合物、表面活性剂和抗氧化剂等几种类别，每种类别下又包含多种具体物质，例如，前述复合物包括脱脂乳、血清、蛋白胨、明胶、多肽、糊精、甲基化纤维素等等，糖类包括蔗糖、乳糖、麦芽糖、海藻糖等等(张光磊，活菌制剂冻干保护剂的研究进展，微生物学免疫学进展，2015年8月第43卷第4期)。
[0005]肺炎链球菌是一种革兰阳性菌，可引起肺炎、脑膜炎和菌血症等多种疾病。肺炎链球菌的保存关系着肺炎链球菌疫苗的原料品质，因此，肺炎链球菌在相关疫苗生产中十分重要。
[0006]公布号为CN 111849781 A的专利申请文件公开了一种肺炎链球菌冻干保护剂，其包括浓度10％wt脱脂奶粉、5％wt蔗糖、2％wt甘油、1％wt山梨醇、0.5％wt谷氨酸钠、5％海藻糖、0.1％wt维生素C、1％wt甘露醇以及1.5％脱纤维羊血，能使菌体冻干后的存活率为84％。但是，该保护剂含有较大比例的动物源成分，即脱脂奶粉和脱纤维羊血，其缺点是：一方面成本较高；另一方面容易混入动物源的病原体或致敏原，给疫苗产品带来了安全隐患。

技术实现思路

[0007]本专利技术要解决的问题是：提供一种肺炎链球菌无动物源冻干保护剂。
[0008]本专利技术的技术方案如下：
[0009]一种肺炎链球菌无动物源冻干保护剂，由如下成分组成：
[0010]1％～5％重量/体积的大豆胨，1％～5％重量/体积的海藻糖，4％～8％重量/体积的甘露醇和0.3％～1.5％体积/体积的甘油，余量为水。
[0011]进一步的，所述保护剂由如下成分组成：
[0012]1％～4％重量/体积的大豆胨，1％～4％重量/体积的海藻糖，6％～7％重量/体积的甘露醇和0.6％～1.2％体积/体积的甘油，余量为水。
[0013]进一步的，所述保护剂由如下成分组成：
[0014]1.5％～2.5％重量/体积的大豆胨，1.5％～2.5％重量/体积的海藻糖，6％～7％重量/体积的甘露醇和0.6％～0.7％体积/体积的甘油，余量为水。
[0015]进一步的，所述保护剂由如下成分组成：
[0016]2％重量/体积的大豆胨，2％重量/体积的海藻糖，6％重量/体积的甘露醇和0.6％体积/体积的甘油，余量为水。
[0017]一种肺炎链球菌冻干方法，该方法是将前述冻干保护剂与肺炎链球菌的菌体沉淀混合后，制备成菌悬液，进行冻干。
[0018]进一步的，所述肺炎链球菌的血清型为血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F或23F。
[0019]一种肺炎链球菌冻干粉，所述冻干粉是将前述冻干保护剂与肺炎链球菌的菌体沉淀混合后，制备成菌悬液，进行冻干得到的产物。
[0020]如前述的冻干粉，所述肺炎链球菌的血清型为血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F或23F。
[0021]一种肺炎链球菌疫苗，所述疫苗使用上述的冻干粉，经过发酵纯化及必要化学处理，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成。
[0022]前述的冻干保护剂或前述的冻干粉在制备肺炎链球菌疫苗中的用途。
[0023]本专利技术的有益效果：
[0024]1.本专利技术的无动物源冻干保护剂中各组分相互配合，可在冻干过程中有效保护肺炎链球菌活性，效果与市售产品相当，但成本不到市售产品的1/10。
[0025]2.本专利技术的无动物源冻干保护剂在保护肺炎链球菌冻干后，可帮助维持菌体活性，在2～8℃存放1年活性几乎不会降低；在25℃存放32周的活性降低速度缓慢。而组分相近的保护剂(将大豆胨替换成谷氨酸钠)则很难长时间维持肺炎链球菌的活性，肺炎链球菌难以在25
±
2℃下稳定存活超过2周。
[0026]显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0027]以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。
附图说明
[0028]图1：脱脂牛奶、市售无动物源冻干保护剂(市售)和实施例1冻干保护剂(自制配方)保护下的肺炎链球菌血清型7F型的冻干后存活率。
[0029]图2：实施例1冻干保护剂和脱脂牛奶保护剂分别冻干肺炎链球菌血清型18C型后的冻干菌种加速稳定性(25
±
2℃)。
[0030]图3：13个血清型的肺炎链球菌冻干菌种的32周加速稳定性(25
±
2℃)。
[0031]图4：实施例1冻干保护剂参与保护的13个血清型的肺炎链球菌冻干后的实时稳定性(2～8℃)检测。
[0032]图5：肺炎链球菌冻干菌种外观。
[0033]图6：单一成分的冻干保护剂对肺炎链球菌血清型7F型冻干存活率的影响。
[0034]图7：几种组合冻干保护剂对肺炎链球菌血清型9V型冻干存活率的影响。图中仅显示外观合格的冻干保护剂以及脱脂牛奶。
[0035]图8：脱脂牛奶和海藻糖+甘露醇+甘油+谷氨酸钠的组合冻干肺炎链球菌血清型4型的冻干存活率。
[0036]图9：脱脂牛奶、海藻糖+甘露醇+甘油+谷氨酸钠(对比例3)和海藻糖+甘露醇+甘油+大豆胨(实施例1)分别冻干肺炎链球菌血清型18C型后，冻干菌种的活菌数在25
±
2℃条件下的变化。
具体实施方式
[0037]本部分所使用的肺炎链球菌菌种包括13种血清型，分别如表1所示。
[0038]表1菌种血清型
[0039]血清型CMCC(中国医学细菌保藏管理中心)菌号1314013314364314465314566A314766B314897F315079V31546143160118C3168719A3170419F3169223F31759
[0040]本部分使用的13种血清型肺炎链球菌菌种全部购买自中国医学细菌保藏管理中心(CMCC)。
[0041]其中，上述涉及菌号为31446的肺炎链球菌，在文献本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种肺炎链球菌无动物源冻干保护剂，其特征在于：由如下成分组成：1％～5％重量/体积的大豆胨，1％～5％重量/体积的海藻糖，4％～8％重量/体积的甘露醇和0.3％～1.5％体积/体积的甘油，余量为水。2.如权利要求1所述的冻干保护剂，其特征在于：由如下成分组成：1％～4％重量/体积的大豆胨，1％～4％重量/体积的海藻糖，6％～7％重量/体积的甘露醇和0.6％～1.2％体积/体积的甘油，余量为水。3.如权利要求2所述的冻干保护剂，其特征在于：由如下成分组成：1.5％～2.5％重量/体积的大豆胨，1.5％～2.5％重量/体积的海藻糖，6％～7％重量/体积的甘露醇和0.6％～0.7％体积/体积的甘油，余量为水。4.如权利要求2所述的冻干保护剂，其特征在于：由如下成分组成：2％重量/体积的大豆胨，2％重量/体积的海藻糖，6％重量/体积的甘露醇和0.6％体积/体积的甘油，余量为水。5.一种肺炎链球菌冻干方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：廖淡宜，赵静，唐利，程可欣，王博，
申请(专利权)人：成都生物制品研究所有限责任公司，
类型：发明
国别省市：