与脂肪酸缀合的寡核苷酸制造技术

提供了脂质缀合的寡核苷酸，其允许将这些寡核苷酸递送至体内的特定组织。经缀合的寡核苷酸上的脂质包含具有游离末端羧酸基团的酰基基团。还提供了用于合成具有有脂质的脂质缀合的寡核苷酸的方法，该脂质包含具有游离末端羧酸基团的酰基基团，以及用于递送这些脂质缀合的寡核苷酸的方法和使用这些脂质缀合的寡核苷酸治疗疾病的方法。核苷酸治疗疾病的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】与脂肪酸缀合的寡核苷酸

技术实现思路

[0001]本披露涉及与具有末端羧基基团的酰基链缀合的寡核苷酸。在一些实施例中，本披露提供了制备与具有末端羧基基团的酰基链缀合的寡核苷酸的方法。
[0002]基于寡核苷酸的疗法
‑
比如反义疗法、基因疗法和CRISPR基因编辑疗法
‑
被认为有望用于治疗各种病症。然而，对于基于寡核苷酸的疗法，将寡核苷酸递送至体内的特定组织一直是一种挑战。
[0003]一种用于将寡核苷酸递送至特定组织的策略是递送封装至脂质纳米颗粒或聚合物纳米颗粒中的寡核苷酸。因为寡核苷酸除非经过特定修饰，否则具有聚阴离子主链，使用阳离子脂质或聚合物以形成纳米颗粒。阴离子寡核苷酸与阳离子脂质或聚合物之间的静电相互作用会导致纳米颗粒形成。
[0004]虽然已经开发出各种脂质纳米颗粒，但几乎所有这些纳米颗粒在治疗中的使用都受到限制。一个限制是必须被递送以支持寡核苷酸的施用的载体(即脂质)材料的量。例如，针对封装在脂质纳米颗粒中的小干扰RNA(siRNA)，siRNA仅占可递送物的总质量的百分之几，其中剩余质量是脂质。Juliano，Nucleic Acids Research[核酸研究]2016，44(14)：6518
‑
6548。大量阳离子脂质的递送可能存在问题，因为许多生物大分子是阴离子的，并且因此与阳离子脂质静电缔合，从而导致毒性问题。
[0005]此外，脂质纳米颗粒通常仅在具有有孔(例如，多孔)内皮的组织中积累：肝脏、脾脏和一些肿瘤组织。Osborn等人，Nucleic Acid Therapeutics[核酸治疗学]2018，28(3)：128
‑
136。这使得脂质纳米颗粒的使用对于其中需要将寡核苷酸递送至其他组织的疗法来说并不切实际。
[0006]正在开发脂质缀合的寡核苷酸，以改善寡核苷酸的递送。由于寡核苷酸化学连接至脂质，因此不需要两者之间的静电相互作用，并且不需要具有潜在毒性的阳离子脂质。此外，由于单个寡核苷酸分子通常仅与一条或两条脂质链缀合，因此脂质载体材料的量大大减少。因此，应减少脂质缀合的寡核苷酸的副作用。
[0007]由于用于缀合的脂质不必适用于脂质纳米颗粒的形成，因此可以使用更多种类的脂质。通过改变脂质缀合的寡核苷酸的脂质部分，有可能靶向更广泛的组织以用于摄取缀合物。
[0008]本披露涉及酸酰基缀合的寡核苷酸，这些寡核苷酸包含：
[0009]a)羧基酰基基团；
[0010]b)寡核苷酸；以及
[0011]c)接头，该接头将该羧基酰基基团连接至该寡核苷酸。
[0012]在一些实施例中，羧基酰基基团是C4至C
32
并且可以是饱和的，例如单不饱和的，或者不饱和的，例如多不饱和的。
[0013]在一些实施例中，酸酰基缀合的寡核苷酸包含接头，该接头与寡核苷酸的5
′
末端结合。在一些实施例中，酸酰基缀合的寡核苷酸包含接头，该接头包含连接至羧基酰基基团的氨基末端。在一些实施例中，酸酰基缀合的寡核苷酸包含接头，该接头包含连接至寡核苷
酸的磷酸酯末端。
[0014]在一些实施例中，酸酰基缀合的寡核苷酸包含DNA寡核苷酸。在一些实施例中，酸酰基缀合的寡核苷酸包含RNA寡核苷酸。在一些实施例中，酸酰基缀合的寡核苷酸包含反义寡核苷酸。在一些实施例中，寡核苷酸是硫代磷酸酯寡核苷酸。
[0015]根据本披露，本披露的酸酰基缀合的寡核苷酸可以选自式(I)的化合物：
[0016][0017]其中：
[0018]X是C4至C
32
烷基或烯基；
[0019]A是缀合基团；
[0020]L是接头；并且
[0021]Y是寡核苷酸。
[0022]本文还披露了式(Ia)的酸酰基缀合的寡核苷酸：
[0023][0024]其中：
[0025]X是C
10
至C
26
烷基；
[0026]L是接头
‑
NH
‑
C6H
12
‑
O
‑
PO2‑
；并且
[0027]Y是DNA，
[0028]其中该接头经由DNA的5
′
末端处的磷酸酯键联来附接至该DNA。
[0029]本披露进一步包括用于改善所比较的心肌细胞表达的减少的方法，这些方法包括向哺乳动物施用本文所披露的酸酰基缀合的寡核苷酸，其中酸酰基缀合的寡核苷酸与非酰基缀合的寡核苷酸相比改善了心肌细胞表达的减少。
[0030]还披露了减少哺乳动物的心肌细胞中目的基因的表达的方法，这些方法包括向哺乳动物施用本文所披露的酸酰基缀合的寡核苷酸，其中酸酰基缀合的寡核苷酸与非酰基缀合的寡核苷酸相比减少了心肌细胞中目的基因的表达
[0031]本文进一步披露了制备式(Ia)的酸酰基寡核苷酸的方法，该方法包括：
[0032]A)提供式(II)的脂肪二酸
[0033][0034]B)使该脂肪二酸与活化基团A反应，以形成式(III)的酸酰基化合物：
[0035][0036]其中A*是附接至脂肪酰基化合物的活化基团；
[0037]C)使式(III)的化合物与式(IV)的化合物反应：
[0038]＊L
‑
Y (IV)，
[0039]其中*L是具有反应性基团的接头；
[0040]以形成式(Ia)的化合物：
[0041][0042]本披露进一步提供了将寡核苷酸递送至受试者中的心脏组织的方法，这些方法包括：
[0043]a)提供根据本披露的酸酰基缀合的寡核苷酸，以及
[0044]b)向该受试者施用该酸酰基缀合的寡核苷酸。
[0045]在以下描述中，阐述了某些细节以便提供对各种实施例的透彻理解。然而，本领域技术人员将理解，可以在没有这些细节的情况下实践所披露的实施例。通过参考以下详细描述和附图，这些和其他实施例将变得显而易见。
附图说明
[0046]图1显示通过表面等离子共振(SPR)测量的来自人血清白蛋白(HSA)和大鼠血清白蛋白(RSA)的5
′
脂质缀合的Malat
‑
1ASO的解离常数，如实例25中所例示。
[0047]图2显示在用FA
‑
ASO缀合物处理后，人THP
‑
1单核细胞中Malat
‑
1基因表达的浓度依赖性敲低，如实例26中所例示。
[0048]图3A至图3D显示实例27的结果，即实例12(图3A)、实例13(图3B)、实例14(图3C)和实例15(图3D)的脂化的CamK2D ASO保持体外功能活性。
[0049]图4A至图4B显示与亲本ASO相比，与饱和C
22
酸或C
18
(9Z)单不饱和脂肪二酸的缀合导致了心脏中类似本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种酸酰基缀合的寡核苷酸，其包含：a)羧基酰基基团；b)寡核苷酸；以及c)接头，该接头将该羧基酰基基团连接至该寡核苷酸。2.如权利要求1所述的酸酰基缀合的寡核苷酸，其中该羧基酰基基团是C4至C
32
。3.如权利要求1或2所述的酸酰基缀合的寡核苷酸，其中该羧基酰基基团是饱和的。4.如权利要求1或2所述的酸酰基缀合的寡核苷酸，其中该羧基酰基基团是单不饱和的或多不饱和的。5.如前述权利要求中任一项所述的酸酰基缀合的寡核苷酸，其中该接头与该寡核苷酸的5
′
末端结合。6.如前述权利要求中任一项所述的酸酰基缀合的寡核苷酸，其中该接头包含连接至该羧基酰基基团的氨基末端。7.如前述权利要求中任一项所述的酸酰基缀合的寡核苷酸，其中该接头包含连接至该寡核苷酸的磷酸酯末端。8.如前述权利要求中任一项所述的酸酰基缀合的寡核苷酸，其中该寡核苷酸是DNA。9.如前述权利要求中任一项所述的酸酰基缀合的寡核苷酸，其中该寡核苷酸是RNA。10.如前述权利要求中任一项所述的酸酰基缀合的寡核苷酸，其中该寡核苷酸是反义寡核苷酸。11.如前述权利要求中任一项所述的酸酰基缀合的寡核苷酸，其中该寡核苷酸是硫代磷酸酯寡核苷酸。12.一种式(I)的酸酰基缀合的寡核苷酸：其中：X是C4至C
32
烷基或烯基；A是缀合基团；L是接头；并且Y是寡核苷酸。13.如权利要求12所述的酸酰基缀合的寡核苷酸，其中X是C
10
至C
26
烷基或烯基。14.如权利要求12所述的酸酰基缀合的寡核苷酸，其中X是C
14
、C
16
或C
22
烷基或烯基。15.如权利要求12所述的酸酰基缀合的寡核苷酸，其中X是C
10
至C
26
烷基。16.如权利要求15所述的酸酰基缀合的寡核苷酸，其中X是C
10
至C
22
烷基。17.如权利要求15所述的酸酰基缀合的寡核苷酸，其中X是C
14
烷基、C
16
烷基或C
22
烷基。18.如权利要求15所述的酸酰基缀合的寡核苷酸，其中X是烯基。19.如权利要求18所述的酸酰基缀合的寡核苷酸，其中X是C
10
至C
26
烯基。20.如权利要求12所述的酸酰基缀合的寡核苷酸，其中A选自：C＝O；
21.如权利要求20所述的酸酰基缀合的寡核苷酸，其中A是C＝O。22.如前述权利要求中任一项所述的酸酰基缀合的寡核苷酸，其中该接头(L)与该寡核苷酸的5
′
末端结合。23.如前述权利要求中任一项所述的酸酰基缀合的寡核苷酸，其中该接头(L)包含连接至该羧基酰基基团的氨基末端。24.如前述权利要求中任一项所述的酸酰基缀合的寡核苷酸，其中该接头(L)包含连接至该寡核苷酸的磷酸酯末端。25.如前述权利要求中任一项所述的酸酰基缀合的寡核苷酸，其中该接头(L)是
其中Z是O或S，并且W选自C1至C
10
烷基或烯基或以下中的一者：26.如权利要求25所述的酸酰基缀合的寡核苷酸，其中W是C4至C8烷基。27.如前述权利要求中任一项所述的酸酰基缀合的寡核苷酸，其中该接头(L)是
‑
NH
‑
C6H
12
‑
O
‑
PO2‑
。28.如前述权利要求中任一项所述的酸酰基缀合的寡核苷酸，其中该接头(L)经由磷酸酯键联来附接至该寡核苷酸。29.如前述权利要求中任一项所述的酸酰基缀合的寡核苷酸，其中该寡核苷酸是DNA。30.如前述权利要求中任一项所述的酸酰基缀合的寡核苷酸，其中该寡核苷酸是RNA。31.如前述权利要求中任一项所述的酸酰基缀合的寡核苷酸，其中该寡核苷酸是反义寡核苷酸。32.如前述权利要求中任一项所述的酸酰基缀合的寡核苷酸，其中该寡核苷酸是硫代磷酸酯寡核苷酸。33.一种式(Ia)的酸酰基缀合的寡核苷酸：
其中：X是C
10
至C
26
烷基；L是接头
‑
NH
‑
C6H
12
‑
O
‑
PO2‑
；并且Y是DNA，其中该接头经由DNA的5
′
末端处的磷酸酯键联来附接至该DNA。34.如前述权利要求中任一项所述的酸酰基缀合的寡核苷酸，其中该寡核苷酸与非酰基缀合的寡核苷酸相比，改善了心肌细胞表达的减少。35.如前述权利要求中任一项所述的酸酰基缀合的寡核苷酸，其中该寡核苷酸是与MALAT1特异性结合的反义寡核苷酸。36.一种制备式(Ia)的酸酰基寡核苷酸的方法，该方法包括：A)提供式(II)的脂肪二酸B)使该脂肪二酸与活化基团A反应，以形成式(III)的酸酰基化合物：其中A*是附接至脂肪酰基化合物的活化基团；C)使式(III)的化合物与式(IV)的化合物反应：＊L
‑
Y (IV)，其中*L是具有反应性基团的接头；以形成式(Ia)的化合物：其中：X是C4至C
32
烷基或烯基；L是接头；并且Y是寡核苷酸。37.如权利要求36所述的方法，其中B)中的该...

【专利技术属性】
技术研发人员：S，
申请(专利权)人：阿斯利康瑞典有限公司，
类型：发明
国别省市：