一种CAR-T细胞生产方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种CAR

【技术实现步骤摘要】
一种CAR
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T细胞生产方法及其应用


[0001]本专利技术属于肿瘤免疫治疗
，尤其涉及一种CAR
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T细胞生产方法及其应用。

技术介绍

[0002]CAR
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T(Chimeric Antigen Receptor T
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Cell Immunotherapy)即嵌合抗原受体T细胞免疫疗法，CAR
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T技术在血液肿瘤、淋巴瘤的治疗上具有令人印象深刻的卓越疗效，而在实体瘤方面，还面临着诸多独特的挑战。这些独特的挑战主要包括：缺乏肿瘤细胞特异性的靶点，CAR
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T细胞在体内持续存活和扩增的能力不足，低效的肿瘤浸润能力，免疫抑制肿瘤微环境。实际上，科学家们逐渐发现了一些较好的CAR
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T治疗靶点，比如胃癌和胰腺癌中的CLDN18.2靶点。然而，即使有可用的靶点，只有同时解决另外三个挑战，CAR
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T治疗才有可能对实体瘤产生较好的疗效。
[0003]临床研究发现，过继转移低分化的记忆表型的CAR...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种CAR
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T细胞生产方法，其特征在于，主要包括以下两个步骤：步骤一：制备过表达Runx3的CAR
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T细胞；步骤二：在0.5～1.5μMAKTi1/2环境下扩增过表达Runx3的CAR
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T细胞。2.根据权利要求1所述的CAR
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T细胞生产方法，其特征在于，所述步骤一的具体过程为：(1)制备过表达Runx3的CAR病毒表达载体；(2)生产过表达Runx3的CAR病毒；(3)T细胞分离和激活；(4)病毒感染激活的T细胞。3.权利要求2所述的CAR
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T细胞生产方法在生产人源CAR
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T细胞中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述Runx3为人Runx3，CAR病毒为CAR慢病毒，T细胞为人外周血淋巴细胞。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述步骤(1)中：A.CAR采用三代CAR的组成方式，由人CD8信号肽，scFv片段，人CD8胞外区、CD28跨膜区和胞内段、4
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1BB胞内段、CD3ζ胞内段组成，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；B.人Runx3与CAR通过P2A序列连接，达到人Runx3与CAR共同过表达的目的，核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；C.所述慢病毒表达载体骨架为pLVX
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EF1a
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IRES
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mCherry；D.用CAR
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P2A
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RUNX3替换IRES
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mCherry，得到过表达人Runx3的CAR慢病毒表达载体pLVX
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EF1a
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CA9CAR
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P2A
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Runx3。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁廷波，汤江辉，盛剑鹏，
申请(专利权)人：浙江大学医学院附属第一医院，
类型：发明
国别省市：