血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法技术

本发明专利技术公开了血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，属于生物医药分析检测技术领域。本发明专利技术方法将待测血浆和内标物WXFL混匀，离心后，取上清液与水混匀，得待测样品；待测样品经高效液相色谱

【技术实现步骤摘要】
血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法


[0001]本专利技术属于生物医药分析检测
，具体涉及血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法。

技术介绍

[0002]JDB0131是硝基咪唑类的新型抗结核化合物。据已有的体外活性，药代动力学和体内药效的结果来看，JDB0131具有优异的体内药效、肺部组织分布以及良好的安全性。
[0003]但目前并没有针对该小分子及其体内代谢物在生物样品中的血药浓度检测分析的相关报道。同时，由于该化合物及其代谢物在血浆及全血中不稳定，导致常规检测手段结果不准确。因此急需开发一种专用于JDB0131及其代谢物，并且具有高通量、快速灵敏、结果准确的检测方法。

技术实现思路

[0004]为了弥补现有技术的空白，本专利技术提供了一种血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，其包括以下步骤：
[0005]A、将待测血浆和内标物WXFL混匀，离心后，取上清液与水混匀(一般震荡时间大于3s，液体混匀即可)，得待测样品；所述待测血浆由以下方法制备得到：将血浆与稳定剂1混匀即得；所述稳定剂1为饱和醋酸铵生理盐水溶液
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冰醋酸、饱和醋酸铵生理盐水溶液
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甲酸、浓氨水
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甲酸中的至少一种；所述饱和醋酸铵生理盐水溶液
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冰醋酸由以下方法制备得到：将饱和醋酸铵生理盐水溶液和冰醋酸按体积比10：3～5混匀即得；所述饱和醋酸铵生理盐水溶液
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甲酸由以下方法制备得到：将饱和醋酸铵生理盐水溶液和甲酸按体积比10：3～5混匀即得；所述浓氨水
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甲酸由以下方法制备得到：将浓氨水和甲酸按体积比10：3～5混匀即得；
[0006]B、待测样品经高效液相色谱
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串联质谱仪检测样品中JDB0131和/或代谢物WXWD的色谱峰，并据此计算所述待测血浆中JDB0131和/或代谢物WXWD浓度。
[0007]优选的，上述血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，步骤A中，所述稳定剂1为饱和醋酸铵生理盐水溶液
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冰醋酸。
[0008]优选的，上述血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，步骤A中，所述稳定剂1为10：3(v：v)的饱和醋酸铵生理盐水溶液
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冰醋酸、10：3(v：v)的饱和醋酸铵生理盐水溶液
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甲酸、2：1(v：v)的浓氨水
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甲酸中的至少一种。
[0009]最优选的，上述血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，步骤A中，所述稳定剂1为10：3(v：v)的饱和醋酸铵生理盐水溶液
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冰醋酸。
[0010]其中，上述血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，步骤A中，制备待测血浆所用血浆由以下方法制备得到：将全血与稳定剂2混合，然后离心即得；所述稳定剂2由以下方法制备得到：将稳定剂1和生理盐水按体积比1：2混合即得。
[0011]优选的，上述血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，步骤A中，制备待测血浆
所用血浆时，所述稳定剂2的用量为20～40μL/mL全血。
[0012]其中，上述血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，步骤A中，制备待测血浆时，所述稳定剂1与血浆的体积比为40～50uL：1mL。
[0013]在探索化合物在有机溶剂中的溶解性时，本专利技术选择了乙腈，内标工作液溶剂则需与其保持一致。按照本领域常识，内标工作液中内标峰与中浓度待测样品峰响应接近即可，并且同一分析方法中要恒定。因此，上述血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，步骤A中，所述内标物WXFL以内标工作液形式加入，所述内标工作液为：以乙腈为溶剂配置WXFL浓度为2～100ng/mL的内标工作液。
[0014]其中，上述血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，步骤A中，所述内标工作液的加入量为不少于待测血浆体积的3倍。
[0015]内标工作液(沉淀剂)的用量提升有利于血浆基质中杂质的去除，对于色谱柱的保护等有利。优选的，上述血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，步骤A中，所述内标工作液的加入量为待测血浆体积的3～20倍。
[0016]步骤A中上清液与水的体积比依赖于上清液的浓度以及流动相初始梯度等，上清液浓度越大，根据标曲线性范围，上清液与纯水的体积比越小；进样样本的有机溶剂和水相比例应与流动相初始比例相接近。因此上述血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，步骤A中，所述上清液与水的体积比为30：70～20：80。
[0017]其中，上述血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，步骤A中，待测血浆和内标物WXFL混匀后，控制离心转速转速不小于10000rpm，离心时间不少于5min，离心温度2～8℃。
[0018]其中，上述血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，步骤B中，高效液相色谱条件为：
[0019]色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18，50
×
2.1mm，1.7μm；
[0020]流动相：A水相：甲酸：氨水：水体积比＝0.5：0.5：1000，B有机相：乙腈；
[0021]梯度洗脱；柱温：40℃；进样量不超过20μL(进样量需根据最终进样浓度评估，浓度高则进样量要降低，最高进样量不超过20μL，在同一方法测定中进样量需恒定)。
[0022]梯度条件出峰前以待测物峰形好坏和是否能够充分分离优化所得，出峰后梯度条件为冲洗柱内残留物再平衡进样以防止柱内残留物集聚产生基质效应，影响测定的准确度和精密度。本专利技术尝试了不同溶剂和不同pH的流动相梯度条件，经过反复调整试验，最终选定了本专利技术的梯度条件。其中，上述血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，步骤B中，梯度洗脱程序为：
[0023]时间/min流速/mL/minB/％00.4352.30.4502.310.41002.900.41002.910.4353.400.435。
[0024]其中，上述血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，步骤B中，质谱条件为：检测方式：多反应离子监测MRM，正离子模式扫描；离子源：ESI源；检测参数为：
[0025][0026]其中，上述血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，步骤B中，采用内标法，以JDB与内标物WXFL的响应比和/或代谢物WXWD与内标物WXFL的响应比(即峰面积比值)带入各自标准曲线方程，计算所述待测血浆中的JDB0131和/或代谢物WXWD浓度。
[0027]其中，上述血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法中，所述标准曲线方程的建立包括以下步骤：
[0028]a、取空白血浆若干份，分别与稳定剂1按体积比为1mL：40～50uL混匀，得空白血浆1；将空白血浆1分别与对应份数的标准曲线系列工作液混合，得标准曲线系列血浆样本，标准曲线系列血浆样本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，其特征在于：包括以下步骤：A、将待测血浆和内标物WXFL混匀，离心后，取上清液与水混匀，得待测样品；所述待测血浆由以下方法制备得到：将血浆与稳定剂1混匀即得；所述稳定剂1为饱和醋酸铵生理盐水溶液
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冰醋酸、饱和醋酸铵生理盐水溶液
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甲酸、浓氨水
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甲酸中的至少一种；所述饱和醋酸铵生理盐水溶液
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冰醋酸由以下方法制备得到：将饱和醋酸铵生理盐水溶液和冰醋酸按体积比10：3～5混匀即得；所述饱和醋酸铵生理盐水溶液
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甲酸由以下方法制备得到：将饱和醋酸铵生理盐水溶液和甲酸按体积比10：3～5混匀即得；所述浓氨水
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甲酸由以下方法制备得到：将浓氨水和甲酸按体积比10：3～5混匀即得；B、待测样品经高效液相色谱
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串联质谱仪检测样品中JDB0131和/或代谢物WXWD的色谱峰，并据此计算所述待测血浆中JDB0131和/或代谢物WXWD浓度。2.根据权利要求1所述的血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，其特征在于：步骤A中，制备待测血浆所用血浆由以下方法制备得到：将全血与稳定剂2混合，然后离心即得；所述稳定剂2由以下方法制备得到：将稳定剂1和生理盐水按体积比1：2混合即得；优选的，制备待测血浆所用血浆时，所述稳定剂2的用量为20～40μL/mL全血。3.根据权利要求1或2所述的血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，其特征在于：步骤A中，至少满足下列的一项：制备待测血浆时，所述稳定剂1与血浆的体积比为40～50uL：1mL；所述内标物WXFL以内标工作液形式加入，所述内标工作液为：以乙腈为溶剂配置WXFL浓度为2～100ng/mL的内标工作液；所述内标工作液的加入量为不少于待测血浆体积的3倍；优选为3～20倍；所述上清液与水的体积比为30：70～20：80；待测血浆和内标物WXFL混匀后，控制离心转速转速不小于10000rpm，离心时间不少于5min，离心温度2～8℃。4.根据权利要求1～3任一项所述的血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，其特征在于：步骤B中，高效液相色谱条件为：色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18，50
×
2.1mm，1.7μm；流动相：A水相：甲酸：氨水：水体积比＝0.5：0.5：1000，B有机相：乙腈；柱温：40℃；进样量不超过20μL；梯度洗脱程序为：
。5.根据权利要求1～3任一项所述的血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，其特征在于：步骤B中，质谱条件为：检测方式：多反应离子监测MRM，正离子模式扫描；离子源：ESI源；检测参数为：。6.根据权利要求1～5任一项所述的血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，其特征在于：步骤B中，采用内标法，以JDB与内标物WXFL的响应比和/或代谢物WXWD与内标物WXFL的响应比带入各自标准曲线方程，计算所述待测血浆中的JDB0131和/或代谢物WXWD浓度。7.根据权利要求6所述的血浆中JDB0131、其代谢物的浓度测定方法，其特征在于：所述标准曲线方程的建立包括以下步骤：a、取空白血浆若干份，分别与稳定剂1按体积比为1mL：40～50uL混匀，得空白血浆1；将空白血浆1分别与对应份数的标准曲线系列工作液混合，得标准曲线系列血浆样本，标准曲线系列血浆样本采用权利要求1或3中与待测血浆相同的预处理操作，得若干标样；b、标样经高效液相色谱
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串联质谱...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦永平，高添桃，梁秀芳，姜宁，
申请(专利权)人：上海嘉葆药银医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：