一种根皮素的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种根皮素的制备方法，属于生物技术领域。本发明专利技术的制备方法包括以下步骤：柚皮苷二氢查耳酮中加入水、二硫苏糖醇和柚苷酶，调节pH值至5.5～6.5，进行搅拌酶解，酶解完成后进行过滤、干燥，即得。该制备方法以柚皮苷二氢查耳酮为原料，在酶解过程中加入二硫苏糖醇，促进酶解，减少了用酶量的同时得到高纯度、高收率的根皮素，且整个制备过程不需要精制，生产周期短，适合大规模生产，对环境友好。好。好。

【技术实现步骤摘要】
一种根皮素的制备方法


[0001]本专利技术涉及生物
，具体为一种根皮素的制备方法。

技术介绍

[0002]根皮素是一种二氢查耳酮化合物，具有抗氧化、抗炎、降血糖、祛斑及光滑肤质等作用，主要分布于苹果等的果皮及根皮中，其已被用于美容护肤产品中。然而，根皮素在植物中的含量较低，目前，常见的根皮素制备方法有直接提取分离、有机化学合成或将天然的根皮苷进行酶解、酸解、碱解等方法来制备。
[0003]其中，直接提取分离法虽然路线简单，但提取材料本身根皮素含量低，且分离过程中耗费大量的填料及化学溶剂；化学合成法产率不高于30％，且化学合成需要大量原料并存在副产物；酶解方法通常需要加入大量的酶，成本高，且操作较多，耗时较长，会产生大量废酸，要消耗大量碱中和，就会产生大量废盐水，污染环境。

技术实现思路

[0004]本专利技术为了解决现有技术中存在的缺陷，提供一种根皮素的制备方法，该方法以柚皮苷二氢查耳酮为原料，在酶解过程中加入二硫苏糖醇，促进酶解，减少了用酶量的同时得到高纯度、高收率的根皮素，且整个制备过程不需要精制，生产周期短，适合大规模生产，对环境友好。
[0005]为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0006]本专利技术提供一种根皮素的制备方法，包括以下步骤：
[0007]柚皮苷二氢查耳酮中加入水、二硫苏糖醇和柚苷酶，调节pH值至5.5～6.5，进行搅拌酶解，酶解完成后进行过滤、干燥，即得。
[0008]优选的，所述柚皮苷二氢查耳酮和水的质量体积比为1:(10～20)。
[0009]更为优选的，所述柚皮苷二氢查耳酮和水的质量体积比为1:15。
[0010]优选的，所述柚皮苷二氢查耳酮和二硫苏糖醇的质量比为1:(0.005～0.01)。
[0011]更为优选的，所述柚皮苷二氢查耳酮和二硫苏糖醇的质量比为1:0.005。
[0012]优选的，所述柚皮苷二氢查耳酮和柚苷酶的质量比为1:(0.05～0.1)。
[0013]更为优选的，所述柚皮苷二氢查耳酮和柚苷酶的质量比为1:0.05。
[0014]优选的，所述柚苷酶为β
‑
D葡萄糖苷酶和α
‑
L鼠李糖苷酶。
[0015]更为优选的，所述柚苷酶为β
‑
D葡萄糖苷酶和α
‑
L鼠李糖苷酶按质量比1:1进行混合。
[0016]优选的，所述调节pH值的调节剂选自柠檬酸三钠溶液、氢氧化钠溶液、氨水溶液中的一种或多种。
[0017]优选的，所述搅拌速度为80
‑
200转/分。
[0018]优选的，所述酶解温度为40～60℃。
[0019]更为优选的，所述酶解温度为50℃。
[0020]优选的，所述步骤还包括：搅拌酶解过程中加入葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶。
[0021]优选的，所述柚皮苷二氢查耳酮与葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶总质量的质量比为1：(0.05～0.09)。
[0022]更为优选的，所述柚皮苷二氢查耳酮与葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶总质量的质量比为1：0.07。
[0023]优选的，所述葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶的质量比为(1.5～3.5)：1。
[0024]更为优选的，所述葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶的质量比为2.5：1。
[0025]优选的，所述酶解过程中用薄层层析检测底物，底物斑点消失即为终点。
[0026]更为优选的，所述薄层层析检测的条件为：薄层板：G254；层析液：乙酸乙酯：甲醇：水＝10:1.7:1.3。
[0027]本专利技术的有益效果是：
[0028]本专利技术在柚苷酶酶解柚皮苷二氢查耳酮的过程中，加入了二硫苏糖醇，二硫苏糖醇在偏酸性溶液环境中显正电性，分子小，它能自由通过含谷氨酸的酶和底物催化其中心微观结构，诱导底物分子与柚苷酶的催化中心谷氨酸(Glu)结合，加快酶解速度，促进酶解反应，有效减少柚苷酶的使用量且提高产物纯度和收率，即直接酶解的根皮素纯度就可以达到98％以上的效果，整个制备过程无需精制和冷藏，工艺简单易行，不会产生高盐废水，绿色环保。
[0029]不同二硫苏糖醇的添加量影响与柚苷酶的相互作用，影响底物分子与酶的催化中心谷氨酸(Glu)结合的速度，进而影响酶解时间以及制备得到的根皮素的纯度和收率，本专利技术限定所述柚皮苷二氢查耳酮和二硫苏糖醇的质量比为1:(0.005～0.01)。
[0030]柚苷酶的加量越多，酶解速度会越快，酶解时间就越短，但是成本也会越高，本专利技术综合考虑成本和效果，限定所述柚皮苷二氢查耳酮和柚苷酶的质量比为1:(0.05～0.1)。
[0031]酶解温度对柚苷酶的酶解反应和二硫苏糖醇与柚苷酶之间的作用有直接影响，温度太低就会导致无法酶解，而温度太高则影响酶的活性，也降低酶解效果。本专利技术限定酶解温度为40～60℃。
[0032]本专利技术在搅拌酶解过程中还可以加入葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶，以消耗酶解过程产生的葡萄糖和过氧化氢，以促进酶解正反应，进而促进酶解，缩短酶解时间，进一步提高根皮素的纯度和收率，同时也可以减少柚苷酶的使用量，节省生产成本。
附图说明
[0033]图1为实施例1得到的产品的色谱图；
[0034]图2为实施例2得到的产品的色谱图；
[0035]图3为实施例3得到的产品的色谱图；
[0036]图4为实施例4得到的产品的色谱图；
[0037]图5为实施例5得到的产品的色谱图；
[0038]图6为实施例6得到的产品的色谱图；
[0039]图7为实施例7得到的产品的色谱图；
[0040]图8为实施例8得到的产品的色谱图；
[0041]图9为实施例9得到的产品的色谱图；
[0042]图10为实施例10得到的产品的色谱图；
[0043]图11为实施例11得到的产品的色谱图；
[0044]图12为实施例12得到的产品的色谱图；
[0045]图13为对比例1得到的产品的色谱图；
[0046]图14为对比例2得到的产品的色谱图。
具体实施方式
[0047]为了使本领域的技术人员更好地理解专利技术的技术方案，下面结合具体实施方式对本专利技术作进一步的详细说明。
[0048]为在制备根皮素过程中促进酶解，降低用酶量，以实现高纯度、高收率的根皮素的制备，本专利技术提出一种根皮素的制备方法，包括以下步骤：柚皮苷二氢查耳酮中加入水、二硫苏糖醇和柚苷酶，调节pH值至5.5～6.5，进行搅拌酶解，酶解完成后进行过滤、干燥，即得。
[0049]专利技术人在研究过程中创造性的发现，在柚苷酶酶解柚皮苷二氢查耳酮的过程中，微酸性环境下，加入二硫苏糖醇可以有效促进酶解反应，且加入少量二硫苏糖醇即可有效减少柚苷酶的使用量。这是因为二硫苏糖醇在偏酸性溶液环境中显正电性，分子小，它能自由通过底物和含谷氨酸的酶，催化其中心微观结构，诱导底物分子与酶的催化中心谷氨本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种根皮素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：柚皮苷二氢查耳酮中加入水、二硫苏糖醇和柚苷酶，调节pH值至5.5～6.5，进行搅拌酶解，酶解完成后进行过滤、干燥，即得。2.根据权利要求1所述的根皮素的制备方法，其特征在于，所述柚皮苷二氢查耳酮和水的质量体积比为1:(10～20)。3.根据权利要求1所述的根皮素的制备方法，其特征在于，所述柚皮苷二氢查耳酮和二硫苏糖醇的质量比为1:(0.005～0.01)。4.根据权利要求1所述的根皮素的制备方法，其特征在于，所述柚皮苷二氢查耳酮和柚苷酶的质量比为1:(0.05～0.1)。5.根据权利要求1所述的根皮素的制备方法，其特征在于，所述柚苷酶为β
‑
D葡萄糖苷酶和α<...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵卓君，
申请(专利权)人：成都欧康医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：