本发明专利技术公开了一种利用连续流装置进行生物氧化制备潜手性酮化合物的方法，以固定化漆酶作为催化剂，在连续流微反应装置中，用于由消旋醇到潜手性酮的生物氧化。本发明专利技术生物氧化方法具有较高的转化率，底物消旋醇浓度可达到40mM，转化率可到95％，且本方法反应步骤简单，反应条件温和，安全，具备规模化生产的能力。将漆酶固定化后，连续运行时间最高可达2800分钟，提高了酶的利用率，显示出良好的操作稳定性。而且本方法对环境友好，利用氧气为氧化剂，氧化副产物为水，大大减少了传统化学氧化过程中造成的环境污染。中造成的环境污染。中造成的环境污染。
【技术实现步骤摘要】
一种利用连续流装置进行生物氧化制备潜手性酮化合物的方法
[0001]本专利技术涉及生物催化
，具体是一种利用连续流装置进行生物氧化制备潜手性酮化合物的方法。
技术介绍
[0002]漆酶是一种蓝色的多铜氧化酶，能够催化天然底物的氧化，其代价是将四电子氧还原为水。这种氧化还原酶在工业领域有多种应用，并在合成化学领域有着诱人的应用前景。漆酶对于伯醇和仲醇的氧化，需要使用介体系统。其中2,2,6,6
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四甲基哌啶氧基自由基(TEMPO)是最高效的的介体之一。漆酶的底物种类繁多(如酚类和苯胺类)，其氧化过程随着分子氧还原为水，底物被氧化。因此，漆酶被定义为“环保”酶，水作为唯一的副产品。利用漆酶进行生物氧化，可以避免化学氧化剂条件苛刻，污染高等缺点。生物氧化生成的潜手性酮可以作为多种手性醇或手性胺药物中间体的重要起始原料，同时也解决了规模庞大的消旋醇的利用问题。
[0003]相对于传统间歇式和搅拌式连续反应器，连续流装置(微反应器)更加具有高效性。由于连续流装置具有比表面积大﹑收率高、稳定性高、选择性高、低能耗、提高样品一致性、低反应体积和均匀性、接触时间短、副产物少、快速放大等优点，且连续流装置自动化程度高，大大节省了人力物料成本。以连续流装置为核心的连续流生物催化具有广阔的应用前景。
技术实现思路
[0004]专利技术目的：本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种利用连续流装置进行，将消旋醇通过生物氧化制备潜手性酮化合物的方法。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术采取的技术方案如下：
[0006]一种利用连续流装置进行生物氧化制备潜手性酮化合物的方法，包括如下步骤：
[0007](1)以消旋醇为原料，将消旋醇与催化介体混合得到底物溶液；
[0008](2)将步骤(1)得到的底物溶液，与空气或者氧气分别通过流量泵一起通入固定有氧化酶的连续流装置中进行氧化反应，收集反应产物，经萃取即得；
[0009]反应的方程式如下：
[0010][0011]其中，R1为苯环上的取代基，选自氯、溴、氟、甲基、甲氧基中的任意一种；
[0012]所述R2选自甲基、乙基、乙烯基、乙炔基中的任意一种。
[0013]具体地，步骤(1)中，所述消旋醇为1
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苯乙醇、1
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对甲基苯丙醇、1
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对氯苯乙醇、1
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对氟苯乙醇、对甲基苯乙醇、对甲氧基苯乙醇中的任意一种；所述消旋醇溶于乙腈和柠檬酸缓冲液的混合溶液中，消旋醇浓度为30
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40mmol/L。
[0014]优选地，步骤(1)中，所述催化介体为TEMPO，底物溶液中TEMPO的用量为底物消旋醇摩尔用量(mol)的10
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33％。
[0015]优选地，步骤(2)中，所述的氧化酶为漆酶Laccase from Trametes versicolor，CAS号：80498
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15
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3，购自默克西格玛。
[0016]具体地，所述连续流装置包括底物溶液罐、第一流量泵、第二流量泵、气瓶、T型混合器以及酶填充柱；所述底物溶液罐与气瓶通过聚四氟乙烯管道并联连接在T型混合器的一端，T型混合器的另一端连接至酶填充柱；所述第一流量泵安装在底物溶液罐与T型混合器之间的聚四氟乙烯管道上；所述第二流量泵安装在气瓶与T型混合器之间的聚四氟乙烯管道上；所述氧化酶固定在酶填充柱内。
[0017]具体地，所述酶填充柱内采用环氧树脂对氧化酶进行固定，具体方法包括：
[0018]S1：环氧树脂的官能团修饰
[0019]将环氧树脂加入到H2SO4水溶液中搅拌2～4h，然后用去离子水洗去残留的H2SO4；接着加入到高碘酸钠水溶液中搅拌2～4h，然后用去离子水洗涤过滤；最后加入到甘氨酸水溶液中轻晃2～4h，去离子水洗涤多次后，得到修饰后的环氧树脂；
[0020]S2：氧化酶的树脂固定化
[0021]将氧化酶加入到步骤(1)修饰后的环氧树脂中，然后加入CuSO4、50mM pH 7.0～7.5的磷酸二氢钠
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磷酸氢二钠缓冲溶液，孵育18～20h，用20mM pH 7.0～7.5的磷酸二氢钠
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磷酸氢二钠缓冲溶液洗涤过滤；最后加入碳酸钠缓冲液和硼氢化钠轻晃30～60min，用10mM pH 7.0～7.5的磷酸二氢钠
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磷酸氢二钠缓冲溶液洗涤过滤，得到固定化的氧化酶，装填至柱内即得。
[0022]优选地，步骤S2中，氧化酶与修饰后的环氧树脂二者的用量比为20
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25mg：1g。
[0023]优选地，步骤(2)中，底物溶液以50
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75μL/min的流速通入连续流装置，在常压下，空气或者氧气以0.5
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0.75mL/min的流速通入连续流装置。
[0024]优选地，步骤(2)中，所述连续流装置中氧化反应的温度控制在25～30℃，反应停留时间为30
‑
35分钟。
[0025]优选地，步骤(2)中，反应产物经乙酸乙酯进行萃取，得到潜手性酮化合物。
[0026]有益效果：
[0027]本专利技术以固定化漆酶作为催化剂，在连续流微反应装置中，用于由消旋醇到潜手性酮的生物氧化。本专利技术生物氧化方法具有较高的转化率，底物消旋醇浓度可达到40mM，转化率可到95％，且本方法反应步骤简单，反应条件温和，安全，具备规模化生产的能力。将漆酶固定化后，连续运行时间最高可达2800分钟，提高了酶的利用率，显示出良好的操作稳定性。而且本方法对环境友好，利用氧气为氧化剂，氧化副产物为水，大大减少了传统化学氧化过程中造成的环境污染。
附图说明
[0028]下面结合附图和具体实施方式对本专利技术做更进一步的具体说明，本专利技术的上述和/或其他方面的优点将会变得更加清楚。
[0029]图1是本专利技术的反应式。
[0030]图2是漆酶(Laccase,from Trametes versicolor)蛋白结构示意图。
[0031]图3是本专利技术环氧树脂官能团修饰原理示意图。
[0032]图4是本专利技术连续流装置示意图。
[0033]图5是漆酶催化介体TEMPO的分子结构。
[0034]图6苯乙酮的H1‑
NMR谱图。
[0035]图7对甲基苯丙酮的H1‑
NMR谱图。
[0036]图8对氯苯乙酮的H1‑
NMR谱图。
[0037]图9对氟苯乙酮的H1‑
NMR谱图。
[0038]图10对甲基苯乙酮的H1‑
NMR谱图。
[0039]图11对甲氧基苯乙酮的H1‑
NMR谱图。
具体实施方式
[0040]根据下述实施例，可以更好地理解本专利技术。
[0041]本专利技术以固定化漆酶作为催本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种利用连续流装置进行生物氧化制备潜手性酮化合物的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)以消旋醇为原料，将消旋醇与催化介体混合得到底物溶液；(2)将步骤(1)得到的底物溶液，与空气或者氧气分别通过流量泵一起通入固定有氧化酶的连续流装置中进行氧化反应，收集反应产物，经萃取即得；反应的方程式如下：其中，R1为苯环上的取代基，选自氯、溴、氟、甲基、甲氧基中的任意一种；所述R2选自甲基、乙基、乙烯基、乙炔基中的任意一种。2.根据权利要求1所述的利用连续流装置进行生物氧化制备潜手性酮化合物的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述消旋醇为1
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苯乙醇、1
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对甲基苯丙醇、1
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对氯苯乙醇、1
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对氟苯乙醇、对甲基苯乙醇、对甲氧基苯乙醇中的任意一种；所述消旋醇溶于乙腈和柠檬酸缓冲液的混合溶液中，消旋醇浓度为30
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40mmol/L。3.根据权利要求2所述的利用连续流装置进行生物氧化制备潜手性酮化合物的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述催化介体为TEMPO，底物溶液中TEMPO的用量为底物消旋醇摩尔用量的10
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33％。4.根据权利要求1所述的利用连续流装置进行生物氧化制备潜手性酮化合物的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的氧化酶为漆酶Laccase from Trametes versicolor。5.根据权利要求1所述的利用连续流装置进行生物氧化制备潜手性酮化合物的方法，其特征在于，所述连续流装置包括底物溶液罐、第一流量泵、第二流量泵、气瓶、T型混合器以及酶填充柱；所述底物溶液罐与气瓶通过聚四氟乙烯管道并联连接在T型混合器的一端，T型混合器的另一端连接至酶填充柱；所述第一流量泵安装在底物溶液罐与T型混合器之间的聚四氟乙烯管道上；所述第二流量泵安装在气瓶与T型混合器之间的聚四氟乙烯管道上；所述氧化酶固定在酶填充柱内。6.根据权利要求5所述的利...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭凯，赵明业，胡玉静，王合永，何长安，吴文静，
申请(专利权)人：南京工业大学，
类型：发明
国别省市：
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