一种岩黄连总生物碱含量的检测方法技术

本发明专利技术提供了一种岩黄连总生物碱含量的检测方法，与现有紫外分光光度法直接测定岩黄连总生物碱含量相比，本发明专利技术首次选用脱氢卡维丁作为标准品，使待测样品和标准品与酸性染料溴甲酚紫反应生成络合物的最大吸收波长一致(均为403nm)，减少本地吸收值，从而使新方法更具有准确性高、稳定性好、易于重现的优点，为研究岩黄连总生物碱制备工艺的质量控制提供了更加准确有效的检测方法。更加准确有效的检测方法。更加准确有效的检测方法。

【技术实现步骤摘要】
一种岩黄连总生物碱含量的检测方法


[0001]本专利技术涉及生物碱类物质检测
，尤其涉及一种岩黄连总生物碱含量的检测方法。

技术介绍

[0002]岩黄连(Corydalis saxicola Bunting，CSB)系罂粟科紫堇属植物石黄堇的全草，主要分布于我国广西、贵州、云南等地，具有清热解毒、利湿、止痛止血等功效。是目前临床治疗肝炎、肝纤维化及肝硬化的常用中药之一。岩黄连发挥药理作用的化学成分主要是生物碱类成分，统称为岩黄连总碱( Corydalis saxicola Bunting total alkaloids，CSBTA)。现代药理研究表明CSBTA具有保肝、镇痛、抗肿瘤和抗菌等广泛的药理学作用，具有广阔的开发应用前景。因此，建立科学有效的岩黄连总生物碱含量的检测方法，对于岩黄连总生物碱制备工艺质量控制的研究具有重要的意义。
[0003]生物碱常用的检测方法具有紫外分光光度法、高效液相色谱法、气相色谱法、酸碱滴定法和酸性染料比色法等。通过对各方法的研究，用紫外
‑
可见分光光度法直接测定岩黄连总生物碱的含量，发现计算结果偏高，推测可能是由于同波长下未扣除其它干扰所致，故此方法不可行；酸碱直接滴定法无法产生滴定突越，酸碱回滴定法可以产生滴定突越，但计算含量为负值，因此也不可行；酸碱非水滴定法测定，发现总碱含量过高，根据岩黄连中生物碱种类进行分析，判断因是总碱中含有多氮化合物，或提取物中含有除生物碱外的多氮化合物，导致滴定结果偏高；酸性染料比色法没有非水滴定法的反应物量的限定，并经过先期预实验明确实验可行。最终选择用酸性染料比色法进行岩黄连总碱的含量测定。酸性染料比色法关键技术在于参照标准品、酸性染料以及检测波长的选择。不同类型的生物碱与酸性染料反应生成的络合物，其最大吸收波长有差异。因此标准参照品的选择会很大程度上影响生物碱酸性染料检测结果的灵敏度与准确性。现有技术中，报导过以盐酸巴马汀、盐酸小檗碱为检测参照品，但因不同产地的岩黄连良莠不齐，其生物碱分布不均，甚至一些产地的岩黄连中不含盐酸巴马汀、盐酸小檗碱。因此，不适宜以盐酸巴马汀、盐酸小檗碱作为标准参照品建立岩黄连总生物碱酸性染料比色法。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种岩黄连总生物碱含量检测方法，提高岩黄连总生物碱含量测定的准确度。
[0005]为实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0006]一种岩黄连总生物碱含量的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：
[0007](1)供试品制备：采用乙醇溶液和/或盐酸水溶液对待测样品进行提取，得到待测样品提取液作为供试品；所述待测样品选自岩黄连药材、岩黄连总碱、岩黄连总碱胶囊；
[0008](2)建立标准曲线：将脱氢卡维丁与盐酸水溶液混合，配制浓度范围内的梯度浓度的多个脱氢卡维丁标准溶液，将所述梯度浓度的多个脱氢卡维丁标准溶液分别与酸性染料
溴甲酚紫溶液、柠檬酸
‑
柠檬酸钠缓冲液充分混合后，二氯甲烷萃取，离心，将得到的二氯甲烷相作为标准待测溶液，分别测定所述标准待测溶液的吸光度，建立脱氢卡维丁含量的标准曲线；
[0009]本专利技术对于所述脱氢卡维丁标准溶液与酸性染料溶液、柠檬酸
‑
柠檬酸钠缓冲液和二氯甲烷的混合没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的物料混合的技术方案即可。本专利技术优选先将脱氢卡维丁标准溶液和酸性染料溴甲酚紫溶液混合，然后依次加入柠檬酸
‑
柠檬酸钠缓冲液和二氯甲烷，将所得混合物料剧烈震荡4
‑
6min，以保证各组充分混合、充分萃取。
[0010]本专利技术对于建立脱氢卡维丁的标准曲线的方法没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的方法即可。本专利技术优选以所述脱氢卡维丁标准溶液的浓度为横坐标，以所述脱氢卡维丁标准溶液在检测波长处的吸光度为纵坐标，绘制脱氢卡维丁含量的标准曲线。
[0011](3)按照所述步骤(2)中的方法测定所述步骤(1)中待测样品提取液的吸光度，根据待测样品提取液的吸光度和步骤(2)建立的建立脱氢卡维丁含量的标准曲线，得到待测样品中岩黄连总生物碱含量；即将步骤(2)中梯度浓度的多个脱氢卡维丁标准溶液替换为步骤(1)中的待测样品提取液，与酸性染料溴甲酚紫溶液、柠檬酸
‑
柠檬酸钠缓冲液充分混合后，二氯甲烷萃取，离心，将得到的二氯甲烷相测定吸光度，即为待测样品的吸光度。
[0012]该步骤中，所述离心的时间优选为5min，1000rpm/min。在所述离心后，总生物碱与酸性染料形成络合物，并分层存在于二氯甲烷相中。
[0013]步骤(2)(3)中的萃取分层后，本专利技术优选将得到的二氯甲烷相进行干燥后作为标准待测溶液进行后续测定。本专利技术对于所述干燥没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的干燥技术方案即可；作为一种具体的实施方式，采用无水硫酸钠对分层后得到的二氯甲烷相进行干燥。
[0014]所述步骤(1)和步骤(2)无时间顺序限定，步骤(1)的待测样品提取液和步骤(2)的标准待测溶液均临用现制。
[0015]进一步的，
[0016]当步骤(1)中所述待测样品为岩黄连药材时，所述供试品制备方法为：将岩黄连药材粉碎，采用乙醇溶液提取，得到提取液；优选的，所述乙醇溶液为75％乙醇；优选的，岩黄连药材粉碎过四号筛。
[0017]或当步骤(1)中所述待测样品为岩黄连总碱时，所述供试品制备方法为：将岩黄连总碱采用盐酸水溶液提取，得到提取液；优选的，所述盐酸水浓度为0.1％；
[0018]或当步骤(1)中所述待测样品为岩黄连总碱胶囊时，所述供试品制备方法为：将岩黄连总碱胶囊与盐酸水溶液提取，得到提取液；优选的，所述盐酸水浓度为1％。
[0019]进一步的，步骤(1)所述提取采用超声处理，所述超声时间为30min～45min；
[0020]优选的，当步骤(1)中所述待测样品为岩黄连药材或岩黄连总碱时，所述超声时间为45min，当步骤(1)中所述待测样品为岩黄连总碱胶囊时，所述超声时间为30min。
[0021]进一步的，所述步骤(2)中所述盐酸水溶液的浓度为0.1％。
[0022]进一步的，所述步骤(2)中所述酸性染料溴甲酚紫溶液的质量浓度为0.1％。
[0023]进一步的，所述步骤(2)中柠檬酸
‑
柠檬酸钠缓冲液的pH值为3.5
‑
5.0，优选的，柠檬酸
‑
柠檬酸钠缓冲液的pH值为4.5。
[0024]进一步的，所述步骤(2)中各梯度浓度的脱氢卡维丁标准溶液与酸性染料溴甲酚紫溶液、柠檬酸
‑
柠檬酸钠缓冲液的体积比为1∶3∶2～5∶7∶6；优选的，步骤(2)中各梯度浓度的脱氢卡维丁标准溶液与酸性染料溴甲酚紫溶液、柠檬酸
‑
柠檬酸钠缓冲液的体积比为3∶5∶4。
[0025]进一步的，所述步骤(2)中脱氢卡维丁标准溶液与二氯甲烷用量比例范围为1∶本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种岩黄连总生物碱含量的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：(1)供试品制备：采用乙醇溶液和/或盐酸水溶液对待测样品进行提取，得到待测样品提取液作为供试品；所述待测样品选自岩黄连药材、岩黄连总碱、岩黄连总碱胶囊；(2)建立标准曲线：将脱氢卡维丁与盐酸水溶液混合，配制浓度范围内的多个梯度浓度的脱氢卡维丁标准溶液，将所述多个梯度浓度的脱氢卡维丁标准溶液与酸性染料溴甲酚紫溶液、柠檬酸
‑
柠檬酸钠缓冲液充分混合后，二氯甲烷萃取，离心，将得到的二氯甲烷相作为标准待测溶液，测定所述标准待测溶液的吸光度，建立脱氢卡维丁含量的标准曲线；(3)按照所述步骤(2)中的方法测定所述步骤(1)中待测样品提取液的吸光度，根据待测样品提取液的吸光度和步骤(2)建立的建立脱氢卡维丁含量的标准曲线，得到待测样品中岩黄连总生物碱含量；所述步骤(1)和步骤(2)无时间顺序限定。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，当步骤(1)中所述待测样品为岩黄连药材时，所述供试品制备方法为：将岩黄连药材粉碎，采用乙醇溶液提取，得到提取液；优选的，所述乙醇溶液为75％乙醇；或当步骤(1)中所述待测样品为岩黄连总碱时，所述供试品制备方法为：将岩黄连总碱采用盐酸水溶液提取，得到提取液；优选的，所述盐酸水浓度为0.1％；或当步骤(1)中所述待测样品为岩黄连总碱胶囊时，所述供试品制备方法为：将岩黄连总碱胶囊与盐酸水溶液提取，得到提取液；优选的，所述盐酸水浓度为1％。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)所述提取采用超声处理，所述超声时间为30min～4...

【专利技术属性】
技术研发人员：王海丽，高原，成俊，赵开军，彭雲，郭健，
申请(专利权)人：江苏弘典中药产业研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：