一种特异性识别万古霉素的核酸适配体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种特异性识别万古霉素的核酸适配体，核酸适配体的核苷酸序列包括以下三种序列中的至少一种：(1)SEQ ID NO:1

【技术实现步骤摘要】
一种特异性识别万古霉素的核酸适配体及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种特异性识别万古霉素的核酸适配体及其应用。

技术介绍

[0002]万古霉素(Vancomycin)别名：凡古霉素；凡可霉素；盐酸万古霉素，是一种糖肽类抗生素，通过抑制细菌的生长和繁殖来杀死细菌，用于治疗细菌感染。这种药物通过干扰细菌细胞壁结构中的一种关键组分来干扰细胞壁的合成，抑制细胞壁中磷脂和多肽的生成，是治疗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌和肠球菌所致的重症感染包括败血症、肺部感染、皮肤软组织感染的疗效确切又比较安全的抗生素。对于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌院内肺部感染，万古霉素为首选药物。万古霉素是治疗MRSA/MRCON和肠球菌所致重症感染包括败血症、肺部感染、皮肤软组织感染的疗效确切又比较安全的抗生素，此药对革兰阳性球菌有强大的杀菌作用，口服给药对治疗难辨梭状芽胞杆菌假膜性结肠炎有极好疗效。
[0003]万古霉素是由链霉菌产生的,结构复杂的糖肽类抗生素,药力较强,静滴过快有皮肤反应，浓度过高可致血栓性静脉炎；肌注可致剧烈疼痛，故不可肌注；有严重耳毒性及肾毒性，故只有在其他抗生素对病菌无效时才会被短期使用于抢救。
[0004]目前万古霉素的检测方法有很多种，例如：免疫筛选法；气相色谱法，高效液相色谱等方法，色谱的方法虽然检测的灵敏度较高，检测结果准确，但是需要昂贵的仪器设备，对检测材料的要求很高，需要提纯处理等，无法实现快速便捷的检测。目前的免疫筛选法都是依赖于抗体做的检测试剂盒，虽然有一些可以做到快速简单的检测，但是抗体制备过程比较复杂，批次之间有差异，也有一定的缺陷。
[0005]核酸适配体(aptamer)是指通过指数富集的配基系统进化技术(SELEX)筛选分离得到的DNA或者RNA分子，它可以与其他靶标如蛋白质、金属离子、小分子、多肽甚至整个细胞进行高亲和力和特异性的结合，因此在生化分析，环境监测，基础医学，新药合成等方面展示广阔的前景。核酸适配体与抗体相比分子量小，稳定性更好，易改造修饰，无免疫原性，制作周期短，可以通过人工合成等优势，免去了动物免疫、饲养、蛋白提取和纯化等一系列流程，因此核酸适配体是一种非常理想的分子探针。
[0006]基于SELEX的方法，筛选出结合特定小分子的核酸适配体，并将该核酸适配体用于小分子的检测，目前也被广泛研究。针对于万古霉素的核酸适配体还没有人公布，因此，本领域对针对万古霉素有高结合亲和力的核酸适配体存在需求。

技术实现思路

[0007]基于
技术介绍
存在的技术问题，本专利技术提出了一种特异性识别万古霉素的核酸适配体及其应用。
[0008]本专利技术提出了一种特异性识别万古霉素的核酸适配体，所述核酸适配体的核苷酸
序列包括以下三种序列中的至少一种：
[0009](1)SEQ ID NO:1
‑
3中任意一个所示的DNA序列；
[0010]SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列如下：
[0011]5’
TAGGACCCGCCTGGGAGAGTACGCCTTCTCGACCCGTGGAATCCTA 3
’
[0012]SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列如下：
[0013]5’
ATAGCTCGACACGAGGGCTCTCCGAGTGGAGTACGTGAGTCCTAGCCTAT 3
’
[0014]SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列如下：
[0015]5’
CGGCTCAGTGACCCCACAGGAGACTGTAGGTTGACCTCTTGTAGCCG 3
’
；
[0016](2)与SEQ ID NO:1
‑
3中任意一个所示的DNA序列具有60％以上同源性且特异性结合万古霉素的DNA序列，例如可以是与SEQ ID NO:1
‑
3中任意一个所示的DNA序列具有70％以上、80％以上、85％以上、90％以上、95％以上、或者99％以上同源性且特异性结合万古霉素的DNA序列；
[0017](3)由SEQ ID NO:1
‑
3中任意一个所示的DNA序列转录且特异性结合万古霉素的RNA序列。
[0018]优选地，所述核酸适配体的核苷酸序列被修饰且修饰后的核酸适配体特异性结合万古霉素，所述修饰选自磷酸化、甲基化、氨基化、巯基化、用硫取代氧、用硒取代氧和同位素化中的至少一种；条件是这样修饰后得到的核酸适配体序列具有合乎需要的性质，例如，可以具有与修饰前的母体核酸适配体序列相等或更高的结合万古霉素的亲和力，或虽然亲和力没有明显提升但是具有更高的稳定性。
[0019]换言之，以上不论是经部分取代或经过修饰后的核酸适配体序列，都具有原核酸适配体基本相同或类似的分子结构、理化性质和功能，都可应用于与万古霉素的结合。
[0020]本专利技术还提供了一种核酸适配体的缀合物，其是在所述核酸适配体的核苷酸序列上连接荧光标记物、放射性物质、治疗性物质、生物素、地高辛、纳米发光材料、小肽、siRNA和酶标记中的至少一种得到；条件是这样修饰后得到的核酸适配体序列具有合乎需要的性质，例如，可以具有与修饰前的母体核酸适配体序列相等或更高的结合万古霉素的亲和力，或虽然亲和力没有明显提升但是具有更高的稳定性。
[0021]本专利技术还提供了一种核酸适配体的衍生物，其是将所述核酸适配体或者所述核酸适配体的缀合物的核苷酸序列的骨架改造成硫代磷酸酯骨架而得，或者是将所述核酸适配体或者所述核酸适配体的缀合物改造成的肽核酸，且所述核酸适配体的衍生物特异性结合万古霉素。
[0022]以上不论是衍生出的核酸适配体还是衍生出的其他衍生物，都具有与原核酸适配体基本相同或类似的分子结构、理化性质和功能。
[0023]本专利技术还提供了所述的特异性识别万古霉素的核酸适配体、所述的核酸适配体的缀合物或者所述的核酸适配体的衍生物在检测万古霉素中的应用。
[0024]荧光检测是核酸适配体生物传感器中常用和有效的方法之一，荧光法灵敏度高，同时与有机样品溶液可相容，因此广泛应用于生物传感器的设计。核酸适配体本身无荧光，需要在反应体系内引入荧光基团引发光信号变化，从而进行检测。常见的方法为设计分子信标(Molecular beacon，MB)体系进行靶标的检测，该方法灵敏度高、响应快速、且可选择标记种类多。核酸适配体的分子信标荧光检测建立在荧光共振能量转移现象
(Fluorescence Resonance Energy Transfer，FRET)以及与靶标结合后构象发生变化的基础上。分子信标处于自由状态时，荧光基团和淬灭基团相距较近(约7～10nm)从而发生FRET现象，荧光基团发出的荧光被淬灭基团吸收并以热的形式散发，荧光几乎完全被淬灭而不被探测到。当分子信标与靶分子结合时，序列的结构会发生变化，使荧光淬灭基团的发卡被打开或者两条互补链分离开，因此荧光基团和淬灭基本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特异性识别万古霉素的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列包括以下三种序列中的至少一种：(1)SEQ ID NO:1
‑
3中任意一个所示的DNA序列；SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列如下：5
’
TAGGACCCGCCTGGGAGAGTACGCCTTCTCGACCCGTGGAATCCTA 3
’
SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列如下：5
’
ATAGCTCGACACGAGGGCTCTCCGAGTGGAGTACGTGAGTCCTAGCCTAT 3
’
SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列如下：5
’
CGGCTCAGTGACCCCACAGGAGACTGTAGGTTGACCTCTTGTAGCCG 3
’
；(2)与SEQ ID NO:1
‑
3中任意一个所示的DNA序列具有60％以上同源性且特异性结合万古霉素的DNA序列；(3)由SEQ ID NO:1
‑
3中任意一个所示的DNA序列转录且特异性结合万古霉素的RNA序列。2.根据权利要求1所述的特异性识别万古霉素的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列被修饰且修饰后的核酸适配体特异性结合万古霉素，所述修饰选自磷酸化、甲基化、氨基化、巯基化、用硫取代氧、用硒取代氧和同位素化中的至少一种。3.一种核酸适配体的缀合物，其特征在于，其是在权利要求1或2所述核酸适配体的核苷酸序列上连接荧光标记物、放射性物质、治疗性物质、生物素、地高辛、纳米发光材料、小肽、siRNA和酶标记中的至少一种得到。4.一种核酸适配体的衍生物，其特征在于，其是将权利要求1或2所述核酸适配体或者权利要求3所述核酸适配体的缀合物的核苷酸序列的骨架改造成硫代磷酸酯骨架而得，或者是将权利要求1或2所述核酸适配体或者权利要求3所述核酸适配体的缀合物改造成的肽核酸，且所述核酸适配体的衍生物特异性结合万古霉素。5.权利要求1或2所述的特异性识...

【专利技术属性】
技术研发人员：方晓娜，何磊，仇志锌，罗昭锋，
申请(专利权)人：安徽省昂普拓迈生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：