一种BHCR免疫交链式反应检测试剂及方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，尤其一种BHCR免疫交链式反应检测试剂及方法。本发明专利技术提供的检测试剂中，每个FA至少可以与三个FB结合，所制得的试剂稳定性强，灵敏度高，准确度高，更适合应用于生物标志物的临床即时检测。应用于生物标志物的临床即时检测。

【技术实现步骤摘要】
一种BHCR免疫交链式反应检测试剂及方法


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种BHCR免疫交链式反应检测试剂及方法。

技术介绍

[0002]即时检验(point
‑
of
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care
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testing，POCT)，是在患者床旁进行的检验，主要用于体检中心、急诊、重症监护、门诊等部门。主要检查项目包括：肿瘤标志物检测、心脏标记物检测、炎症标记物检测、肾脏标记物检测或血糖标记物检测等。其检测方法主要包括同位素放射免疫(RIA)、胶体金、酶联免疫(ELISA)、时间分辨荧光(TRFIA)和化学发学(CLIA)。这些检测方法的核心步骤主要包括两个部分，其一为通过免疫反应实现对待测物的识别，其二为使免疫反应产物产生信号并对其识别和报告。可见，对免疫反应产生的信号的检测和报告对检测结果准确性和灵敏性会产生至关重要的影响。
[0003]非线性杂交链式反应(BHCR)可以很容易地实现二次或指数放大。非线性杂交链式反应是一个无发夹的非线性HCR系统。系统主要包括用荧光团和猝灭团标记的双链substrate
‑
A、substrate
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B和对应的助剂A、助剂B。通过猝灭的底物动力学控制链分支生长产生荧光DNA树枝状大分子，实现二次或指数放大。其条件温和、不需要酶、方案简单、扩增效率优异。因此，BHCR可以与多种检测方法结合起来建立生物传感，用于超灵敏检测各种低含量分析物。但现有技术中的BHCR反应试剂发生非线性杂交链式反应时间和检测效率有待提高。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供提高检测效率的BHCR反应试剂及其应用。
[0005]本专利技术提供的BHCR反应试剂，其包括：trigger探针、FA探针、QA探针、助A、FB探针、QB探针和助B；
[0006]所述trigger探针的序列由隔离区和触发识别区组成；所述触发识别区由顺序连接的片段a、片段b、片段c组成，
[0007]所述FA探针的序列由n个重复单元和1个所述触发识别区的反向互补序列组成；每个所述重复单元由顺序连接的片段x、片段y和片段z组成；
[0008]所述助A的序列由n个片段y和1个片段c的反向互补序列组成；
[0009]所述QA探针的序列由片段b、片段c和n个片段y的反向互补序列组成；
[0010]其中，n≥3；
[0011]所述FB探针的序列由1个重复单元的反向互补序列和所述触发识别区序列组成；
[0012]所述助B的序列为QB探针5
’
端18～20bp的反向互补序列；
[0013]所述QB探针的序列由缺失5
’
端7bp的触发识别区的反向互补序列，和1个缺失3
’
端5bp的重复单元序列组成。
[0014]本专利技术中，所述trigger探针的隔离区序列为ployA；所述触发识别区的核酸序列
为TGACGAACTAGTTGATGAAGCTG，其中，所述片段a为TGACG，所述片段b为AACTAGTTGATG，所述片段c为AAGCTG。一些实施例中，所述隔离区为AAAAA。
[0015]本专利技术中，所述重复单元的序列为GTGTGCCTATTATGTCTCCTCCT，其中所述片段x为GT，所述片段y为GTGCCTATTATGTC，所述片段z为TCCTCCT。
[0016]一些实施例中，n为3或4。
[0017]本专利技术中，所述助B的序列为QB探针5
’
端20bp的反向互补序列。或者，所述助B的序列为QB探针5
’
端18bp的反向互补序列。
[0018]一些实施例中，所述trigger探针的5
’
端标记生物素，所述FA和QB的5
’
端标记荧光基团，所述FB和QA的3
’
端标记淬灭基团。一些实施例中，所述荧光基团为6
‑
FAM，所述淬灭基团为BHQ1。
[0019]本专利技术中，所述BHCR反应试剂在制备即时检验试剂中的应用。
[0020]本专利技术还提供了一种即时检验的试剂，其包括所述的BHCR反应试剂、包被捕获抗体的磁珠和亲和素标记的检测抗体。
[0021]一些实施例中，所述捕获抗体选自肿瘤标志物抗体、心脏标记物抗体、炎症标记物抗体、肾脏标记物抗体或血糖标记物抗体，
[0022]所述检测抗体为抗抗体。具体实施例中，所述检测抗体为抗人抗体。例如，兔抗人抗体、鼠抗人抗体或羊抗人抗体。
[0023]一些具体实施例中，所述肿瘤标志物抗体包括AFP、PSA、癌胚抗原(CEA)、癌抗原242(CA242)、神经元物异性烯醇化酶NSE、血清铁蛋白(SF)、胃泌素前体释放肽(PROGRP)或鳞状细胞癌抗原(SCC)。
[0024]本专利技术还提供了一种即时检测方法，其利用本专利技术提供的试剂对待测物进行检测。
[0025]一些实施例中，其检测方法包括：
[0026]将FA探针、QA探针形成双链后，与助A混合，记为试剂A。将FB探针、QB探针形成双链后，与助B混合，记为试剂B。将捕获抗体的载体与待测物孵育，然后与亲和素标记的检测抗体反应，获得产物I；将trigger探针、试剂A和试剂B共同孵育，获得产物II；将产物I和产物II共同孵育后，检测信号。
[0027]另一些实施例中，其检测方法包括：
[0028]将FA探针、QA探针形成双链后，与助A混合，记为试剂A。将FB探针、QB探针形成双链后，与助B混合，记为试剂B。将trigger探针与亲和素和检测抗体反应，获得产物i；将捕获抗体的载体与待测物孵育后与产物i反应，获得产物ii；将试剂A和试剂B共同孵育，获得产物iii；将产物ii与产物iii反应，检测信号。
[0029]一些实施例中，所述待测物为来自血液、组织、排泄物或分泌物的样品。本专利技术实施例中，所述样品为血液样品。
[0030]本专利技术提供的检测试剂中，每个FA至少可以与三个FB结合，所制得的试剂稳定性强，灵敏度高，准确度高，更适合应用于生物标志物的临床即时检测。
附图说明
[0031]图1示本专利技术试剂的反应原理。
具体实施方式
[0032]本专利技术提供了BHCR反应试剂及其应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。
[0033]本专利技术提供的BHCR反应试剂中，包括：trigger探针、FA探针、QA探针、助A、FB探针、QB探针和助B。
[0034]本专利技术所述反应试剂中的各种探针皆为DNA，更优选为单链本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.BHCR反应试剂，其特征在于，包括：trigger探针、FA探针、QA探针、助A、FB探针、QB探针和助B；所述trigger探针的序列由隔离区和触发识别区组成；所述触发识别区由顺序连接的片段a、片段b、片段c组成，所述FA探针的序列由n个重复单元和1个所述触发识别区的反向互补序列组成；每个所述重复单元由顺序连接的片段x、片段y和片段z组成；所述助A的序列由n个片段y和1个片段c的反向互补序列组成；所述QA探针的序列由片段b、片段c和n个片段y的反向互补序列组成；其中，n≥3；所述FB探针的序列由1个重复单元的反向互补序列和所述触发识别区序列组成；所述助B的序列为QB探针5
’
端18～20bp的反向互补序列；所述QB探针的序列由缺失5
’
端7bp的触发识别区的反向互补序列，和1个缺失3
’
端5bp的重复单元序列组成。2.根据权利要求1所述的BHCR反应试剂，其特征在于，所述trigger探针的隔离区序列为ployA；所述触发识别区的核酸序列为TGACGAACTAGTTGATGAAGCTG，其中，片段a为TGACG，所述片段b为AACTAGTTGATG，所述片段c为AAGCTG。3.根据权利要求1所述的BHCR反应试剂，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱曲波，张伯伦，陈传品，孙若为，
申请(专利权)人：湖南早晨纳米机器人有限公司，
类型：发明
国别省市：