用于甲基化检测的样本前处理试剂盒及前处理方法技术

本发明专利技术涉及一种用于甲基化检测的样本前处理试剂盒及前处理方法，试剂盒包括转化溶液、结合缓冲液、洗涤溶液、去磺化溶液、洗脱溶液、磁珠；其中，转化溶液包括：0.1~0.7M亚硫酸氢钠、0.1~1.2M亚硫酸镁、3~15M亚硫酸氢铵、0.05~0.5M亚硫酸铵、0.05~0.5M对苯二酚、0.01~0.5M DETA、0.1~2M四氢糠醇、1~4mM TEPA、灭菌水。本发明专利技术在亚硫酸盐转化溶液中加入保护成分，减少DNA转化过程中的降解量，大幅度提高转化后的DNA浓度，提高转化效率，进而降低了检测的成本，同时提高了PCR及后续分析技术的灵敏度，进而提高检测结果的准确性。进而提高检测结果的准确性。进而提高检测结果的准确性。

【技术实现步骤摘要】
用于甲基化检测的样本前处理试剂盒及前处理方法


[0001]本专利技术涉及一种用于甲基化检测的样本前处理试剂盒及前处理方法，适用于基因检测


技术介绍

[0002]DNA甲基化(DNAmethvlation)为DNA化学修饰的一种形式，能够在不改变DNA序列的前提下，改变遗传表现。所谓DNA甲基化是指在DNA甲基化转移酶的作用下，在基因组CpG二核苷酸的胞嘧啶5号碳位共价键结合一个甲基基团。大量研究说明，DNA甲基化能引起染色质结构，DNA构象，DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变，从而控制基因表达。DNA甲基化修饰研究手段：DNA亚硫酸盐转化，是使用亚硫酸氢钠将胞嘧啶转化为尿嘧啶，而5
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甲基胞嘧啶（5
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mC）保持完整，即未甲基化的胞嘧啶残基被脱氨成尿嘧啶，甲基化的胞嘧啶(5
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mC)残基不受影响，这使PCR扩增可将尿嘧啶视为胸腺嘧啶，将5
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mC或5
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hmC识别为胞嘧啶。这样便能够区分甲基化和未甲基化的胞嘧啶残基，从而提供有关DNA本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于甲基化检测的样本前处理试剂盒，其特征在于，包括转化溶液、结合缓冲液、洗涤溶液、去磺化溶液、洗脱溶液、磁珠；其中，所述转化溶液包括以下组分：0.1~0.7M亚硫酸氢钠、0.1~1.2M亚硫酸镁、3~15M亚硫酸氢铵、0.05~0.5M亚硫酸铵、0.05~0.5M对苯二酚、0.01~0.5M DETA、0.1~2M四氢糠醇、1~4mM TEPA、灭菌水。2.根据权利要求1所述的用于甲基化检测的样本前处理试剂盒，其特征在于，所述结合缓冲液包括以下组分：1~15M盐酸胍、5~20mM Tris、0.1～0.5％(V/V)冰醋酸、灭菌水。3.根据权利要求1所述的用于甲基化检测的样本前处理试剂盒，其特征在于，所述洗涤溶液包括以下组分：无水乙醇、灭菌水。4.根据权利要求1所述的用于甲基化检测的样本前处理试剂盒，其特征在于，所述去磺化溶液包括以下组分：5~20％50%无菌甘油、0.1~1M氢氧化钠、5~20mM氯化钠、无水乙醇、灭菌水。5.根据权利要求1所述的用于甲基化检测的样本前处理试剂盒，其特征在于，所述洗脱溶液包括以下组分：5~20mMTris、0.05~0.2mMEDTA、灭菌水。6.根据权利要求1所述的用于甲基化检测的样本前处理试剂盒，其特征在于，所述磁珠为羟基磁珠，粒径为400~600nm。7.一种用于甲基化检测的样本前处理方法，其特征在于，采用权利要求1~6中任一项所述的用于甲基化检测的样本前处理试剂盒，该前处理方法包括：S1、向含有5~40μL DNA样本的PCR管中加入100~200μL转化溶液，混匀后瞬时离心，然后将所述PCR管置于PCR仪上进行反应，得到第一产物...

【专利技术属性】
技术研发人员：王景，肖宇清，范贝贝，杨笑笑，张若寒，汪强虎，
申请(专利权)人：昂凯生命科技苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：