一种测定饮料中绿原酸类物质的方法技术

本发明专利技术涉及生物活性物质检测技术领域，具体公开了一种测定饮料中绿原酸类物质的方法。采用本发明专利技术的方法可以较好的分离新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、1,5

【技术实现步骤摘要】
一种测定饮料中绿原酸类物质的方法


[0001]本专利技术涉及生物活性物质检测
，尤其是涉及一种测定饮料中绿原酸类物质的方法。

技术介绍

[0002]茶饮料中含有丰富的生理活性物质，目前已知的化学成分有500多种，主要有咖啡碱、可可碱、茶叶碱、游离的茶素、茶多酚及多种维生素、矿物质、蛋白质和糖类等物质，其中绿原酸是茶多酚中的酚酸类物质，是部分茶饮料的功能性评价指标之一。
[0003]绿原酸(chlorogenic acid，CGA)是由咖啡酸和奎尼酸组成的缩酚酸，广泛存在于多种植物之中，具有多种药理作用，如抗菌、止血、消炎、利胆等，临床上用于治疗急性细菌感染等引起的疾病，可起到止血、增加白血球、抗病毒、缩短血凝时间等作用。目前我国尚无茶饮料中绿原酸的检测方法标准，更未对其含量作限量要求。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种测定饮料中绿原酸类物质的方法。采用本专利技术的方法能较好的分离绿原酸，一次性可以检测饮料中7种绿原酸，灵敏度高、定性定量准确。
[0005]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：
[0006]第一目的，本专利技术提供了一种测定饮料中绿原酸类物质的方法，包括以下步骤：
[0007]1)标准品溶液的制备：
[0008]分别称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、1,5
‑
二咖啡酰奎尼酸标准品，用甲醇溶解并稀释，配制成浓度分别为10ng/mL/>‑
500ng/mL的新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、1,5
‑
二咖啡酰奎尼酸混合标准工作溶液；
[0009]2)供试品溶液的制备：
[0010]取饮料溶液，加入甲醇混匀，水浴超声，过滤，即得供试品溶液；
[0011]3)液相色谱
‑
串联质谱测定：
[0012]吸取标准品溶液和供试品溶液注入色谱柱，测定，即得；
[0013]其中，色谱条件为：
[0014]柱温：25
‑
40℃；
[0015]流动相：2mmol/L甲酸铵(含0.1％甲酸)
‑
乙腈；
[0016]流速：0.3
‑
0.4mL/min；
[0017]进样量：2.0μL；
[0018]供试品溶液中绿原酸类物质的含量按式(1)计算：
[0019][0020]X——供试品溶液中绿原酸类物质的含量mg/kg；
[0021]C——供试品溶液色谱峰对应的绿原酸浓度ng/mL；
[0022]V——定容体积mL；
[0023]m——样品称样量g；
[0024]f——供试品溶液稀释的倍数。
[0025]采用本专利技术的技术方案可以较好的分离新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、1,5
‑
二咖啡酰奎尼酸等7种绿原酸，可以一次性检测饮料中7种绿原酸，该检测方法具有灵敏度高、定性定量准确等优点。
[0026]通过比较流动体系，当流动相体系为2mmol/L甲酸铵(含0.1％甲酸)
‑
乙腈时有较高的响应和较好的分离效果，满足要求。
[0027]作为本专利技术所述测定饮料中绿原酸类物质的方法的优选实施方式，所述柱温为25℃；所述流速为0.4mL/min。
[0028]柱温越高，响应越低，保留时间整体提前，系统压力下降；柱温的变化，异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、1,5
‑
二咖啡酰奎尼酸的分离度没有明显的影响。因此，柱温选择25℃较为合适。
[0029]当流速逐渐增大时，异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、1,5
‑
二咖啡酰奎尼酸的分离度越好。因此，流速选择0.4mL/min。
[0030]作为本专利技术所述测定饮料中绿原酸类物质的方法的优选实施方式，所述色谱柱为ACQUITY UPLC BEH Shield RP18。
[0031]作为本专利技术所述测定饮料中绿原酸类物质的方法的优选实施方式，所述步骤2)中，所述甲醇的浓度为50％
‑
90％。
[0032]当提取溶剂为高有机相比例的甲醇时，有利于目标物的提取，特别是对于异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、1,5
‑
二咖啡酰奎尼酸，有机相的比例要大于50％，才有更好的提取效果。乙腈的提取效率最差，原因是提取液出现分层情况，影响提取效果；水对于异绿原酸B、异绿原酸B、1,5
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二咖啡酰奎尼酸、异绿原酸C的提取效率较低，对其余三种物质有较好的提取效果。
[0033]作为本专利技术所述测定饮料中绿原酸类物质的方法的优选实施方式，所述甲醇的浓度为90％。
[0034]当甲醇的浓度为90％时，有利于上述7种绿原酸的提取，提取到的绿原酸含量较高。
[0035]作为本专利技术所述测定饮料中绿原酸类物质的方法的优选实施方式，所述步骤2)中，所述超声的时间为10min
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60min。超声时间对提取绿原酸的影响不大。
[0036]作为本专利技术所述测定饮料中绿原酸类物质的方法的优选实施方式，所述步骤1)中，所述甲醇的浓度为70％。
[0037]作为本专利技术所述测定饮料中绿原酸类物质的方法的优选实施方式，所述质谱的具体条件为：
[0038]a)离子源：电喷雾离子源；
[0039]b)扫描模式：负离子扫描；
[0040]c)检测方式：多反应监测；
[0041]d)喷雾电压：
‑
4500V；
[0042]e)离子源温度：500℃；
[0043]f)雾化器和辅助器：55psi；
[0044]g)气帘气：10psi；
[0045]e)化合物离子参数如下：
[0046]新绿原酸，定性离子对为353.1/191.0、353.1/179.0m/z，定量离子对为353.1/191.0m/z；
[0047]绿原酸，定性离子对为353.1/191.0、353.1/85.1m/z，定量离子对为353.1/191.0m/z；
[0048]隐绿原酸，定性离子对为353.0/173.0、353.0/178.9m/z，定量离子对为353.0/173.0m/z；
[0049]1,5
‑
二咖啡酰奎尼酸，定性离子对为515.1/353.1、515.1/191.0m/z，定量离子对为515.1/191.0m/z；
[0050]异绿原酸B，定性离子对为515.1/353.0、515.1/173.1m/z，定量离子对为515.1/353.0m/z；
[0051]异绿原酸A，定性离子对为515.1/353.0、515.1/191.1m/z，定量离子对为515.1/353.0m/z；
[0052]异绿本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种测定饮料中绿原酸类物质的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)标准品溶液的制备：分别称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、1,5
‑
二咖啡酰奎尼酸标准品，用甲醇溶解并稀释，配制成浓度分别为10ng/mL
‑
500ng/mL的新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、1,5
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二咖啡酰奎尼酸的混合标准工作溶液；2)供试品溶液的制备：取饮料溶液，加入甲醇混匀，水浴超声，过滤，即得供试品溶液；3)液相色谱
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串联质谱测定：吸取标准品溶液和供试品溶液注入色谱柱，测定，即得；其中，色谱条件为：柱温：25
‑
40℃；流动相：2mmol/L甲酸铵(含0.1％甲酸)
‑
乙腈；流速：0.3
‑
0.4mL/min；进样量：2.0μL；供试品溶液中绿原酸类物质的含量按式(1)计算：X——供试品溶液中绿原酸类物质的含量mg/kg；C——供试品溶液色谱峰对应的绿原酸浓度ng/mL；V——定容体积mL；m——样品称样量g；f——供试品溶液稀释的倍数。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述柱温为25℃；所述流速为0.4mL/min。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱柱为ACQUITY UPLC BEH Shield RP18。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中，所述甲醇的浓度为50％
‑
90％。5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈茹，许佩勤，许雪儿，利通，冯志强，庄俊钰，林丹，孙艺，钟舒洁，李循媛，
申请(专利权)人：广东省食品工业研究所有限公司，
类型：发明
国别省市：