一种农药残留快速检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种农药残留快速检测试剂盒，主要由乙酰胆碱酯酶、底物、显色剂和磷酸盐缓冲溶液组成，其中所述乙酰胆碱酯酶采用新鲜海鱼红鳍鲷和/或黄花鱼提取获得，所述底物为硫代乙酰胆碱，所述显色剂由5,5，

【技术实现步骤摘要】
一种农药残留快速检测试剂盒及其制备方法


[0001]本专利技术属于农药残留快速检测
，具体涉及一种农药残留快速检测试剂盒及其制备方法。

技术介绍

[0002]气相色谱、液相色谱等实验室检测方法是检测农药残留的常规方法，灵敏度高，特异性强，但检测费用昂贵，且受场地的限制。我国农产品通过农贸市场渠道销售的比重近70％，流通性强，单靠实验室检测方法和仪器是难于及时、快速而全面地从源头监控食品安全状况。
[0003]根据我国当前的国情，对农副产品批发市场以及超市等食品零售网点进行食品安全监督，乃至经营商自身管理，都需要配以现场抽样和快速检测。现场快速检测作为发现食品安全问题的第一步，具有不可替代的作用。
[0004]CN101503731A中公开了一种农药残毒快速检测试剂盒的制备方法，是含有乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶混合物的农药残毒快速检测试剂盒，由胆碱酯酶，底物，显色剂(DTNB)和磷酸缓冲液组成。
[0005]中国专利文献CN106191212A中公开了一种农药残毒快速检测试剂盒，包括胆碱酯酶酶粉、底物、显色剂和缓冲剂，胆碱酯酶酶粉为胆碱酯酶与稳定剂的复合物。
[0006]应用上述专利技术专利虽然在小区域范围内解决了部分农产品的有机磷和氨基甲酸酯类的农药残留问题，但是上述这些专利产品存在以下缺点：胆碱酯酶制作繁琐，制作成本高，制作时间长，难以规模化生产满足市场需求。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种农药残留快速检测试剂盒，该试剂盒含有来自海鱼红鳍鲷和/或黄花鱼的乙酰胆碱酯酶，乙酰胆碱酯酶酶源丰富易得，且酶活好，对多种有机磷和氨基甲酸酯类农药的灵敏度高，保存时间长，检测限能达到相关要求。
[0008]本专利技术的目的还在于提供上述农药残留快速检测试剂盒的制备方法，该制备方法步骤简洁，成本低。
[0009]本专利技术的上述第一个目的可以通过以下技术方案来实现：一种农药残留快速检测试剂盒，主要由乙酰胆碱酯酶、底物、显色剂和磷酸盐缓冲溶液组成，其中所述乙酰胆碱酯酶采用新鲜海鱼红鳍鲷和/或黄花鱼提取获得，所述底物为硫代乙酰胆碱，所述显色剂由5,5，
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二硫代
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2,2
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二硝基苯甲酸(DTNB)和碳酸氢钠组成。
[0010]优选的，所述乙酰胆碱酯酶采用新鲜海鱼提取获得的具体过程包括：
[0011](1)选取新鲜海鱼红鳍鲷和/或黄花鱼的肌肉组织，与预冷后的磷酸盐缓冲溶液进行匀浆，得到海鱼肌肉组织酶液；
[0012](2)取步骤(1)中制得的海鱼肌肉组织酶液，加入表面活性剂、稳定剂和防腐剂，并用磷酸盐缓冲液定容，得到乙酰胆碱酯酶混合液；
[0013](3)将步骤(2)中制得的混合酶液水浴后冷却，再离心处理，离心后取上清液，即得到乙酰胆碱酯酶酶液。
[0014]在该采用新鲜海鱼提取获得乙酰胆碱酯酶的过程中：
[0015]优选的，步骤(1)中所述磷酸盐缓冲溶液的pH值为6.0～8.5，其与新鲜海鱼的肌肉组织的用量关系为6～25mL：1g。
[0016]优选的，步骤(1)中所述磷酸盐缓冲溶液由无水磷酸氢二钾和磷酸二氢钾用蒸馏水溶解制成，其中无水磷酸氢二钾的浓度为10～15g/L，所述磷酸二氢钾的浓度为2.5～4.0g/L，本申请中所采用的磷酸盐缓冲溶液均在此范围内。
[0017]优选的，步骤(2)中所述海鱼肌肉组织酶液的用量为乙酰胆碱酯酶混合液总体积的3～5％。
[0018]优选的，步骤(2)中所述的表面活性剂为吐温
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80、羟丙基甲基纤维素和聚乙二醇中的一种或两种的组合，其用量为乙酰胆碱酯酶混合液总体积的0.05～5％；所述稳定剂为甘露醇、海藻糖和丙二醇中的一种或两种的组合，其用量为乙酰胆碱酯酶混合液总体积的3～8％；所述防腐剂为山梨酸钾、苯甲酸钠和脱氢乙酸钠中的一种或两种的组合，其用量为乙酰胆碱酯酶混合液总质量的2～10％。
[0019]优选的，步骤(3)中水浴时在35～37℃的条件下水浴12～30min，然后冷却至室温；离心处理时使用离心机以5000～12000r/min离心10～30min。
[0020]优选的，所述硫代乙酰胆碱的浓度为6～10mg/mL，采用水配制，更佳的是采用蒸馏水配制。
[0021]优选的，所述显色剂中5,5，
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二硫代
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2,2
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二硝基苯甲酸的浓度为7～10mg/mL，所述碳酸氢钠的浓度为0.7～0.9mg/mL，采用磷酸盐缓冲溶液配制。
[0022]本专利技术的上述第二个目的可以通过以下技术方案来实现：上述的农药残留快速检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
[0023](1)选取新鲜海鱼的肌肉组织，与预冷后的磷酸盐缓冲溶液进行匀浆，得到海鱼肌肉组织酶液；
[0024](2)取步骤(1)中制得的海鱼肌肉组织酶液，加入表面活性剂、稳定剂和防腐剂，并用磷酸盐缓冲液定容，得到乙酰胆碱酯酶混合液；
[0025](3)将步骤(2)中制得的混合酶液水浴后冷却，再离心处理，离心后取上清液，即得到乙酰胆碱酯酶酶液；
[0026](4)选取硫代乙酰胆碱用蒸馏水溶解，制得底物；
[0027](5)取5,5，
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二硫代
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2,2，
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二硝基苯甲酸和碳酸氢钠，用磷酸盐缓冲溶液溶解，制得显色剂；
[0028](6)将乙酰胆碱酯酶酶液、底物、磷酸盐缓冲溶液和显色剂单独包装，在进行农药残留快速检测时，分别取出即可使用。
[0029]与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：
[0030](1)本专利技术中的农药残留快速检测试剂盒中含有来源于海鱼红鳍鲷和/或黄花鱼的乙酰胆碱酯酶，该乙酰胆碱酯酶的酶活好、对多种有机磷和氨基甲酸酯类农药的灵敏度高、保存时间长、能达到相关部门对果蔬农残的监管要求，且酶源丰富易得，制备步骤简单，可达到降低生产成本的目的；
[0031](2)本专利技术中的农药残留快速检测试剂盒可广泛应用于政府部门的食品安全监管、连锁型餐饮店、连锁型超市、大型种植养殖基地、食品生产企业以及有集体食堂的各类学校、医院、机关、企事业单位等。
具体实施方式
[0032]下面将通过具体实施方式，对本专利技术的技术方案做进一步的详细阐述。
[0033]实施例1
[0034]本实施例提供的用于快速检测农药残留的试剂盒，所述试剂盒主要由乙酰胆碱酯酶、底物、显色剂和磷酸盐缓冲溶液组成，其中乙酰胆碱酯酶采用新鲜海鱼红鳍鲷提取获得，底物为硫代乙酰胆碱，显色剂由5,5，
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二硫代
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2,2
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二硝基苯甲酸(DTNB)和碳酸氢钠组成。
[0035]其中：
[0036]乙酰胆碱酯酶的制备过程为：
[0037](1)将新鲜的红鳍鲷去骨、去皮，得到其肌肉组织，然后与预冷后的pH值在6.0本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种农药残留快速检测试剂盒，其特征是主要由乙酰胆碱酯酶、底物、显色剂和磷酸盐缓冲溶液组成，其中所述乙酰胆碱酯酶采用新鲜海鱼红鳍鲷和/或黄花鱼提取获得，所述底物为硫代乙酰胆碱，所述显色剂由5,5，
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二硫代
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2,2
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二硝基苯甲酸和碳酸氢钠组成。2.根据权利要求1所述的农药残留快速检测试剂盒，其特征是：所述乙酰胆碱酯酶通过以下方法制备获得：(1)选取新鲜海鱼红鳍鲷和/或黄花鱼的肌肉组织，与预冷后的磷酸盐缓冲溶液进行匀浆，得到海鱼肌肉组织酶液；(2)取步骤(1)中制得的海鱼肌肉组织酶液，加入表面活性剂、稳定剂和防腐剂，并用磷酸盐缓冲液定容，得到乙酰胆碱酯酶混合液；(3)将步骤(2)中制得的混合酶液水浴后冷却，再离心处理，离心后取上清液，即得到乙酰胆碱酯酶酶液。3.根据权利要求2所述的农药残留快速检测试剂盒，其特征是：步骤(1)中所述磷酸盐缓冲溶液的pH值为6.0～8.5，其与新鲜海鱼的肌肉组织的用量关系为6～25mL：1g。4.根据权利要求2所述的农药残留快速检测试剂盒，其特征是：步骤(2)中所述海鱼肌肉组织酶液的用量为乙酰胆碱酯酶混合液总体积的3～5％。5.根据权利要求2所述的农药残留快速检测试剂盒，其特征是：步骤(2)中所述表面活性剂为吐温
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80、羟丙基甲基纤维素和聚乙二醇中的一种或两种的组合，其用量为乙酰胆碱酯酶混合液总体积的0.05～5％；所述稳定剂为甘露醇、海藻糖和丙二醇中的一种或两种的组合，其用量为乙酰胆碱酯酶混合液总体积的3～8％；所述防腐剂为山梨酸钾、苯甲酸钠和脱氢乙酸钠中的一种或两...

【专利技术属性】
技术研发人员：林丹，廖玮，罗小宝，李绮敏，陈茹，郭丽仪，郑泽洋，杨安源，蚁碧珍，冯志强，庄俊钰，
申请(专利权)人：广东省食品工业研究所有限公司，
类型：发明
国别省市：