The invention discloses a preparation method of a compound enzyme solution for rapid detection of pesticide residues, which comprises the following steps: (1) cleaning fresh earthworms and cooling them, then homogenizing them with the phosphate buffer solution after cooling to obtain earthworm serum enzyme solution; (2) removing bones and skins of fresh yellow fin sea bream, obtaining its muscle tissue, and then buffering with cold prognosis phosphate. The solution was homogenized to obtain the muscle tissue enzyme solution of yellow fin sea bream; (3) The serum enzyme solution of earthworm and muscle tissue enzyme solution of yellow fin sea bream were taken, and the two enzymes were mixed, added Triton X 114 or Triton X 100, then added stabilizer and phosphate buffer solution to prepare the mixed enzyme solution; (4) The mixed enzyme solution obtained by step (3) was heated at 35-37 C, then cooled to room temperature, and then cooled to room temperature. The supernatant was centrifuged by a centrifuge to obtain the mixed enzyme solution. The complex enzyme solution is acetylcholinesterase complex enzyme solution, which has abundant enzyme sources and simple extraction. It can effectively shorten the preparation time and production cost of acetylcholinesterase.
【技术实现步骤摘要】
一种用于快速检测农药残留的复配酶液的制备方法
本专利技术属于生物检测领域,具体涉及一种用于快速检测农药残留的复配酶液的制备方法。
技术介绍
随着人们生活水平的不断提高,果蔬中农药残留的问题越来越受到社会各界的关注。有机磷和氨基甲酸酯类农药是我国目前使用量最大的农药,人摄入高剂量的农药会引起急性中毒,而长期摄入低剂量浓度的农药会引起神经传导阻碍等疾病。因此,果蔬农药残留的检测对于食品安全至关重要。传统的农药残留分析方法需要昂贵的仪器设备和专业技术人才,并且受到场地的限制。随着快速检测农药残留技术的出现,上述技术限制被打破。一般快速检测农药残留技术所应用原理是:在一定条件下,有机磷和氨基甲酸酯类农药对乙酰胆碱酯酶的活性具有抑制作用,其抑制率与农药的浓度呈正相关。乙酰胆碱酯酶(AChE)是生物神经传导中的一种关键酶,在神经传导中起着至关重要的作用,能高效水解神经传递物质乙酰胆碱(ACh),从而使胆碱能神经信号的传递终止。同时,乙酰胆碱酯酶也是有机磷和氨基甲酸酯类农药的靶向酶,有机磷和氨基甲酸酯类农药能使乙酰胆碱酯酶的活性显著降低。利用这一特性,在农药检测中,乙酰胆碱酯酶的活性变化可作为农药毒理学的一个敏感指标。因此,可以用乙酰胆碱酯酶的活性受抑制程度来检测果蔬中的农药残留量。目前乙酰胆碱酯酶提取的提取方法众多。中国专利文献CN101709304A中公开了突变的家蝇乙酰胆碱酯酶基因及其表达载体,其包含乙酰胆碱酯酶的提取方法,具体为通过基因工程改造得到突变的家蝇乙酰胆碱酯酶基因及其表达载体,在酵母细胞中表达突变基因,以此来获得有活性的乙酰胆碱酯酶;中国专利文献CN1 ...
【技术保护点】
1.一种用于快速检测农药残留的复配酶液的制备方法,其特征在于,包含以下步骤:(1)将新鲜的蚯蚓清洗干净后冷却,然后与预冷后的磷酸盐缓冲溶液进行匀浆,得到蚯蚓血清酶液;(2)将新鲜的黄鳍鲷去骨、去皮,得到其肌肉组织,然后与预冷后的磷酸盐缓冲溶液进行匀浆,得到黄鳍鲷肌肉组织酶液;(3)取步骤(1)制得的蚯蚓血清酶液和步骤(2)制得的黄鳍鲷肌肉组织酶液,将两种酶液混合,加入TritonX‑114或TritonX‑100,再添加稳定剂和磷酸盐缓冲溶液制得混合酶液;(4)将步骤(3)制得的混合酶液在35~37℃的条件下加热,然后冷却至室温,并使用离心机离心,离心后取上清液,得到复配酶液。
【技术特征摘要】
1.一种用于快速检测农药残留的复配酶液的制备方法,其特征在于,包含以下步骤:(1)将新鲜的蚯蚓清洗干净后冷却,然后与预冷后的磷酸盐缓冲溶液进行匀浆,得到蚯蚓血清酶液;(2)将新鲜的黄鳍鲷去骨、去皮,得到其肌肉组织,然后与预冷后的磷酸盐缓冲溶液进行匀浆,得到黄鳍鲷肌肉组织酶液;(3)取步骤(1)制得的蚯蚓血清酶液和步骤(2)制得的黄鳍鲷肌肉组织酶液,将两种酶液混合,加入TritonX-114或TritonX-100,再添加稳定剂和磷酸盐缓冲溶液制得混合酶液;(4)将步骤(3)制得的混合酶液在35~37℃的条件下加热,然后冷却至室温,并使用离心机离心,离心后取上清液,得到复配酶液。2.根据权利要求1所述的用于快速检测农药残留的复配酶液的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中,蚯蚓与磷酸盐缓冲溶液以质量比1:1~1:4的比例进行匀浆;所述步骤(2)中,黄鳍鲷肌肉组织与磷酸盐缓冲溶液以质量比1:1~1:4的比例进行匀浆。3.根据权利要求2所述的用于快速检测农药残留的复配酶液的制备方法,其特征在于,步骤(...
【专利技术属性】
技术研发人员:李绮敏,林丹,许银叶,钟肖琼,廖玮,张家意,王莹,林涵梅,龚晓莹,庄俊钰,冯志强,
申请(专利权)人:广东省食品工业研究所有限公司,
类型:发明
国别省市:广东,44
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