一种基于CRISPR/Cas9系统敲除猪细胞Y染色体的方法技术方案

本发明专利技术涉及一种基于CRISPR/Cas9系统敲除猪细胞Y染色体的方法，属于生物技术领域，该方法主要包括：(1)根据生物信息学找出位于Y染色体上的特异靶向重复序列并设计相应的gRNA；(2)进行CRISPR/Cas9载体的制备；(3)将构建好的载体电转入公猪胎儿成纤维细胞中，并通过q

【技术实现步骤摘要】
一种基于CRISPR/Cas9系统敲除猪细胞Y染色体的方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种基于CRISPR/Cas9系统敲除猪细胞Y染色体的方法。

技术介绍

[0002]染色体作为生物遗传物质的载体，对当前生命遗传研究开展尤为重要。染色体消除技术(Chromosome elimination technology)作为近年来基因编辑技术不断成熟发展的产物，在动物模型构建、家畜育种改良中的性别控制、特定染色体的功能研究以及人类非整倍体疾病治疗等领域具有重要的应用价值。目前通过该技术已成功在人、小鼠、斑马鱼等物种上实现了特定染色体的消除，然而打靶效率低、非靶点的额外失活及操作过程的繁琐性大大制约了该技术的发展。但随着新一代CRISPR/Cas9技术的出现，灵活的靶点选择、较高的编辑效率以及对于靶点多重切割的可能性使该技术的普及成为了可能。
[0003]目前，研究者们已通过锌指核酸酶(ZFN)技术、Cre/loxP系统、TKNEO基因敲入等多种方法实现了目标染色体的敲除，但这些方法具有较高门槛，极大限制该技术在生产科研中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.基于CRISPR/Cas9系统用于敲除猪细胞Y染色体的sgRNA，其特征在于：所述的sgRNA靶点序列为AAGAAGCGCTCTAGAACAGG，sgRNA序列为CACCGAAGAAGCGCTCTAGAACAGG。2.根据权利要求1所述的基于CRISPR/Cas9系统用于敲除猪细胞Y染色体的sgRNA，其特征在于：所述猪细胞为猪胎儿成纤维细胞。3.根据权利要求1所述的基于CRISPR/Cas9系统用于敲除猪细胞Y染色体的sgRNA在猪细胞Y染色体消除方面的应用。4.一种基于CRISPR/Cas9系统敲除猪细胞Y染色体的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、根据生物信息学找出位于Y染色体上的...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴珍芳，孟繁明，杨化强，霍梦飞，郑恩琴，杨杰，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：