一种植物circRNA表达框架及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种植物circRNA表达框架及其应用，属于分子生物学技术领域。本发明专利技术通过将Vv

【技术实现步骤摘要】
一种植物circRNA表达框架及其应用


[0001]本专利技术涉及分子生物学
，具体涉及一种植物circRNA表达框架及其应用。

技术介绍

[0002]circRNA指通过反式剪接形成的共价闭合环形RNA分子。随着高通量测序和生物信息学技术发展，发现circRNA在多种生物中广泛存在，且具备高稳定性、序列保守性及组织特异性等特征。近五年，植物circRNA 鉴定的报道共涉及逾30个物种，包括水稻、拟南芥、烟草、葡萄等。植物circRNA具有时空表达特异性，且在逆境胁迫过程有些circRNA的表达量会发生显著性变化。
[0003]高效率的过表达载体对于研究circRNA的功能至关重要。专利技术人在前期研究中基于反向互补序列辅助自身侧翼内含子策略，开发了一种植物circRNA过表达载体及其构建方法(CN 109943586A)，可有效地过表达植物circRNA。但是，在后续使用过程中发现该植物circRNA过表达载体存在以下问题：
[0004](1)一些低表达量的circRNA，如Vv
‑
circRNA_4328和Vv
‑
circRNA_4363，虽然可提高环形RNA的表达效率，但远低于相应线性RNA的表达量；
[0005](2)当circRNA为多外显子情况且存在长片段内含子时，连接载体操作难度大。
[0006]因此，对于专利CN 109943586A所设计的植物circRNA过表达载体仍需进一步的改进和完善。

技术实现思路

[0007]针对上述现有技术，本专利技术的目的是提供一种植物circRNA表达框架及其应用。利用本专利技术的植物circRNA表达框架能够大幅提高circRNA环化效率，降低含长内含子circRNA构建载体的难度，为研究植物circRNA的功能提供有效方法。
[0008]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0009]本专利技术的第一方面，提供一种植物circRNA表达框架，包括：Vv
‑
circSIZ1上游侧翼内含子序列、目标circRNA成熟体序列和Vv
‑
circSIZ1下游侧翼内含子序列；
[0010]所述Vv
‑
circSIZ1上游侧翼内含子序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；
[0011]所述Vv
‑
circSIZ1下游侧翼内含子序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0012]具体如下：
[0013]Vv
‑
circSIZ1上游侧翼内含子序列：
[0014]TATATGTATCCTGTAATGGGCTTGCGGTTGGACTTGAAATCACGAATGATATCATGCTAAGGTTGTCTTACATCCATAGTCAAACCTATTTGCTGCCCGACACTTGCTTTGTACATACATGATTCAGAATGATTTTAAAGAATGCAGCATGTTGCTCTCCCTTTCCCTCTCCTCTTTTTCTTTTTAATAGGTAAATGCAGATTGAATAAAAATTAAAAGTATACATGGCATATACAACACAAACAAAAAGGAAGAAGGTGGGAGCCCTCTCCTCTTCTGTAGCTCCTCTTCCTCAAACTGGCCTTCTTAGGTTTTTATTTTGGTCGGGTCCTCTTTTTTTCCCTTTAGGGATTCATGTGCTTGTTATGTGTTTTGTCCAGAGAAGGCTTTAAACTATGTTTTTTGGGGCTATCAACTTGGTCTTATTAATTCCTAAATATGAAGTTTTAATTCA
GTGTCTCCACTATGAAAAATCTCAAGTGTTTGGCCTTCTTGCGCAG
[0015]Vv
‑
circSIZ1下游侧翼内含子序列：
[0016]GTGAGTTTTCTCTCTGCTAATGCACTTCTGTTTCTGGACTCTTATGGTTTATGATCCTTGTTTTTTTATTCATTCTTGGACCTCTGTAGTAATTCTTGATTTGGGATAAACTTGCAAAAAGGTTTTTGTTTTATTGTTTGAATAGAATTACTTTAAGGACTTATATTGAAACTTATACTCACTGCTGATTTAGTTTTTGCAAAAGCCATTATGGTTTAATGTCATATGGAACCTATAAAAAAAGGTCTAATGTTATATGTACTTTGCTGTAAAATCCAATAAATAGGTGATTTATGGCTTTAAAAATTTGTCTGGCTTGCCATTAAAGAAGAGGAATCAGTAACCTAAAGTTCTATCAAGAAAGAACCTGGTAGAGAAGTGTGAGTTGAGGATGGAGGATATGGTGATGCTTAGTGTTGGTGGAAGAGAACTCATGAAATTTTCTGTTTTCCTTTTGGGAGGTGAAGTGGAGTTGGTATATTACATTTCAATCTGATTTA
[0017]所述目标circRNA成熟体序列中不包含自身内含子和自身侧翼内含子。目标circRNA可根据实际应用需要来确定。优选的，目标circRNA选自Vv
‑
circRNA_4328、Vv
‑
circRNA_4363和Vv
‑
circRNA_1975；其成熟体序列分别如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示。具体如下：
[0018]SEQ ID NO.3：
[0019]GTCTGTGCAGGGGAAGCACGATTGGGGTTTGCTATGGGAGAAATGCAGATGACCTCCCCACACCAGATAAAGTAGCACAGCTGGTTCAGCTTCACAAGATTAAATATTTGAGGATTTATGACTCTAATATTCAGGTTCTTAAGGCCTTTGCTAACACTGGGGTTGAACTCATGATTGGGATTTCGAATTCAGACTTACTCCCATTTTCCCAGTTCCAGTCTAATGCAGACACTTGGCTGAGGAATAGTATTCTTCCATACTACCCAGCCACAAGGATCACACACATAACTGTCGGTGCTGAAGTCACAGAAAGCCCCAATAATGCCTCTTCTATGGTGGTACCTGCCATGAAAAATGTCCTCACAGCTCTACGAAAAGCTGGTCTGCATAAGAAGATCAAAGTTTCAAGTACCCATTCCCTAGGGATTTTGTCTCGGTCATTCCCACCCTCTGCAGGGGCTTTTAATAGCAGCCATGCATTCTTTCTCAAACCCATGTTGGAATTTCTTGCTGAGAATCAGTCTCCTTTCATGGTTGATATC本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种植物circRNA表达框架，其特征在于，包括：Vv
‑
circSIZ1上游侧翼内含子序列、目标circRNA成熟体序列和Vv
‑
circSIZ1下游侧翼内含子序列；所述Vv
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circSIZ1上游侧翼内含子序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述Vv
‑
circSIZ1下游侧翼内含子序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。2.根据权利要求1所述的植物circRNA表达框架，其特征在于，所述目标circRNA成熟体序列中不包含自身内含子和自身侧翼内含子。3.根据权利要求2所述的植物circRNA表达框架，其特征在于，目标circRNA成熟体序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5所示。4.一种植物circRNA过表达载体，其特征在于，所述植物circRNA过表达载体含有权利要求1
‑
3任一项所述的植物circRNA表达框架。5.根据权利要求4所述的植物circRNA过表达载体，其特征在于，所述植物circRNA过表达载体中还包括：载体骨架。6.权利要求4或5所述的植物circRNA过表达载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备Vv
‑
circSIZ1上游侧翼内含子序列
‑
目标circRNA成熟体序列
‑
Vv
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circSIZ1下游侧翼内含子序列；(2)将所述Vv
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：高振，杜远鹏，苏一凡，孙宝箴，李静，姚玉新，郑成超，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：