一种靶向长链非编码的双链RNA及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种靶向长链非编码的双链RNA，其正义链的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。该双链RNA能够抑制血吸虫的生长发育，减少虫卵产生，有效减轻宿主肝脏的病理损伤。本发明专利技术还提供该双链RNA在制备抗血吸虫药物中的应用。通过动物实验，发现其对于血吸虫的虫体发育阶段具有较好的抑制效果，能够有效抑制虫体的生长发育和雌虫产卵，以及减轻对宿主的病理损伤，具有较大的应用价值和前景。具有较大的应用价值和前景。具有较大的应用价值和前景。

【技术实现步骤摘要】
一种靶向长链非编码的双链RNA及其应用


[0001]本专利技术涉及分子生物学及生物医药
，具体涉及一种用于抑制血吸虫生长和产卵的靶向长链非编码的双链RNA及其应用。

技术介绍

[0002]血吸虫病是一种由血吸虫感染引起的人畜共患寄生虫病，被世界卫生组织认定为继肠蠕虫病之后世界上第二大被忽视的热带疾病。在全世界范围内，约有2.29亿人被感染。我国流行的主要是日本血吸虫，集中分布于长江中下游流域。血吸虫病的病理损伤和传播主要是由雌雄虫合抱生殖发育成熟之后，雌虫产生的大量虫卵所导致的。因此，深入研究日本血吸虫的生殖发育过程能为抗血吸虫疫苗和药物开发提供新的思路。
[0003]目前，包括申请人在内的多个团队，对日本血吸虫生殖发育过程中重要的蛋白编码基因进行了较为深入的研究，但是对各种类型非编码RNA(miRNA,lncRNAs,snoRNA等)及其在血吸虫生殖发育过程中的作用研究较少。近年来，大量研究表明，长的非编码RNA(long non
‑
coding RNA，lncRNAs)是基因调控的主要参与者，能够在多个物种的发育和生殖中发挥关键作用，涉及调控组织器官发育，性别决定和性腺发生、性激素反应、减数分裂、配子发生等重要生物学过程。因此，申请人推测lncRNAs介导的转录及转录后调控可能在日本血吸虫雌雄合抱至生殖发育成熟的过程中发挥了关键作用。
[0004]由于技术手段的缺乏，血吸虫中lncRNAs的功能研究相对匮乏。目前，主要是通过生物信息学的方法，基于共表达相关网络来识别可能对编码基因起调控作用的潜在lncRNAs。Kim等通过收集血吸虫胞蚴时期的样本进行转录组测序，鉴定了711个胞蚴时期特有的lncRNAs，并且通过构建lncRNAs
‑
mRNA共表达网络并鉴定了具有潜在调控能力的中枢lncRNAs。Maciel等人应用加权基因共表达网络分析了曼氏血吸虫中所有生命周期的lncRNAs和mRNA，并计算得出了具有组织特异性和时期特异性的模块网络，这些结果显示了血吸虫的lncRNAs以时期特异性的方式表达并且具有共表达模式，为lncRNAs的调控功能的研究提供了参考。此外，令人的兴奋的是，血吸虫lncRNAs的功能探索也取得了一定的结果，Silveira等在体外通过RNA干扰敲低曼氏血吸虫中SmLINC156349基因后，可以导致曼氏血吸虫粘附、运动和配对障碍、生存能力降低20％以及雌虫产卵减少33％并且虫卵发育缺陷。这些结果都显示了将lncRNAs表征为潜在的抗血吸虫治疗靶点的巨大潜力，以及进一步研究lncRNAs在血吸虫中调控机制的重要性。

技术实现思路

[0005]针对现有技术的不足，本专利技术旨在提供一种靶向长链非编码的双链RNA，该双链RNA能够抑制血吸虫的生长发育，减少虫卵产生，有效减轻宿主肝脏的病理损伤，也是首次证实长链非编码RNA(Long non
‑
coding RNA)可作为抗血吸虫药物靶点。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术提供的一种靶向长链非编码的双链RNA及其应用，其特征在于，所述双链RNA的正义链的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
[0007]本专利技术还提供所述的双链RNA在制备抗血吸虫药物中的应用。
[0008]具体的，所述血吸虫为日本血吸虫。
[0009]具体的，所述双链RNA在体外抑制日本血吸虫虫体产卵方面的作用。
[0010]具体的，所述双链RNA在体内抑制日本血吸虫生长发育方面的作用。
[0011]具体的，所述双链RNA在体内减轻日本血吸虫对宿主肝脏病理损伤方面的作用。
[0012]具体的，所述药物的剂型为注射剂、口服剂、口含片、喷雾剂、混悬剂、胶囊剂、片剂、丸剂或颗粒剂。
[0013]具体的，所述药物还包括药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂中的一种或几种，也包括以生理盐水作为溶剂制成的血吸虫dsRNANONSJP003385溶液。
[0014]本专利技术提供一种靶向长链非编码的双链RNA，通过动物实验，发现其对于血吸虫的虫体发育阶段具有较好的抑制效果，能够有效抑制虫体的生长发育和雌虫产卵，以及减轻对宿主的病理损伤，具有较大的应用价值和前景。
附图说明
[0015]为了更清楚地说明本专利技术的技术方案，下面对本专利技术所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0016]图1为dsRNANONSJP003385的体外干扰日本血吸虫的产卵数目统计情况；
[0017]图2为感染建立后虫体发育阶段注射dsRNANONSJP003385后日本血吸虫的回收率和虫长统计结果示意图；
[0018]图3为体视镜下观察干扰前后雌虫和雄虫虫体发育情况；
[0019]图4为感染建立后虫体发育阶段注射dsRNANONSJP003385后日本血吸虫生殖系统的发育情况；
[0020]图5为感染建立后虫体发育阶段注射dsRNANONSJP003385后小鼠肝脏的HE染色和Masson染色。
具体实施方式
[0021]下面将结合附图，对本专利技术中的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其它实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0022]实施例一、双链RNA的制备
[0023]1、目的基因的扩增
[0024](1)目的基因NONSJP003385扩增
[0025]根据日本血吸虫长非编码RNA注释库(注：尚未公开的数据)中非编码RNA NONSJP003385的序列进行引物设计，扩增长度为458bp，在引物5
’
端加上T7启动子序列，引物序列(5
’‑3’
)如下：
[0026]F:TAATACGACTCACTATAGGGAGATAGATTATGGCAGCTACTTG；(SEQ ID NO：3)
[0027]R:TAATACGACTCACTATAGGGAGAACCTTGTGGAGCCTAGAA；(SEQ ID NO：4)
[0028]PCR扩增程序为：94℃5min；94℃30s,60℃30s，72℃1min，35cycles；72℃10min；4℃last forever。对目的条带cDNA进行切胶回收，测序验证正确。
[0029]NONSJP003385基因扩增片段的核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示。
[0030](2)对照基因GFP扩增
[0031]根据实验室构建的GFP(绿色荧光蛋白，Green fluorescent protein)载体质粒的序列进行引物设计，扩增长度为451bp，在引物5
’
端加上T7启动子序列，引物本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向长链非编码的双链RNA，其特征在于，所述双链RNA的正义链的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。2.权利要求1所述的双链RNA在制备抗血吸虫药物中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述血吸虫为日本血吸虫。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述双链RNA在体外抑制日本血吸虫虫体产卵方面的应用。5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述双链RNA在...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡薇，成韶云，游艳敏，王吉鹏，徐斌，
申请(专利权)人：中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所国家热带病研究中心，
类型：发明
国别省市：