一种抑菌活性提高的抗菌肽ATMP7突变体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抑菌活性提高的抗菌肽ATMP7突变体及其应用。本发明专利技术在天然抗菌肽ATMP7的氨基酸序列的基础上，通过氨基酸定点饱和突变和随机突变相结合的方式，获得了抑菌活性显著提高的抗菌肽突变体A7

【技术实现步骤摘要】
一种抑菌活性提高的抗菌肽ATMP7突变体及其应用


[0001]本专利技术属于生物化学
，具体涉及一种抑菌活性提高的抗菌肽ATMP7突变体及其应用。

技术介绍

[0002]近年来，抗生素类促生长添加剂在饲料中的长期使用所带来的耐药性、药物残留和环境污染等问题已越来越受到人们的关注，禁止在饲料中添加抗生素的呼声越来越高。天然抗菌肽具有与抗生素相同的广谱抗菌作用，作为饲料添加剂使用可达到抑菌促生长目的，且抗菌肽具有无残留、无致病细菌耐药性的特点，属于环保型饲料添加剂。因此，研究开发抗菌肽作为饲料添加剂对提高畜禽产品品质、推动绿色畜牧业的发展具有重要意义。但抗菌肽在动物体内天然含量极微，天然资源有限；并且，抗菌肽分子量小，分离纯化困难，提取步骤烦琐、得率低；而抗菌肽的人工设计与改造是获得抗菌肽的快速、有效途径，已经成为抗菌肽开发的一个重要内容。因此，获得结构简单、抗菌活性高、制备容易的抗菌肽是抗菌肽开发研究中迫切的需求。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供了一种抑菌活性提高的抗菌肽ATMP7突变体及其应用。本专利技术提供的抗菌肽ATMP7突变体是通过定点饱和突变和随机突变相结合的方式筛选获得的，其抑菌活性更强，抗逆性更好，提高了其作为饲料添加剂在畜禽和水产养殖中的应用效果。
[0004]为实现上述目的，采用以下技术方案予以实现：
[0005]本专利技术提供了一种抑菌活性提高的抗菌肽ATMP7突变体A7
‑
M1，所述突变体A7
‑
M1的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示，其由氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的抗菌肽ATMP7的第31位的谷氨酸变为天冬酰胺获得。
[0006]本专利技术提供了一种抑菌活性提高的抗菌肽ATMP7突变体A7
‑
M2，所述突变体A7
‑
M2的氨基酸序列如SEQ ID NO:21所示，其由所述的突变体A7
‑
M1的第35位的丝氨酸变为丙氨酸获得。
[0007]本专利技术提供了一种抑菌活性提高的抗菌肽ATMP7突变体A7
‑
M3，所述突变体A7
‑
M3的氨基酸序列如SEQ ID NO:22所示，其由所述的突变体A7
‑
M1的第35位的丝氨酸变为苯丙氨酸获得。
[0008]本专利技术提供了一种抑菌活性提高的抗菌肽ATMP7突变体A7
‑
M4，所述突变体A7
‑
M4的氨基酸序列如SEQ ID NO:23所示，其由所述的突变体A7
‑
M1的第35位的丝氨酸变为亮氨酸酸获得。
[0009]本专利技术提供了一种抑菌活性提高的抗菌肽ATMP7突变体A7
‑
M5，所述突变体A7
‑
M5的氨基酸序列如SEQ ID NO:24所示，其由所述的突变体A7
‑
M1的第2位的脯氨酸变为赖氨酸、第4位的脯氨酸变为亮氨酸、第6位的色氨酸变为异亮氨酸、第15位的蛋氨酸变为异亮氨
酸、第26位的丙氨酸变为苯丙氨酸、第28位的脯氨酸变为谷氨酰胺以及第32位的缬氨酸变为异亮氨酸获得。
[0010]本专利技术提供了一种抑菌活性提高的抗菌肽ATMP7突变体A7
‑
M6，所述突变体A7
‑
M6的氨基酸序列如SEQ ID NO:25所示，其由所述的突变体A7
‑
M1的第2位的脯氨酸变为赖氨酸、第4位的脯氨酸变为亮氨酸、第6位的色氨酸变为异亮氨酸、第15位的蛋氨酸变为异亮氨酸、第26位的丙氨酸变为甘氨酸、第28位的脯氨酸变为谷氨酰胺以及第32位的缬氨酸变为异亮氨酸获得。
[0011]本专利技术提供了一种抑菌活性提高的抗菌肽ATMP7突变体A7
‑
M7，所述突变体A7
‑
M7的氨基酸序列如SEQ ID NO:26所示，其由所述的突变体A7
‑
M1的第2位的脯氨酸变为赖氨酸、第4位的脯氨酸变为亮氨酸、第6位的色氨酸变为异亮氨酸、第15位的蛋氨酸变为异亮氨酸、第26位的丙氨酸变为亮氨酸、第28位的脯氨酸变为谷氨酰胺以及第32位的缬氨酸变为异亮氨酸获得。
[0012]本专利技术还提供了所述的抗菌肽ATMP7突变体在制备抑菌剂中的应用。
[0013]进一步的：所述抗菌剂为抑制革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的制剂。
[0014]进一步的：所述革兰氏阳性菌包括金黄色葡萄球菌、魏氏梭菌和链球菌；所述革兰氏阴性菌包括大肠杆菌、副溶血弧菌、黄海希瓦氏菌、气单胞菌和溶藻弧菌。
[0015]本专利技术还提供了所述的抗菌肽ATMP7突变体在制备动物饲料添加剂中的应用。
[0016]进一步的：所述动物包括为牛、羊、猪、鸡、鸭、鱼类、虾和蟹。
[0017]进一步的：所述鱼类为鲫鱼、鲤鱼、罗非鱼、大菱鲆、草鱼、鲢鱼、鲈鱼、鳙鱼、青鱼、鲮鱼、大西洋鲑、石斑鱼、虹鳟、团头鲂、鳊鱼、鳗鱼、大黄鱼、黄颡鱼、鳜鱼。
[0018]进一步的：所述抗菌肽ATMP7突变体能够提高动物的日增重，降低料肉比。
[0019]进一步的：所述抗菌肽ATMP7突变体能够提高动物的免疫力。
[0020]进一步的：所述抗菌肽ATMP7突变体能够提高动物的增重率与特定增长率。
[0021]与现有技术相比，本专利技术的优点和有益效果是：
[0022]本专利技术中的抗菌肽ATMP7突变体A7
‑
M1、A7
‑
M2、A7
‑
M3、A7
‑
M4、A7
‑
M5、A7
‑
M6、A7
‑
M7分子量小、人工合成方便且成本低，对革兰氏阳性细菌的杀菌作用显著优于抗菌肽ATMP7，且其抗逆性更好，具有较好的耐热性能，在畜禽、水产动物养殖中，其能够显著降低养殖动物的料肉比和提高养殖动物的生长性能指标。因此，通过本专利技术生产的抗菌肽ATMP7突变体可以广泛应用于动物养殖、饲料、食品、医药等行业中，具有很好的应用前景。
附图说明
[0023]图1是所述抗菌肽ATMP7及其突变体对断奶仔猪日采食量的影响。
[0024]图2是所述抗菌肽ATMP7及其突变体对断奶仔猪日增重的影响。
[0025]图3是所述抗菌肽ATMP7及其突变体对断奶仔猪料肉比的影响。
具体实施方式
[0026]以下实施例只是本专利技术的一种较佳的方案，并非对本专利技术作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型，本专利技术的保护和权利要求范围不限于所提供的案例。
[0027]以下具体实施例中使用的试剂和生物材料如无特殊说明均可从商业途径获得。
[0028]1、菌株和载体
[0029]毕赤酵母GS115，质粒pPIC9K，大肠杆菌DH5α，大肠杆菌BL21，质粒pET21a(+)购自Invitroge本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抑菌活性提高的抗菌肽ATMP7突变体A7
‑
M1，其特征在于：所述突变体A7
‑
M1的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示，其由氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的抗菌肽ATMP7的第31位的谷氨酸变为天冬酰胺获得。2.一种抑菌活性提高的抗菌肽ATMP7突变体A7
‑
M2，其特征在于：所述突变体A7
‑
M2的氨基酸序列如SEQ ID NO:21所示，其由权利要求1所述的突变体A7
‑
M1的第35位的丝氨酸变为丙氨酸获得。3.一种抑菌活性提高的抗菌肽ATMP7突变体A7
‑
M3，其特征在于：所述突变体A7
‑
M3的氨基酸序列如SEQ ID NO:22所示，其由权利要求1所述的突变体A7
‑
M1的第35位的丝氨酸变为苯丙氨酸获得。4.一种抑菌活性提高的抗菌肽ATMP7突变体A7
‑
M4，其特征在于：所述突变体A7
‑
M4的氨基酸序列如SEQ ID NO:23所示，其由权利要求1所述的突变体A7
‑
M1的第35位的丝氨酸变为亮氨酸酸获得。5.一种抑菌活性提高的抗菌肽ATMP7突变体A7
‑
M5，其特征在于：所述突变体A7
‑
M5的氨基酸序列如SEQ ID NO:24所示，其由权利要求1所述的突变体A7
‑
M1的第2位的脯氨酸变为赖...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖志壮，于文君，方安然，孙建飞，付五兵，许睿显，王波，
申请(专利权)人：青岛红樱桃生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：