一种针对抗间皮素的高亲和力抗体及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种针对抗间皮素的高亲和力抗体及其应用。所述抗体的CDR3的氨基酸序列包括SEQ ID NO.10所示的序列。本发明专利技术的结合抗间皮素的抗体可特异性的结合间皮素抗原，且亲和力较好，将其作为抗原结合结构域构建嵌合抗原受体和CAR

【技术实现步骤摘要】
一种针对抗间皮素的高亲和力抗体及其应用
[0001]本申请是申请号为202111643701.3专利申请的分案申请(原申请的申请日为2021年12月29日，专利技术名称为一种抗间皮素的纳米抗体及其应用)。


[0002]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种针对抗间皮素的高亲和力抗体及其应用。

技术介绍

[0003]间皮素(mesothelin，MSLN)是一种细胞表面糖蛋白，MSLN的cDNA包含一段1884bp的开放阅读框，共有17个外显子，编码由628个氨基酸组成的相对分子质量约为69kDa的前体蛋白，经糖基化后被弗林蛋白酶切割产生相对分子质量分别约为40kDa和31kDa的2个蛋白，羧基端的疏水序列被糖基磷脂酰肌醇取代并锚定在细胞膜上，分子量约为40kDa，称为间皮素；氨基端部分释放进入血液或进一步降解，分子量约为31kDa，称为巨核细胞集落刺激因子(megakaryocyte
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potentiating factor，MPF)(参见：Chang,K.&Pastan,I.Molecular cloning of mesothelin,a differentiation antigen present on mesothelium,mesotheliomas,and ovarian cancers.Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 93,136
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140,doi:10.1073/pnas.93.1.136(1996).)。目前研究表明MSLN参与调控细胞的存活、增殖以及迁移，并且能使细胞抵抗部分细胞毒性药物的杀伤(Tang,Z.,Qian,M.&Ho,M.The role ofmesothelin in tumor progression and targeted therapy.Anti
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cancer agents in medicinal chemistry 13,276
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280,doi:10.2174/1871520611313020014(2013).)。
[0004]MSLN是一种分化抗原，在胰腺癌、恶性间皮瘤、卵巢癌和非小细胞肺癌等肿瘤组织中高表达(参见：Baldo,P.&Cecco,S.Amatuximab and novel agents targeting mesothelin for solid tumors.OncoTargetsand therapy 10,5337
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5353,doi:10.2147/ott.s145105(2017).)。免疫组织化学染色表明：在大多数的胰腺癌组织中(75％
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100％)MSLN表达呈阳性，然而，在大多数的慢性胰腺炎组织(80％
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100％)和几乎所有正常胰腺组织中MSLN表达呈阴性(参见：Baruch,A.C.et al.Immunocytochemical study ofthe expression of mesothelin in fine
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needle aspirationbiopsy specimens ofpancreatic adenocarcinoma.Diagnostic cytopathology 35,143
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147,doi:10.1002/dc.20594(2007).；Ibrahim,D.A.&Abouhashem,N.S.Diagnostic value of IMP3 and mesothelin in differentiating pancreatic ductal adenocarcinoma from chronic pancreatitis.Pathology,research and practice 212,288
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293,doi:10.1016/j.prp.2016.01.007(2016).)。上皮恶性胸膜间皮瘤(Epithelial malignant肋膜间皮瘤，MPM)普遍表达间皮素，而肉瘤样胸膜间皮瘤不表达间皮素，大多数浆液性上皮性卵巢癌和相关的原发性腹膜癌表达间皮素。
[0005]MSLN也存在于部分正常组织中，使用由Pastan小组开发的小鼠抗人间皮素抗体
PancreaticCarcinoma Metastases in a Phase 1Trial.Gastroenterology 155,29
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32,doi:10.1053/j.gastro.2018.03.029(2018).)。
[0008]综上所述，间皮素可作为肿瘤治疗的靶点，提供具备高特异性和亲和力的抗间皮素抗体，对于治疗肿瘤领域具有重要意义。

技术实现思路

[0009]针对现有技术的不足和实际需求，本专利技术的提供一种针对抗间皮素的高亲和力抗体及其应用。所述抗体具有高亲和力，能够作为嵌合抗原受体分子的抗原结合结构域制备CAR
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T细胞，所得CAR
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T细胞在肿瘤治疗方面具有较好的应用前景。
[0010]为达上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0011]第一方面，本专利技术提供一种抗间皮素的纳米抗体，所述纳米抗体的CDR1的氨基酸序列包括SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示的序列，所述纳米抗体的CDR2的氨基酸序列包括SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6或SEQ ID NO.7所示的序列，所述纳米抗体的CDR3的氨基酸序列包括SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9或SEQ ID NO.10所示的序列。
[0012]本专利技术中，以间皮素重组蛋白免疫一只未经免疫的羊驼，构建噬菌体展示纳米抗体库，根据该噬菌体展示纳米抗体库对抗间皮素抗体进行筛选，得到可特异性的结合间皮素抗原的单克隆抗体。
[0013]SEQ ID NO.1：GFTFRNYG。
[0014]SEQ ID NO.2：GFTFSRYG。
[0015]SEQ ID NO.3：GRTFSTYS。
[0016]SEQ ID NO.4：GFTFRRYG。
[0017]SEQ ID NO.5：IFSDGST。
[0018]SEQ ID NO.6：ISWIGGST。
[0019]SEQ ID NO.7：IYSDGST。
[0020]SEQ ID NO.8：ATDPGSGTTTLHRPFGS。
[0021]SEQ ID NO.9：AATKSEWRDPDY。
[0022]SEQ ID NO.10：ATDPGSGTTTLHRSFGS。
[0023]优选地，所述纳米抗本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种针对抗间皮素的高亲和力抗体，其特征在于，所述抗体的CDR1的氨基酸序列包括SEQ ID NO.2所示的序列；所述抗体的CDR2的氨基酸序列包括SEQ ID NO.7所示的序列；所述抗体的CDR3的氨基酸序列包括SEQ ID NO.10所示的序列。2.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包括权利要求1所述的针对抗间皮素的高亲和力抗体的编码基因。3.一种嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体包括信号肽、抗原结合结构域、铰链区、跨膜区和信号转导结构域；所述抗原结合结构域包括权利要求1所述的针对抗间皮素的高亲和力抗体。4.根据权利要求3所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述信号肽包括CD8α信号肽；优选地，所述铰链区包括CD8α铰链区；优选地，所述跨膜区包括CD8α跨膜区、CD28跨膜区或DAP10跨膜区中的任意一种或至少两种的组合；优选地，所述信号转导结构域包括免疫受体酪氨酸活化基序；优选地，所述信号转导结构域还包括共刺激分子，所述共刺激分子包括4
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1BB、CD28胞内区、OX40、ICOS或DAP10胞内区中的任意一种或至少两种的组合。5.根据权利要求4所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体包括CD8α信号肽、权利要求1所述的针对抗间皮素的高亲和力抗体、CD8α铰链区、CD8α跨膜区和免疫受体酪氨酸活化基序。6.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体包括权...

【专利技术属性】
技术研发人员：狄升蒙，石磊，陈鑫，冯冬歌，余学军，
申请(专利权)人：华道上海生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：